Hieff ™ Vielseitige T4-DNA-Ligase (600 u/µl)- Thermotolerant und High Fidelity 12996Es
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Hieff ™ Vielseitige T4-DNA-Ligase (600 u/µl)- Thermotolerant und High Fidelity 12996Es

Hieff ™ Vielseitige T4-DNA-Ligase (600 u/µl)- Thermotolerant und High Fidelity 12996Es

SKU: 12996ES60
Größe: 60 ku
Preis:
$175.00

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Beschreibung

Hieff™ Vielseitigkeit T4 DNA Ligase ist eine Variante von T4 DNA Ligase. Dieses Enzym eignet sich zur Katalyse der Ligationsreaktion zwischen kohäsiven oder stumpfendigen Molekülen. Es ist ein Einzelenzymprodukt, das für die Verbindung von DNA-Fragmenten und Adaptern während des Bibliotheksvorbereitungsprozesses beim Next-Generation-Sequencing (NGS) entwickelt wurde. Das Hieff® Vielseitigkeit: T4 DNA Ligase wurde durch Hochdurchsatzsequenzierung umfassend validiert und weist eine außergewöhnliche Qualität auf.

Besonderheit

  • Hohe Wiedergabetreue
  • Thermotolerant

Erfahren Sie mehr über die vielseitige Entwicklung der T4-DNA-Ligase

Technische Daten

Quelle Rekombinantes E.coli
Speicherpuffer 50 mm Tris-HC1,100 mM KC1,0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50 % Glycerin, pH 7,5士0,2 bei 25 °C
Einheitendefinition In einem Ligationsreaktionssystem von 20 μl wird die Enzymmenge, die erforderlich ist, um die Ligation von mehr als 50 % der DNA-Fragmente zu katalysieren, wenn 6 μg λDNA-Hind III 30 Minuten lang bei 16 °C reagieren, als 1 Aktivitätseinheit (U) definiert.

Komponenten

Komponenten Name

12996ES60

60 KU

12996ES62

600 KU

12996-A Hieff® Vielseitige T4 DNA Ligase (600 U/µL) 100 μl 1000 μl
12996-B 10×T4 DNA-Ligase-Puffer 500 μl 3×1500 μL

Lagerung

Dieses Produkt sollte bei -25~-15℃ für 2 gelagert werden Jahre.

Figur

Abbildung 1. Veranschaulicht die Entwicklung der Versatility T4 DNA Ligase. (A) Rationales Design von T4-DNA-Ligase. (B) Screening thermotoleranter T4-DNA-Ligase-Mutanten bei 45 °C, was zur Identifizierung von Mutanten mit deutlich erhöhter spezifischer Aktivität führte. (C) Screening von T4-DNA-Ligase-Mutanten mit dem Ziel, die Bildung von Adapter-Dimeren während der DNA-Bibliotheksherstellung zu reduzieren. (D) Die Auswertung der Bibliothekserträge erfolgte nach einer einstündigen Wärmebehandlung bei 42 °C unter Verwendung der Methode zur DNA-Bibliotheksherstellung.


Tabelle 1. Yeasen Versatile T4 DNA-Ligase ist thermostabil. Das Enzym wurde 5 Tage lang bei 30 °C behandelt und mit der DNA Lib Prep-Methode analysiert.

Abbildung 2. Die Yeasen Versatile T4 DNA-Ligase weist eine höhere Wiedergabetreue auf, was durch eine geringere Adapterdimerbildung aufgrund von Selbstfehlligation angezeigt wird (A) und mit der DNA Lib Prep-Methode analysiert wurde (B).

Abbildung 3. Die Yeasen Versatile T4 DNA-Ligase weist eine höhere Wiedergabetreue auf, was sich in einer geringeren Adapter-Dimer-Bildung im Vergleich zu T4-Ligasen anderer Marken zeigt, die mit der DNA Lib Prep-Methode analysiert wurden.

