Beschreibung
Tth DNA-Polymerase ist eine hitzebeständige DNA-Polymerase, die aus dem thermophilen Bakterium Thermus thermophilus HB8In Gegenwart von Mg²⁺ weist dieses Enzym 5′-3′-DNA-Polymerase-Aktivität und 5′-3′-Exonuklease-Aktivität auf, jedoch keine 3′-5′-Exonuklease-Aktivität, wodurch es für PCR-Amplifikationsreaktionen breit einsetzbar ist. In Gegenwart von Mn²⁺ zeigt das Enzym bei Temperaturen von 55–70 °C eine starke Reverse-Transkriptase-Aktivität und eignet sich daher für einstufige RT-PCR-Reaktionen.
Spezifikation
Einheitendefinition: Eine Aktivitätseinheit (U) ist definiert als die Enzymmenge, die 10 nmol der Gesamtnukleotide in 30 Minuten bei 74 °C in ein säureunlösliches Produkt einbaut, wobei aktivierte Lachssperma-DNA als Vorlage/Primer verwendet wird.
Komponente
| NEIN. | Name | Größe | |
| 14607ES72 (250 Einheiten) | 14607ES80 (1250 U) | ||
| 14607-A | Tth DNA-Polymerase (5 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14607-B | 5 × Tth RT-PCR Puffer | 1 ml | 4×1,25 ml |
| 14607-C | 10×Tth PCR Puffer (mit Mg2+) | 500 μL | 2×1,25 ml |
| 14607-D | 50 mM Mg(OAc)2 | 250 μL | 1,25 ml |
| 14607-E | dNTP-Mischung (je 10 mM) | 150 μL | 750 μL |
Versand und Lagerung
Versandmit Trockeneis. Lagern bei -20°C, mit einer Haltbarkeit von 2 Jahren.
Vorsichtsmaßnahmen
1) Wenn beim Auftauen eine kleine Menge Niederschlag im Puffer auftritt, ist dies normal. Bitte vor Gebrauch umdrehen und gründlich mischen.
2) Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit während des Betriebs einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
3) Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt!
Anweisungen
Empfohlenes PCR-Reaktionsverfahren:
1.Vorbereitung des Reaktionssystems
| Name | Lautstärke (μL) |
| 10×Tth PCR Puffer (mit Mg2+) | 5 |
| Tth DNA-Polymerase (5 U/μL) | 0,5 |
| dNTP-Mischung (je 10 mM) | 1 |
| Stromaufwärts Grundierung 10 μM | 2 |
| Flussabwärts Grundierung 10 μM | 2 |
| Vorlagen-DNA | 50 Seite- 1 μg |
| ddH2O | Zu 50 |
[Hinweis]: Die Mengen an Tth-DNA-Polymerase, Upstream- und Downstream-Primern und dNTP-Mischung können an spezifische experimentelle Anforderungen angepasst werden.
2. Zyklus-Setup
| Schritte | Temp(ºC) | Zeit | Zyklen |
| Vordenaturierung | 94 | 30 Sek.–5 Min. | 1 |
| Denaturierung | 94 | 30 Sek. |
35
|
| Glühen | 50-70 | 30 Sek. | |
| Verlängerung | 72 | 60 Sek./KB | |
| Letzte Verlängerung | 72 | 10 Minuten | 1 |
[Hinweis]: Die Reaktionsbedingungen können an spezifische experimentelle Anforderungen angepasst werden.
Empfohlenes RT-PCR-Reaktionsverfahren:
1. Vorbereitung des Reaktionssystems
| Name | Lautstärke (μL) |
| 5 × Tth RT-PCR Puffer | 10 |
| Tth DNA-Polymerase (5 U/μL) | 1,5 |
| 50 mM Mg(OAc)2 | 2.5 |
| dNTP-Mischung (je 10 mM) | 1,5 |
| Stromaufwärts Grundierung 10 μM | 2 |
| Flussabwärts Grundierung 10 μM | 2 |
| Vorlage RNA | 50 Seite- 1 μg |
| ddH2O | Zu 50 |
[Hinweis]: Die Mengen an Tth-DNA-Polymerase, Upstream- und Downstream-Primern und dNTP-Mischung können an spezifische experimentelle Anforderungen angepasst werden.
2.Zyklus-Setup
| Schritte | Temperatur (ºC) | Zeit | Zyklen |
| Reverse Transkription | 55-70 | 30 Minuten | 1 |
| Vor-Denaturierung | 94 | 30 Sek.–5 Min. | 1 |
| Denaturierung | 94 | 30 Sek. |
35
|
| Glühen | 50-70 | 30 Sek. | |
| Verlängerung | 72 | 60 Sek./KB | |
| Letzte Verlängerung | 72 | 10 Minuten | 1 |
[Hinweis]: Die Reaktionsbedingungen können an spezifische experimentelle Anforderungen angepasst werden.
Zahlung und Sicherheit
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