Beschreibung
Das Uracil-spezifische Exzisionsreagenz (USER) ist ein Enzymcocktail, der aus Uracil-DNA-Glycosylase (UDG) und Endonuclease VIII (Endo VIII) besteht. Es ist in der Lage, einzelne Nukleotidlücken speziell an Uracilstellen zu erzeugen. UDG erleichtert die Spaltung der Uracilbase, was zur Bildung einer AP-Stelle (Apurin-/Apyrimidinstelle) führt, während die Integrität des Phosphodiester-Zuckerphosphat-Rückgrats erhalten bleibt. Die Endonucleaseaktivität von Endo VIII spaltet die Phosphodiesterbindungds sowohl auf der 3′ und 5′ Enden der Apurinstelle, wodurch der Desoxyribosezucker freigegeben wird, dem eine Base fehlt.
Merkmale
Keine Restnukleasen oder RNasen
Hohe Exzisionseffizienz
Anwendungen
RNA-strangspezifische Bibliothekskonstruktion
Uracil-spezifisches Exzisions-vermitteltes Klonen (USER-LIC)
DNA-Assemblierung, wie etwa die Assemblierung von TALE-Monomeren
Serielle Konstruktion mehrerer cDNA-Bibliotheken aus einzelnen Zellen
Technische Daten
| Konzentration | 1 U/µL |
| Einheit DDefinition | Eins Unter Einheit versteht man die Enzymmenge, die zum Einschneiden eines 34-mer doppelsträngigen Oligonukleotids mit einer einzigen Uracilbase in einem 10 μm großen Block erforderlich ist.M Reaktionssystem bei 37°C für 15 Minuten, was der Spaltung von 10 pmol des Substrats entspricht. |
| ICHAktivierung CKonditionen | 75℃, 10 Min |
Komponenten
| Komponenten-Nr. | Name | 14537ES50 | 14537ES72 |
| 14537-A | Uracil-spezifisches Exzisionsreagenz (1 (Einheiten/µl) | 50 μl | 250 μl |
| 14537-B | 10×Uracil-spezifisches Exzisionsreagenz Reaktionspuffer | 1.25 ml | 1.25 ml |
Versand und Lagerung
Die Produkte sollten bei -25℃ ~ -15℃ für 1 Jahr.
Zahlen
Abbildung 1. Vergleich der Exzisionseffekte
Hinweis: 10 pmol doppelsträngige DNA, die dUTP enthielt, wurden mithilfe des USER-Enzyms von Yeasen und eines vergleichbaren Produkts von Lieferant A herausgeschnitten. Die Ergebnisse der Agarosegelelektrophorese zeigten, dass die Exzisionseffekte des USER-Enzyms von Yeasen mit denen von Lieferant A übereinstimmten.
Figur2Vergleich der Koloniezahlen für USER-LIC-Klonierung
Hinweis: Ein 600 bp DNA-Fragment wurde mithilfe des USER-Enzyms von Yeasen und eines vergleichbaren Produkts von Lieferant A ligiert, um einen Vektor zu konstruieren, der dann in Escherichia coli und kultiviert. Die Anzahl der Kolonien auf der Kulturplatte wurde beobachtet und die Ergebnisse zeigten, dass die USER-LIC-Klonierungseffizienz unter Verwendung des USER-Enzyms von Yeasen der von Lieferant A überlegen war.
Unterlagen:
Sicherheitsdatenblatt
14537_Sicherheitsdatenblatt_Ver.EN20241210.pdf
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