Beschreibung
Hieff NGS® RNA Lib Prep 384 CDI Primer für Illumina ist ein spezielles Linker-Primer-Kit für die RNA-Bibliothekskonstruktion der Illumina-Hochdurchsatz-Sequenzierungsplattform, aufgeteilt in 2 Sets, wobei jedes Set den in der Sequenzierungsbibliothek der zweiten Generation verwendeten PE-Adapter sowie 8 i5-Indexprimer und 12 i7-Indexprimer enthält. Insgesamt sind 16 i5-Indexprimer und 24 i7-Indexprimer in 2 Sets erhältlich, wodurch 384 verschiedene Kombinationen von doppelendig indexmarkierten Bibliotheken konstruiert werden können. Alle im Kit enthaltenen Reagenzien werden einer strengen Qualitätskontrolle und Funktionsüberprüfung unterzogen, um die Stabilität und Wiederholbarkeit der Bibliothekskonstruktion zu maximieren.
Komponenten
| NEIN. | Name | Volumen |
| 12414ES02 | PE-Adapter | 320 μl |
| RP 501-508 | 60 Jeweils μL | |
| RP 701-712 | 40 Jeweils μL | |
| 12415ES02 | PE-Adapter | 320 μL |
| RP 509-516 | 60 Jeweils μL | |
| RP 713-724 | 40 Jeweils μL |
Versand und Lagerung
Alle Komponenten werden trocken geliefert Eis und kann 18 Monate bei -15 °C bis -25 °C gelagert werden.
Notiz:
2) Der mit diesem Kit gelieferte PE-Adapter ist ein Allzweck-Kurzadapter, der eine PCR-Amplifikation erfordert, um eine vollständige Bibliothek zu erhalten. Index Primer bietet Barcode-Sequenz-Tags zur Unterscheidung von Proben während der Hochdurchsatz-Sequenzierung.
3) Jedes Set dieses Kits enthält 8 i5 Index Primer (RP 5xx) und 12 i7 Index Primer (RP 7xx), die miteinander kombiniert werden können, um 96 verschiedene Kombinationen von doppelseitigen Index-markierten Bibliotheken zu erstellen. 2 Sets bieten insgesamt 16 von i5 Index Primern und 24 von i7 Index Primern. Sie können den i5 Index Primer (oder i7 Index Primer) aus Cat#12414 und den i7 Index Primer (oder i5 Index Primer) in Cat#12415 verwenden, um bis zu 384 verschiedene Kombinationen von doppelseitigen Index-markierten Bibliotheken zu erstellen.
4) Erhitzen Sie den Adapter nicht, lassen Sie ihn bei Raumtemperatur langsam auflösen, und die Labortemperatur wird am besten auf 20-25 °C eingestellt. Der Adapter sind erforderlich, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden. Es wird empfohlen, sie in Aliquots aufzubewahren und für kurze Zeit bei 4 °C aufzubewahren.
5) Die mit dem Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer für Illumina® Kit erstellte Struktur der Sequenzierungsbibliothek ist wie folgt:
6) Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit bitte einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
7) Dieses Produkt ist nur für wissenschaftliche Forschungszwecke bestimmt!
Anweisungen
1. Verwendung von Adaptern: Gemäß der empfohlenen Dosierung für unterschiedliche Eingangsmengen im verwendeten Bibliotheksbauhandbuch auf eine geeignete Konzentration verdünnen.
2. Verwendung des Indexprimers: Bereiten Sie das Reaktionssystem gemäß dem chinesischen Bibliothekskonstruktionshandbuch für das Bibliotheksverstärkungssystem vor (wie in der folgenden Tabelle gezeigt), und stellen Sie die Reaktion gemäß dem Verfahren im Bibliothekskonstruktionshandbuch ein.
| Name | Volumen (μL) |
| 2× Hochpräziser DNA-PCR-Mix | 25 |
| RP 5xx | 2.5 |
| RP 7xx | 2.5 |
| Adapterligierte DNA | 20 |
| TGesamt | 50 |
Sequenzinformationen
PE-Adapter für Illumina:
5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´
5´-ACACTCTTTCCCTACAGGAGCTCTTCCGATC*T-3´
i5 Index Primer für Illumina:
5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5-Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´
i7 Index Primer für Illumina:
5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7-Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´
[i5-Index]8 Basispunkte von i5 Indexsequenz,[i7-Index]8 Basispunkte von i7 Indexsequenz.
