Beschreibung
RNase HII ist ein internes Ribonuklease-Enzym, das aus der Pyrococcus abyssi und rekombinant exprimiert in E. Coli. Es erkennt den DNA-rN-DNA/DNA-Doppelstrang und schneidet an der Stelle, an der Ribonukleotide in die DNA eingebaut werden. Seine Aktivität bei einzelsträngiger RNA ist jedoch sehr gering und es zeigt keine Schneideaktivität bei dsDNA oder ssDNA. RNase HII schneidet an der Stelle eines einzelnen Ribonukleotidrests vom 5'-Ende und erzeugt nach dem Schneiden eine 5'-Phosphatgruppe und ein 3'-Hydroxylende. Dieses RNase HII-Enzym hat eine optimale Aktivität bei 70~75°C, ist zwischen 50°C und 75°C aktiv, hat jedoch bei Raumtemperatur eine sehr geringe Aktivität. Das Produkt ist hochgradig thermostabil, verliert nach 45-minütiger Inkubation bei 95°C fast nicht an Aktivität und ist mit verschiedenen PCR-Reaktionssystemen kompatibel.
Technische Daten
| Kat.-Nr. | 14539ES80/14539ES92 |
| Größe | 50 HE / 250 HE |
| Spezies | Pyrococcus abyssi, Pa |
Komponenten
| Name | 14539ES50 (50 HE) | 14539ES72 (250U) |
| RNase HII (2 U/µL) | 25 μl | 125 μl |
Lagerung
Dieses Produkt sollte bei -25 bis -15 °C gelagert werden. für 2 Jahre.
Produktanwendung
- Erkennung durch LAMP mit hochempfindlichen Sonden.
- RNase HII-abhängige PCR (rhPCR).
- Entfernung nicht übereinstimmender Ribonukleotide, die während der Polymerase-Kettenreaktion gebildet wurden.
- Abbau des RNA-Anteils von Okazaki-Fragmenten.
Hinweise
- Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
- Bitte tragen Sie zu Ihrer Sicherheit Laborkittel und Einweghandschuhe.
Zahlen
1. E. coli genomische DNA-Reste < 0,5 Kopien/100 U
Erkennung von Escherichia coli Die Untersuchung genomischer DNA-Rückstände in verschiedenen Chargen von RNase HII zeigte, dass der genomische DNA-Rückstand des Wirts von YEASENs RNase HII weit unter 0,5 Kopien/100 U liegt.
Abb. 4. Erkennung von Escherichia coli genomische DNA-Reste
2. 95°C Hitzebeständigkeitstest
Nach dem Erhitzen von RNase HII auf 95 °C für 0 bis 45 Minuten wurde die Enzymaktivität von RNase HII getestet. Die Ergebnisse zeigten, dass selbst nach 45 Minuten Erhitzen bei YEASENs RNase HII fast kein Verlust der Enzymaktivität auftrat.
Abb. 5. 95°C Hitzebeständigkeitstest
3. Keine Exonuklease, Nicking-Enzym oder RNase-Rückstände (1 U-Dosis)
Nach 4-stündiger Inkubation von 1 U verschiedener Chargen von RNase HII mit ihren jeweiligen Substraten DNA/RNA bei 37 °C ergab die Agarosegelelektrophorese, dass in RNase HII keine Exonuklease, kein Nicking-Enzym und kein RNase-Rückstand vorhanden war.
Abb. 6. Nachweis von Exonuklease-, Nicking-Enzym- und RNase-Resten
Unterlagen:
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Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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