Beschreibung
PBCV-DNA-Ligase, auch bekannt als SplintR-Ligase, PBCV-1-DNA-Ligase oder Chlorella-Virus-DNA-Ligase, ist eine ATP-abhängige DNA-Ligase, die die Ligationsreaktion zweier benachbarter DNA-Stränge, die komplementär zu einer einzelsträngigen RNA sind, effizient katalysiert. In diesen beiden benachbarten DNA-Strängen wird derjenige, der die 3'-Hydroxylgruppe bereitstellt, als Akzeptor-DNA-Strang bezeichnet, während derjenige, der die 5'-Phosphatgruppe bereitstellt, als Donor-DNA-Strang bezeichnet wird. Während dieses Ligationsprozesses fungiert ein komplementärer RNA-Strang als „Schiene“ oder „Gerüst“ für die beiden DNA-Stränge. Die Aktivität der PBCV-DNA-Ligase ist viel höher als die der herkömmlichen T4-DNA-Ligase und zeigt eine starke Affinität zu DNA-Substraten mit RNA als Schiene (scheinbarer Km = 1 nM, wobei ein kleinerer Km-Wert eine stärkere Affinität anzeigt). Es kann einzigartige RNA-Arten auf subnanomolarer Ebene in komplexen Mischungen erkennen und eignet sich daher für Zielanreicherungsprozesse in Anwendungen wie der hochempfindlichen RNA-Erkennung, der Sequenzierung der nächsten Generation und der Molekulardiagnostik.
Merkmale
Keine Restnuklease, Endonuklease, RNase oder Phosphatase
Anwendungen
Nachweis von microRNAs und anderen kleinen RNAs basierend auf der Sondenmethode
Verbindung einzelsträngiger DNA durch „Klammer“-Fixierung durch komplementäre RNA-Sequenzen
Verwendung von DNA-Sonden zum Nachweis spezifischer RNA
Erkennung von SNP oder alternativem Spleißen
RASL-seq-Analyse
Technische Daten
| Quelle | Das DNA-Ligase-Gen von PBCV-1 stammt aus dem Chlorella-Virus und wird exprimiert in E.coli |
| Molekulargewicht | 34 KD |
| Konzentration | 25 U/µL |
| Einheit Definition | Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um mindestens 50% der Ligation von 2 pmol FAM-markiertem DNA:RNA-Hybridsubstrat innerhalb von 15 Minuten bei 25 °C zu erreichen.℃ in 1×PBCV-Ligase-Puffer |
| Inaktivierung CKonditionen | 65℃, 20 Min |
Komponenten
| Komponenten-Nr. | Name | 14962ES80 | 14962ES90 |
| 14962-A | PBCV-DNA-Ligase (25 U/µL) | 50 µL | 200 µL |
| 14962-B | 10 x PBCV Ligase Puffer | 1 ml | 1 ml |
Versand und Lagerung
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14962_Sicherheitsdatenblatt_Ver.EN20241210.pdf
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