Der jedem Primer entsprechende Indexname, die im Primer enthaltene Indexsequenz und die entsprechenden Indexsequenzinformationen während der Sequenzierung werden in der folgenden Tabelle angezeigt:
| I5 ICHIndex Name | I5 ICHIndex Sequenz | Indexsequenzinformationen während der Sequenzierung | |
| NovaSeq 6000 v1.0 Reagenzien, MiSeq, HiSeq 2000/2500 | NovaSeq 6000 Version 1.5 Reagenzien， MiniSeq, NextSeq, | ||
| RP501 | TATAGCCT | TATAGCCT | AGGCTATA |
| RP502 | ATAGAGGC | ATAGAGGC | GCCTCAT |
| RP503 | CCTATCCT | CCTATCCT | AGGATAGG |
| RP504 | GGCTCTGA | GGCTCTGA | TCAGAGCC |
| RP505 | AGGCGAAG | AGGCGAAG | CTTCGCCT |
| RP506 | TAATCTTA | TAATCTTA | TAAGATTA |
| RP507 | CAGGACGT | CAGGACGT | ACGTCCTG |
| RP508 | GTACTGAC | GTACTGAC | GTCAGTAC |
| RP509 | GACCTGTA | GACCTGTA | TACAGGTC |
| RP510 | ATGTAACT | ATGTAACT | AGTTACAT |
| RP511 | GTTTCAGA | GTTTCAGA | TCTGAAAC |
| RP512 | CACAGGAT | CACAGGAT | ATCCTGTG |
| RP513 | TAGCTGCC | TAGCTGCC | GGCAGCTA |
| RP514 | AGCGAATG | AGCGAATG | CATTCGCT |
| RP515 | TATGCTGC | TATGCTGC | GCAGCATA |
| RP516 | AGAAGACT | AGAAGACT | AGTCTTCT |
| I7 ICHIndex Name | I7 ICHIndex Sequenz | Indexsequenzinformationen während der Sequenzierung |
| RP701 | CGAGTAAT | ATTACTCG |
| RP702 | TCTCCGGA | TCCGGAGA |
| RP703 | AATGAGCG | CGCTCATT |
| RP704 | GGAATCTC | GAGATTCC |
| RP705 | TTCTGAAT | ATTCAGAAA |
| RP706 | ACGAATTC | GAATTCGT |
| RP707 | AGCTTCAG | CTGAAGCT |
| RP708 | GCGCATTA | TAATGCGC |
| RP709 | KATAGCCG | CGGCTATG |
| RP710 | TTCGCGGA | TCGCGAA |
| RP711 | GCGCGAGA | TCTCGCGC |
| RP712 | CTATCGCT | AGCGATAG |
| RP713 | CCTACACG | CGTGTAGG |
| RP714 | GTAGTGTC | GACACTAC |
| RP715 | TGTATGCA | TGCATACA |
| RP716 | CCAGACTG | CAGTCTGG |
| RP717 | AGGTGCCA | TGGCACCT |
| RP718 | TCACCTTG | CAAGGTGA |
| RP719 | GTATCTTT | AAAGATAC |
| RP720 | CAGCTCCA | TGGAGCTG |
| RP721 | TGCCCTT | TAAGGCGA |
| RP722 | CTAGTACG | CGTACTAG |
| RP723 | AGCGTAGC | GCTACGCCT |
| RP724 | GAGCTCG | CGAGGCTC |
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