Beschreibung
Ribonuklease R (RNase R) aus Escherichia coliist eine magnesiumabhängige 3′→5′ Exoribonuklease, die dürfen verdaut alle linearen RNAs, aber keine Lariat- oder zirkulären RNA-Strukturen. Die meisten zellulären RNAs werden vollständig von RNase R verdaut, mit Ausnahme von tRNAs, 5S-RNA und Intron-Lariats. RNase R wird zur Anreicherung von circRNAs in biologischen Proben, zur Identifizierung von intronischen Lariat-Sequenzen, zur Identifizierung von exonischen circRNAs und zum Studium des alternativen Spleißens verwendet.
Merkmale
Garantierte Wirksamkeit und Qualität durch ISO 13485-Zertifizierung.
Erhältlich in Großpackungen oder maßgeschneiderten Konfigurationen.
Baut lineare RNA effektiv ab, während Lariat-Loops und zirkuläre RNAs erhalten bleiben.
Die selektive Verdauung linearer RNAs verbessert die Isolierung zirkulärer RNAs für die Proteinproduktion oder den Aufbau intronenbasierter cDNA-Bibliotheken.
Angebot an RNAse R in GMP-Qualität
Spezifikationen
| Quelle | Ein rekombinanter Escherichia coli Stamm, der das RNAse R-Gen trägt Escherichia coli |
| Optimale Temperatur | 37℃ |
| Speicherpuffer | 50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,1 % Triton® X-100, 1 mM DTT, 50% Glycerin, pH 7,5 bei 25℃ |
| Einheitendefinition | Eine Einheit wandelt 1 μg Poly-r(A) in säurelöslichen Nukleotiden in 10 Minuten bei 37°C in 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM KCl und 0,1 mM MgCl um.2. |
Anwendung
RNase R dient als grundlegende Komponente bei der zirkulären RNA-Synthese (circRNA). CircRNA verspricht eine Verbesserung der pharmazeutischen Stabilität und Biostabilität. Mit ihren kovalent geschlossenen Strukturen widerstehen circRNAs RNA-Exonukleasen. [1,2] RNase R findet breite Anwendung in verschiedenen Studien, darunter alternatives Spleißen, Intron-cDNA-Produktion und die Isolierung von Spleißintermediaten und Lariats.
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 14615ES25 | 14615ES72 | 14606ES80 |
| 14615 | RNase R (GMP-Qualität, 20 U/μL) | 25 μl | 250 μl | 1 ml |
Lagerung
Dieses Produkt sollte 2 Jahre lang bei -25–15 °C gelagert werden.
Anweisungen
Bereiten Sie das folgende Reaktionssystem in einem sterilen Mikrozentrifugenröhrchen vor
| Komponente | Volumen |
| 10×RNase R-Reaktionspuffer | 2 μL |
| RNA-Probe | 1 μg |
| RNase R (20 U/μL) | 2-4 HE |
| RNase-freies ddH2O | Bis zu 20 μL |
Inkubieren bei 37 ℃ für 10 - 30 Minuten.
Zahlen
Abbildung 1: Lineare RNA-Moleküle können durch Yeasen RNAse R verdaut werden.
Abbildung 2: CircRNA kann nicht durch Yeasen RNAse R verdaut werden.
Hinweise
- Die Aktivität der RNase R erfordert 0,1-1,0 mM Mg2+;
- Mit der Erhöhung der RNA kann die Reaktionszeit verlängert und die Enzymmenge entsprechend erhöht werden;
- Der EDTA-Gehalt in RNA-Proben kann die Aktivität von RNase R beeinflussen.
- Eine Inkubation bei 70 °C für 10 Minuten kann das Enzym inaktivieren.
Referenz
- Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Zirkuläre RNA-Impfstoffe gegen SARS-CoV-2 und neue Varianten. Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- Chen L, Wang C, Sun H et al. Die bioinformatische Toolbox zur Entdeckung und Analyse von circRNA. Brief Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
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