Beschreibung
Die AapCas12b-Nuklease (auch bekannt als C2c1) ist eine DNA-Endonuklease, die durch tracrRNA:crRNA (oder sgRNA) vermittelt wird und aus dem thermophilen Bakterium Alicyclobacillus acidophilus. In Gegenwart einer PAM (TTN)-Sequenz an der Ziel-Doppelstrang-DNA (dsDNA) spaltet es spezifisch die Ziel-dsDNA, was zu Doppelstrangbrüchen und klebrigen Enden führt. AapCas12b kann spezifisch einzelsträngige DNA-Ziele unabhängig von der PAM-Sequenz spalten. Sowohl doppelsträngige als auch einzelsträngige DNA-Ziele können die Transspaltungsaktivität von AapCas12b aktivieren. Wenn das AapCas12b-Enzym einen ternären Komplex mit sgRNA und Ziel-DNA bildet, wird es für die unspezifische ssDNA-Transspaltungsaktivität aktiviert und schneidet jede beliebige Sequenz von ssDNA im System. Die optimale Spaltungsreaktionstemperatur für AapCas12b beträgt 60OC, wodurch es hitzebeständiger als AacCas12b und besser für die Verwendung mit LAMP geeignet ist, um isotherme Amplifikations-/CRISPR-Cas-Erkennungssysteme zu entwickeln.
Merkmale
Breiter Reaktionstemperaturbereich: Zeigt Spaltaktivität im Temperaturbereich von 37~65OC
Geringe Nukleaserückstände: Keine Reste von Exonuklease, Nickase oder RNase
Cis-Spaltungsaktivität: Hocheffektive Spaltung doppelsträngiger DNA in vitro
Transspaltungsaktivität: Hohe Transspaltungsaktivität, geeignet für den Nukleinsäurenachweis
Anwendungen
Gen-Editierung mit CRISPR/Cas
Diagnostik und Nachweis basierend auf dem CRISPR/Cas-System
Andere Detektionsanwendungen kombiniert mit isothermen Nukleinsäureamplifikationstechnologien (RPA und LAMP) usw.
Technische Daten
| Molekulargewicht | 130 kDa |
| Konzentration | 10 µM |
| Reinheit | >95 % (SDS-SEITE) |
| Einheitendefinition | Die Menge an Cas12b-Enzym, die erforderlich ist, um 1 pmol ssDNA-Sonde innerhalb von 1 Minute bei 60OC in einem Gesamtreaktionsvolumen von 20 μL, enthält 1×Reaktionspuffer, ist definiert als 1 U |
Komponenten
| Komponenten NEIN. | Name | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-A | AapCas12b-Nuklease (10 μM) | 100 μl | |
| 14808-B | 10×Reaktionspuffer | 1 ml | 1 ml |
SchiffPing und Speicher
Dieses Produkt sollte bei -25 ~ -15 gelagert werdenOC für 2 Jahre.
Zahlen
Figur 1. Überprüfung der cis-Spaltungsaktivität der AapCas12b-Nuklease
Notiz: In einem 20 μL Reaktionssystem mit Target dsDNA mit PAM-Sequenz, sgRNA, Cas12b und 1×Reaktionspuffer wurde die Mischung bei 60 inkubiertOC für 30 Minuten und dann inaktiviert bei 85OC für 5 Minuten. Die Ergebnisse der Agarose-Gelelektrophorese zeigten, dass alle drei Chargen der AapCas12b-Nuklease in der Lage waren, die dsDNA effektiv zu spalten, wobei die Spaltungseffizienz mit der der importierten Marke T* vergleichbar war.
Figur 2. Testergebnisse zur Transspaltungsaktivität der AapCas12b-Nuklease
Notiz: In einem 20 μL Reaktionssystem bestehend aus Target dsDNA mit einer PAM-Sequenz, sgRNA, Cas12b, Report ssDNA Fluoreszenzsonde und 1×Reaktionspuffer wurde die Mischung bei 60 inkubiertOC 1 Stunde lang, und das Fluoreszenzsignal wurde alle 30 Sekunden erfasst. Die Ergebnisse zeigten, dass in Gegenwart von Ziel-DNA, sgRNA und Cas12b zusammen die Report-ssDNA-Fluoreszenzsonde gespalten werden konnte, wodurch das Fluoreszenzsignal freigesetzt wurde.
Unterlagen:
Sicherheitsdatenblatt
14808_Sicherheitsdatenblatt_Ver.EN20241209.pdf
Benutzerhandbücher
Zahlung und Sicherheit
Ihre Zahlungsinformationen werden sicher verarbeitet. Wir speichern weder Kreditkartendaten noch Zugriff auf Ihre Kreditkarteninformationen.
Anfrage
Sie können auch mögen
FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
Für bestimmte Anwendungen sind möglicherweise zusätzliche geistige Eigentumsrechte Dritter erforderlich.