Beschreibung
Hifair™ Super Reverse Transcriptase ist eine Reverse Transkriptase der nächsten Generation, welche war eNkonstruiert von M-MLV. Dieses Enzym weist keine RNase H-Aktivität auf und weist eine deutlich verbesserte thermische Stabilität auf, die Reaktionstemperaturen bis zu 70 °C toleriert. Es eignet sich hervorragend für die effiziente reverse Transkription von RNA-Templates mit komplexen Sekundärstrukturen.
Anwendungen
Dieses Produkt eignet sich für RT-PCR-, RT-qPCR-, RT-LAMP-, RNA-seq- und cDNA-Syntheseexperimente. Die Reaktionstemperatur der reversen Transkription kann bis zu 70 °C erreichen.
Einheitendefinition
Eine Einheit (U) der Enzymaktivität ist definiert als die Menge an Enzym, die erforderlich ist, um 1 nmol dTTP innerhalb von 10 Minuten bei 37 °C in säureunlösliches Material einzubauen, wobei Poly(A).Oligo(dT) als Template-Primer verwendet wird.
Komponente
| Komponente | Name | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Super-Reverse-Transkriptase (200 U/μL) | 50 μl | 250 μl |
Lagerbedingungen
Bei -25 °C bis -15 °C bis zu 18 Monate lagern.
Gebrauchsanweisung
Verfahren zur Erststrang-cDNA-Synthese
1. RNA-Denaturierung (optionaler Schritt)
1. Durch die Denaturierung der RNA werden Sekundärstrukturen geöffnet, wodurch die Ausbeute an Erststrang-cDNA deutlich verbessert wird.
| Komponente | Volumen |
| RNase-freies ddH2O | bis 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) oder Random Primer (50 μM) oder Genspezifische Primer (2 μM) | 1 μL |
| Matrizen-RNA | Gesamt-RNA: 10 pg – 5 μg oder mRNA: 10 pg – 500 ng |
· 5 Minuten bei 65 °C erhitzen, dann 2 Minuten schnell auf Eis kühlen.
· Zentrifugieren Sie kurz, um die Reaktionsflüssigkeit zu sammeln, und geben Sie die Reaktionsmischung für die reverse Transkription wie unten gezeigt hinzu.
2. Reaktionsaufbau für die reverse Transkription (20-μL-System)
| Komponente | Volumen |
| Reaktionsgemisch aus dem vorherigen Schritt | 13 μL |
| 5× Reaktionspuffer | 4 μL |
| dNTP-Mischung (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® Super Reverse Transkriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNase-Inhibitor (40 U/μL) | 1 μL |
3. Einstellungen des Reverse-Transkriptionsprogramms
| Temperatur | Zeit |
| 25°C* | 5 Minuten |
| 50-70°C | 15-30 Minuten |
| 85°C** | 5 Minuten |
*Bei Verwendung von Random Primern 5 Minuten bei 25 °C inkubieren. Bei Verwendung von Oligo(dT)18 oder genspezifischen Primern kann dieser Schritt entfallen.
Eine Erhitzung auf 85 °C für 5 Minuten inaktiviert die Reverse Transkriptase und kann nach Bedarf angepasst werden.
Das Reverse-Transkriptionsprodukt kann sofort für nachfolgende PCR- oder qPCR-Reaktionen verwendet, kurzfristig bei -20 °C gelagert oder nach Aliquotierung zur Vermeidung von Gefrier-Auftau-Zyklen langfristig bei -80 °C gelagert werden.
Vorsichtsmaßnahmen
1. Sorgen Sie für eine saubere Laborumgebung; tragen Sie saubere Handschuhe und Masken. Stellen Sie sicher, dass alle experimentellen Verbrauchsmaterialien RNase-frei sind, um Kontaminationen zu vermeiden.
2. Führen Sie alle Vorgänge auf Eis durch, um einen RNA-Abbau zu verhindern.
3. Verwenden Sie hochwertige RNA-Proben, um eine effiziente Reverse Transkription sicherzustellen.
4. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
5. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit beim Umgang mit dem Produkt einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
Unterlagen:
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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