Beschreibung
ArCas12a, abgeleitet vom CRISPR-System von Agathobacter rectalis Bakterien und auch als Cpf1 bekannt, ist ein monomeres Protein, das aus 1263 Aminosäuren besteht. Als Mitglied der Klasse II (Typ V) des CRISPR/Cas-Systems funktioniert ArCas12a ausschließlich über ein einziges Effektorprotein und weist erhebliche Unterschiede zu Cas9 auf, z. B. zielt es auf Motive, die reich an T sind, benötigt keine transaktivierende crRNA, produziert klebrige Enden bei DNA-Doppelstrangbrüchen, nimmt an der RNA-Verarbeitung teil und besitzt DNA-Nuklease-Aktivität.
ArCas12a fehlt die HNH-Domäne und kann seine RuvC-Domäne unabhängig nutzen, um die thyminreiche PAM-Region (T) am 5'-Ende der Zielnukleinsäure unter Anleitung von CRISPR-RNA (crRNA) zu erkennen und die Spaltung der Ziel-DNA einzuleiten. Es wurde erfolgreich zur Genomeditierung bei vielen Säugetieren und Pflanzen eingesetzt. Darüber hinaus weist ArCas12a eine Transspaltungsaktivität auf, die in der Lage ist, nicht-zielgerichtete einzelsträngige DNA (ssDNA) im Reaktionssystem wahllos zu schneiden.
Im Vergleich zu anderen LbCas12a/AsCas12a weist ArCas12a eine höhere Temperaturanpassungsfähigkeit auf (25-55OC), wodurch es für Anwendungen zur Genomeditierung und Nukleinsäureerkennung geeignet ist.
Merkmale
Breiter Reaktionstemperaturbereich: Zeigt Spaltaktivität im Temperaturbereich von 25-55OC
Geringe Nukleaserückstände: Keine Reste von Exonuklease, Nickase oder RNase
Cis-Spaltungsaktivität: Hocheffektive Spaltung doppelsträngiger DNA in vitro
Transspaltungsaktivität: Hohe Transspaltungsaktivität, geeignet für den Nukleinsäurenachweis
Anwendungen
Gen-Editierung mit CRISPR/Cas
Diagnostik und Nachweis basierend auf dem CRISPR/Cas-System
Andere Detektionsanwendungen kombiniert mit isothermen Nukleinsäureamplifikationstechnologien (RPA und LAMP) usw.
Technische Daten
| Quelle | Das Cpf1-Gen aus Agathobacter rectalis wird durch rekombinante Expression in E.coli |
| Molekulargewicht | 149 kDa |
| PAM-Sequenz | TTTN oder TTTV |
| Reaktionsbedingungen | 50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 7.9 @25OC |
| Konzentration | 10 µM |
| Reinheit | >95 % (SDS-SEITE) |
| Inaktivierungsbedingungen | 85OC, 5-10 Minuten |
Komponenten
| Komponenten NEIN. | Name | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | ArCas12a-Nuklease (10 μM) | 100 μl | |
| 14702-B | 10×ArCas12a-Reaktionspuffer | 1 ml | 1 ml |
Versand und Lagerung
Dieses Produkt sollte bei -25 ~ -15 gelagert werdenOC für 2 Jahre.
Zahlen
Figur 1. Test der ArCas12a cis-Spaltungsaktivität: M: Marker; C: Vorlage für doppelsträngige DNA (dsDNA)
Notiz: Unter Anleitung von crRNA kann es dsDNA (600 bp) effizient spalten, um zwei Fragmente (200 bp + 400 bp) zu erzeugen.
Figur 2. Ergebnisse des ArCas12a-Transspaltungsaktivitätstests
Notiz: Unter Verwendung von dsDNA als Ziel wurden ArCas12a, crRNA und eine ssDNA-Reportersonde (mit einer fluoreszierenden Reportergruppe) für die Spaltung in vitro hinzugefügt. Sobald ArCas12a einen Komplex mit crRNA und der Ziel-DNA bildet, aktiviert es die Transspaltungsaktivität, schneidet die ssDNA-Reportersonde und emittiert dabei Fluoreszenz.
Unterlagen:
Sicherheitsdatenblatt
14702_Sicherheitsdatenblatt_Ver.EN20241205.pdf
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