Beschreibung
T4-Polynukleotid-Kinase (T4-PNK) ist eine 5'-Hydroxyl-Kinase, die den Transfer des γ-Phosphats von ATP zu den 5'-Hydroxyl-Termini von Oligo- oder Polynukleotidketten, einschließlich doppelsträngiger und einzelsträngiger DNA oder RNA, sowie zu 3'-Monophosphat-Nukleotiden erleichtert. Dieser Transfer ist reversibel. T4-PNK besitzt auch 3'-Phosphatase-Aktivität, die 3'-phosphorylierte Oligonukleotid-Termini, Desoxy-3'-Monophosphat-Nukleotide und Desoxy-3'-Diphosphat-Nukleotide dephosphoryliert. In Gegenwart von ADP kann T4-PNK als 5'-Phosphatase wirken und den Austausch von 5'-Phosphatgruppen an 5'-phosphorylierten Oligo- oder Polynukleotiden mit ATP fördern. Dieses Enzym wird häufig zum Aufbau von DNA-Bibliotheken und zur Endmarkierung zur Erzeugung von Sonden verwendet.
Anwendungen
Phosphorylierung der 5'-Enden von DNA oder RNA für die anschließende Ligation
Terminale Markierung von DNA oder RNA als Sonden und für Sequenzierungszwecke
5'-Phosphorylierung von Mononukleotiden mit einem phosphorylierten 3'-Ende zur Herstellung von pNp-Substraten für die Anheftung an die 3'-Enden von DNA oder RNA
Markierung der 5'-Enden von Oligonukleotiden, die eine 3'-Phosphatgruppe besitzen
Technische Daten
| SQuelle | Bakteriophage T4 |
| Molekulargewicht | 36,78 kDa |
| Konzentration | 10 U/µL |
| Einheit DDefinition | Eine Einheit ist definiert als die Menge, die erforderlich ist, um den Einbau von 1 nmol [γ-32P] ATP in eine Reaktion innerhalb von 30 Minuten bei 37°C zu katalysieren. |
Komponenten
| Komponenten NEIN. | Name | 12902ES76 | 12902ES86 | 12902ES92 |
| 12902-A | T4-Polynukleotid-Kinase(10 Einheiten/µl) | 50 μl | 250 μl | 1 ml |
| 12902-B | 10×T4 PNK-Puffer | 500 μl | 1 ml | 2×1 ml |
[Hinweis]: Der 10×T4 PNK-Puffer enthält kein ATP; Kunden müssen es selbst mit einer Referenzendkonzentration von 1 mM hinzufügen oder den T4 DNA-Ligase-Puffer verwenden.
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