Beschreibung
T4-RNA-Ligase 1, auch bekannt als T4-RNA-Ligase, ist ein ATP-abhängiges Enzym, das die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen dem 5'-P-Terminus und dem 3'-OH-Terminus von einzelsträngiger RNA (ssRNA), einzelsträngiger DNA (ssDNA) oder Mononukleotidmolekülen katalysiert. T4-RNA-Ligase 1 kann eine Ligation zwischen ssRNA-Molekülen (am effizientesten), zwischen ssDNA und ssRNA (mit geringerer Effizienz) durchführen und kann auch zur Ligation zwischen ssDNA-Molekülen (mit sehr geringer Effizienz) verwendet werden. Es eignet sich zur Ligation von ssRNA-Molekülen und zur Anfügung von 5'-Adaptern beim Aufbau von miRNA-Bibliotheken für NGS.
Abbildung 1. Wirkungsmechanismus der T4-RNA-Ligase 1
Merkmale
Katalysiert die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen dem 5'-P-Terminus und dem 3'-OH-Terminus von einzelsträngigen RNA- (ssRNA-), einzelsträngigen DNA- (ssDNA-) oder Mononukleotidmolekülen.
Anwendungen
RNA-Klonierung
5'-Adapter beim Aufbau einer miRNA-Bibliothek für NGS
Zirkuläre RNA-Präparation
Technische Daten
| Einheitendefinition | Eine Einheit ist definiert als die Menge an Enzym, die erforderlich ist, um 1 Nanomol 5 -[32P] rA16 in 30 Minuten bei 37OC |
| Quelle | Rekombinantes Protein exprimiert durch Escherichia coli stammt vom Bakteriophagen T4 |
| Reaktionsbedingungen | 10×T4 RL1 Reaktionspuffer: 500 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 25OC), 100 mM MgCl2, 20 mM DTT; Optimale Inkubation bei 37OC |
| Inaktivierungsbedingungen | Heizung bei 65OC für 15 Minuten oder Kochen für 2 Minuten kann T4 RNA Ligase 1 inaktivieren. Alternativ kann die Zugabe einer Endkonzentration von 50 mM EDTA pH 8,0 die Reaktion von T4 RNA Ligase 1 beenden. |
Komponenten
| Komponenten NEIN. | Name | 14651ES80 | 14651ES90 |
| 14651-A | T4 RNA Ligase 1 (10 U/µL) | 500 μl | |
| 14651-B | 10×T4 RL1 Reaktionspuffer | 200 μl | 1 ml |
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