Beschreibung
Hieff NGS™ Das MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS/ETS) wurde entwickelt, um rRNA und 45S ITS/ETS aus der Gesamt-RNA von Mensch, Maus und Ratte auf der Grundlage eines RNase H-basierten Workflows zu entfernen und mRNA und andere nicht-kodierende RNA beizubehalten. Dieses Kit ist sowohl für intakte als auch für teilweise degradierte RNA-Proben (z. B. FFPE-RNA) geeignet. Da degradierte FFPE-Proben normalerweise einen höheren Anteil an ITS/ETS enthalten als frische Gewebeproben, fügt dieses Kit Sonden in der menschlichen 45S ITS/ETS-Region hinzu, und die ITS-Entfernung kann den Anteil gültiger Daten in Rohdaten erheblich erhöhen.
Merkmale
- Hohe Spezifität: entfernt gezielt rRNA und ITS/ETS aus menschlichen Proben, insbesondere aus FFPE-Proben
- Hohe Kompatibilität der Vorlagenausgangsmenge: anwendbar auf 100 ng~1μg Probe
- Hoher Entfernungseffekt: Für rRNA, ITS und ETS in Proben von Menschen, Mäusen und Ratten beträgt der Entfernungseffekt mehr als 95 %
- Stabile Qualität: strenge Chargenleistung und Stabilitätsqualitätskontrolle
Anwendungen
- Genexpression-Forschung
- Alternative Spleißanalyse
- Nachweis und Entdeckung nicht-kodierender RNA
- Identifizierung selektiver Polyadenylierungsstellen
- Nachweis von Fusionsgenen
Technische Daten
Erschöpfungstechnologie | RNase H |
Probentyp | Gesamt-RNA von Mensch, Maus und Ratte |
Endprodukttyp | mRNA und andere nicht-kodierende RNAs |
Anzahl der Reaktionen | 24/96 Vorbereitungen |
Ausgangsmaterialmenge | 100 ng~1 μg Gesamt-RNA |
Ziel | Entfernen Sie rRNA und 45S ITS/ETS aus der menschlichen Gesamt-RNA |
Komponenten
Komponenten Nr. | Name | 12257ES24 (24 Zähne) | 12257ES96 (96 Zähne) |
12257-A | Hybridisierungspuffer | 72 μl | 288 μl |
12257-B | Sondenmischung (rRNA & ITS/ETS) | 48 μl | 192 μl |
12257-C | RNase H-Puffer | 72 μl | 288 μl |
12257-D | RNase H | 48 μl | 192 μl |
12257-E | DNase I-Puffer | 660 μl | 2×1320 μL |
12257-F | DNase I | 60 μl | 240 μl |
Versand und Lagerung
Alle Komponenten werden mit Trockeneis versendet und können ein Jahr lang bei -15 °C bis -25 °C gelagert werden.
Zahlen
- rRNA-Entfernungsspezifität
Bei herkömmlichen Proben können rRNA und ITS/EST zu über 98 % entfernt werden, während bei FFPE-Proben mit einer Integrität von etwa 50 % rRNA und ITS/EST zu über 95 % entfernt werden können. Gleichzeitig können auch FFPE mit schlechter Integrität effektiv entfernt werden.
Tabelle 1. rRNA-Entfernungsspezifitätseffekt
RNA Qualität | Entfernung Schema | Eingang | rRNA (%) | ITS/ETS (%) | Zuordnung (%) |
293T RNA-Molekül; RIN = 10 | entfernen rRNA | 1 μg | 0,19 | 4.6 | 98,28 |
entfernen rRNA Und ITS/ETS | 1 μg | 0,15 | 0,04 | 98,79 | |
FFPE RNA-Molekül; DV200 =90 % | entfernen rRNA | 500ng | 0,23 | 4,75 | 95,35 |
entfernen rRNA Und ITS/ETS | 500ng | 0,21 | 0,02 | 95,42 | |
FFPE RNA-Molekül; DV200 =50 % | entfernen rRNA | 500ng | 1.4 | 16.28 | 95,57 |
entfernen rRNA Und ITS/ETS | 500ng | 0,56 | 0,11 | 95,51 | |
FFPE RNA-Molekül; DV200 =20 % | entfernen rRNA | 1 μg | 0,35 | 67,61 | 58,4 |
entfernen rRNA Und ITS/ETS | 1 μg | 0,79 | 0,84 | 60,35 |
Hinweis: Verschiedene menschliche RNA-Proben wurden verwendet, um rRNA oder rRNA und ITS/ETS zu entfernen und Bibliotheken mit dem RNA-Bibliotheks-Prep-Kit nach ITS/ETS zu erstellen. Die Anteile von rRNA und ITS/ETS in Offline-Daten wurden durch Sequenzierung analysiert.
- Leistung der Sequenzierungsdaten
Tabelle 2.Leistung der Sequenzierungsdaten
Probe | DV200 | Bausatz | Sauber Frage 20 (%) | Sauber Frage 30 (%) | Sauber GC (%) | rRNA (%) | ITS/ETS (%) | einzigartig(%) |
1 | 24 % | JASEN Katze Nr. 12257 | 96,75 | 92,68 | 57,05 | 4,58 | 2.42 | 96,90 |
2 | 40 % | 96,56 | 92,42 | 55,31 | 1,93 | 0,63 | 96,45 | |
3 | 53 % | 97,4 | 93,52 | 45.19 | 0,23 | 0,01 | 98,08 | |
4 | 76 % | 97,67 | 93,78 | 51,28 | 0,44 | 0,01 | 93,63 |
[1] Tian S, Zhang B, He Y, et al. CRISPR-iPAS: eine neuartige dCAS13-basierte Methode zur alternativen Polyadenylierungsinterferenz. Nucleic Acids Res. 2022;50(5):e26. doi:10.1093/nar/gkac108(IF:16.971)
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