Glühwürmchen-Luciferase ist ein Protein mit einem Molekulargewicht von etwa 61 kDa, das die Oxidation von Luciferin zu Oxyluciferin in Gegenwart von ATP, Magnesiumionen und Sauerstoff katalysieren kann. Es emittiert Biolumineszenz mit einer Wellenlänge von etwa 560 nm. Renilla-Luciferase ist ein Protein mit einem Molekulargewicht von etwa 36 kDa, das die Oxidation von Coelenterazin zu Coelenteramid in Gegenwart von Sauerstoff katalysieren kann und während des Oxidationsprozesses eine Wellenlänge von 480 nm emittiert. über Biolumineszenz. Beide Biolumineszenzen können durch Chemilumineszenz gemessen werden. Das Nachweisprinzip ist in Abbildung 1 dargestellt:

Abbildung 1: Schematischer Firefly- und Renilla-Luciferase-Test

Normalerweise wird der 5'UTR oder Promotor des Zielgens vor der Glühwürmchen-Luciferase geklont oder der 3'UTR wird hinter der Glühwürmchen-Luciferase geklont, und die transkriptionsregulierende Wirkung des Promotors oder regulatorischen Elements wird durch Nachweis der Menge der Glühwürmchen-Luciferase nachgewiesen. Renilla-Luciferase wurde als interne Kontrolle verwendet, um Unterschiede in Zellzahl, Transfektionseffizienz usw. auszuschließen. Das Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit verwendet Luciferin als Substrat, um die Aktivität des Glühwürmchen-Luciferase-Reportergens nachzuweisen, und verwendet dann Coelenterazin als Substrat, um Renilla-Luciferin nachzuweisen, während die Fluoreszenzreaktion gelöscht wird. Enzym-Reportergenaktivität. Das Kit zeichnet sich durch hohe Empfindlichkeit aus.

Merkmale

Verbesserte Lysefähigkeit: Kann die überwiegende Mehrheit der Zelltypen vollständig lysieren.

Stärkeres Signal: Präzise Erkennung einer schwachen Promotorexpression.

Höhere Empfindlichkeit: Nachweisbar bis zu 10–20 Picomol Luciferase-Molekülen.

Größerer linearer Bereich: Der lineare Nachweisbereich übersteigt 8 Größenordnungen der Enzymkonzentration.

Anwendungen

Überprüfung von miRNA-Interaktionen mit 3'UTRs von Zielgenen

Überprüfung von lncRNA-miRNA-Interaktionen

Überprüfung der Transkriptionsfaktorregulation in der Promotorregion

Signalweganalyse

SNP-Aktivitätsanalyse

Technische Daten

Komponenten

Versand und Lagerung

Die Produkte des Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit sollten bei -15℃ gelagert werden. ~ -25℃ für 1 Jahr.

Zahlen

Abbildung 1. JASEN (Katze#: 11402) hat eine Fluoreszenzintensität, die mit der von Marke P vergleichbar ist.

Figur2. YERLEICHTERN (Katze#: 11402) Nachweisreagenzien interagieren mit Luciferase, um eine optimale Lumineszenzintensität zu erreichen. Nach der Zugabe von Renilla-Luciferasesubstrat wird die Biolumineszenz der Glühwürmchen-Luciferase gelöscht: Sie kann im Wesentlichen vollständig gelöscht werden.

Unterlagen:

Sicherheitsdatenblatt

11402 MSDS HB220209 DE.PDF

Benutzerhandbücher

11402 Handbuch HB241230 DE.pdf

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