Beschreibung
HifairTM Lyo-fähig ICH Multiplex-Ein-Schritt-RT-qPCR-Kit（UDG plus) ist ein Multiplex-Quantitative-PCR-Kit, das auf RNA als Vorlage basiert. Während des Experiments wurden Reverse Transkription und quantitative PCR im selben Röhrchen durchgeführt, was den Versuchsablauf vereinfachte und das Kontaminationsrisiko verringerte.Der Das einzigartige Puffer- und Enzymdesign gewährleistet die Verwendung bei der Herstellung und dem Produktdesign von einstufigen RT-qPCR-lyophilisierten Reaktionssystemen.
In diesem Kit wurde der Erststrang der cDNA effizient mit hitzebeständigen HifairTM Reverse Transkriptase und quantitativ amplifiziert durch UniconTM HotStart Taq DNA Polymerase. Das Kit enthält hauptsächlich optimierte myophilisierbarer Puffer, Enzymmischung usw. Darüber hinaus werden Faktoren hinzugefügt, die die nichtspezifische PCR-Amplifikation wirksam hemmen und die Amplifikationseffizienz mehrerer qPCR-Reaktionen verbessern können, wodurch die Amplifikationseffizienz sichergestellt und bis zu mehrere Amplifikationsreaktionen durchgeführt werden können.
Dieses Kit ist ausgestattet mit mYoprotektiv die zur Gefriertrocknung verwendet werden können.
Technische Daten
| Komponenten Nr. | 16645ES60 / 16645ES80 / 16645ES92 |
| Größe | 100 T / 1000 T / 10000 T |
Komponenten
| Name | 16645ES60 (100T) | 16645ES80 (1.000 t) | 16645ES92 (10.000 t) | |
| 16645-A | 4×HifairTM Lyo-Puffer | 600 μL | 6 ml | 60 ml |
| 16645-B | HifairTM Lyo-Enzym-Mischung | 100 μL | 1 ml | 10 ml |
| 16645-C | Lyoprotektor | 800 μl | 8 ml | 80 ml |
Lagerung
Der Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25 °C bis -15 °C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen sollte vermieden werden.
Anweisungen
1. Reaktionszusammensetzung:
| Komponenten | Volumen (μL) | Endkonzentration |
| 4×HifairTM Lyo-Puffer | 6 | 1× |
| HifairTM Lyo-Enzym-Mischung | 1 | - |
| Lyoprotektor | 8 | - |
| Primer-Mix (10 μM) | 1 | |
| Sondenmischung (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 μM |
| Vorlagen-RNA | 5 | - |
| DEPC H2O | bis 25 | - |
Notiz:Vor Gebrauch unbedingt gut vermischen und übermäßige Blasenbildung durch heftige Vibrationen vermeiden.
2. Optimiertes Fahrradprotokoll
(1) Standard-Amplifikationsverfahren
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus | |
| 1 | Umgekehrte Transkription | 50°CA | 1 | |
| 2 | Erste Denaturierung | 95°C | 5 Min | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C |
| 45 Zyklen |
| 60°CB | 30 SekC |
(2) Schnelles Amplifikationsprogramm
|
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus |
| 1 | Umgekehrte Transkription | 50°CA | 2 Min | 1 |
| 2 | Erste Denaturierung | 95°C | 2 Sek | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C |
| 45 Zyklen |
| 60°CB | 13 SekC |
Notiz:
a) Rücktranskription: Die Temperatur kann zwischen 42°C und 50°C gewählt werden für 10-15 Minuten.
b) Amplifikationsreaktion: Die Temperatur wird entsprechend dem Tm-Wert der entwickelten Primer angepasst.
c) Fluoreszenzsignalerfassung: Bitte stellen Sie den Versuchsablauf entsprechend den Vorgaben im Gerätehandbuch ein.
3. Anwendung Ausrüstung
Ausrüstung mit Rox:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
Ausrüstung mit Low Rox:ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 und 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
Ausrüstung ohne Rox:
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Roche Angewandte Wissenschaft LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96
Thermo Wissenschaftlicher PikoReal Cycler; Cepheiden SmartCycler®; Illumina Öko qPCR
Hinweise
Bitte tragen Sie die erforderliche persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie etwa Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten!
Bitte verwenden Sie RNasefreie Verbrauchsmaterialien für das Experiment.
Dieses Produkt ist für Forschung nur verwenden!
Lyophilisierungsverfahren
Dieses Kit kann direkt zur Gefriertrocknung verwendet werden, oder Sie können auf dieser Basis Hilfsstoffe für verschiedene Primer weiter erforschen.Das Standardverfahren zur Gefriertrocknung dieses Reagenzes ist wie folgt:
| Verfahren | Temperatur | Zeit einstellen | Dauer | Vakuum mbar |
| Vorgefriertrocknung | -45℃ | 10 Minuten | 60 Minuten | —— |
| Erste Phase der Gefriertrocknung | -45 ℃ | 10 Minuten | 60 Minuten | 0,01 mbar |
| -40 ℃ | 10 Minuten | 900 Minuten | 0,01 mbar | |
| -35 ℃ | 10 Minuten | 60 Minuten | 0,01 mbar | |
| -30 ℃ | 20 Minuten | 60 Minuten | 0,01 mbar | |
| -20 ℃ | 20 Minuten | 60 Minuten | 0,01 mbar | |
| 0 ℃ | 20 Minuten | 60 Minuten | 0.01mbar | |
| Druckaufbautest | ||||
| Analytische Trocknungsstufe | 5 ℃ | 10 Minuten | 20 Minuten | 0,01 mbar |
| 10 ℃ | 10 Minuten | 20 Minuten | 0,01 mbar | |
| 15 ℃ | 10 Minuten | 20 Minuten | 0,01 mbar | |
| 20 ℃ | 10 Minuten | 20 Minuten | 0,01 mbar | |
| 25 ℃ | 10 Minuten | 240 Minuten | 0,01 mbar | |
| Druckaufbautest | ||||
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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