Abbildung 4. Die Versatile T4 DNA Ligase reduziert die Rate falsch-positiver Ergebnisse bei FFPE-Proben. Mithilfe des DNA Lib Prep Kits, das die Versatile T4 DNA Ligase enthält, haben wir Bibliotheken für drei Arten von Standardproben (FFPE, gDNA, ctDNA) vorbereitet und einen direkten Vergleich mit dem Produkt des Lieferanten W durchgeführt.Die Daten zeigen, dass sowohl für gDNA als auch für ctDNA die Soft Clip- und falschen Chimärenraten von 12996 mit denen des Konkurrenten W vergleichbar sind. Bei FFPE-Proben zeigt 12996 jedoch einen deutlichen Vorteil.


Bitte hinterlassen Sie eine Nachricht, um sich nach den Leistungsvergleichsdaten zwischen diesem Enzym und anderen erstklassigen thermostabilen und herkömmlichen T4-DNA-Ligasen zu erkundigen.


Hinweise

1. Bitte operieren Sie mit Laborkittel und Einweghandschuhen，zu Ihrer Sicherheit.

2. Wenn im Puffer eine kleine Menge Niederschlag auftritt, ist das ein normales Phänomen. Bitte kehren Sie den Puffer um und mischen Sie ihn gründlich, bevor Sie ihn verwenden.

3. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.

Protokoll

1. Die derzeit gängigen DNA-Bibliotheksvorbereitungskits, die die ligationsbasierte Methode verwenden, erfordern in der Regel keine Reinigungsschritte nach der Endreparatur und dem A-Tailing. Die DNA-Fragmente werden direkt und ohne Reinigung einer Adapterligation unterzogen. Dieses Kit ist kompatibel mit den gängigen im Handel erhältliche Endreparatur- und A-Tailing-Systeme für die nahtlose Adapterligatur.

Bereiten Sie die folgende Reaktion in einem Mikrozentrifugenröhrchen auf Eis vor, mischen Sie sie vorsichtig durch Pipettieren oder Schütteln, zentrifugieren Sie sie kurz und inaktivieren Sie sie 15 Minuten lang bei 20 °C durch Hitze.

Tabelle 1. Reaktionssystem für die Adapterligation

Komponente

Volumen（μL）

Endkonzentration

dA-tailed DNA

60

1×

10×T4 DNA-Ligase-Puffer

10

0,1 μM-0.5 μM

50% PEG6000

12*

1 ng -400 ng

DNA-Adapter

5**

Hieff® Vielseitige T4 DNA Ligase (600 U/µL)

3~5***

Nukleasefreies Wasser

hoch bis 100

-

【Notiz】*Die 50%ige PEG6000-Lösung ist nicht im Kit enthalten, Sie müssen sie selbst herstellen

**Siehe Tabelle 2 für die Adaptermenge.

***Die Menge an T4-DNA-Ligase kann je nach Bedarf um 3–5 μL hinzugefügt werden.

2. Die Konzentration des Adapters beeinflusst direkt die Ligationseffizienz und die Bibliotheksausbeute. Übermäßiger Einsatz von Adaptern kann zu In mehr Adapter-Dimere, während eine geringe Nutzung die Verbindungseffizienz und die Bibliotheksproduktion beeinträchtigen kann. Tabelle 2 listet die empfohlene Adaptermenge für unterschiedliche Mengen an Eingangs-DNA auf.

Tabelle 2. Die empfohlene Adaptermenge für 100 pg-1 μg Input-DNA

DNA-Eingabe

Konzentration

0,1 ng

0,1 μM

1 ng

0,5 μM

10 ng

1 μM

25 ng

2 μM

100 ng~1000 ng

10 μM

【Notiz】:Die Menge an Adapter kann entsprechend den Anforderungen in der obigen Tabelle angepasst werden.

Zahlung und Sicherheit

American Express Apple Pay Diners Club Discover Google Pay Mastercard Visa

Ihre Zahlungsinformationen werden sicher verarbeitet. Wir speichern weder Kreditkartendaten noch Zugriff auf Ihre Kreditkarteninformationen.

Anfrage

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FAQ

Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von Yeasen Biotechnology geschützt. Markensymbole geben das Herkunftsland an, nicht unbedingt die Registrierung in allen Regionen.

Für bestimmte Anwendungen sind möglicherweise zusätzliche geistige Eigentumsrechte Dritter erforderlich.

Yeasen engagiert sich für ethische Wissenschaften und ist davon überzeugt, dass unsere Forschung kritische Fragen ansprechen und gleichzeitig Sicherheit und ethische Standards gewährleisten sollte.