Beschreibung
Hifair™ Das Superior Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ist ein Multiplex-Quantitative-PCR-Kit auf Basis von RNA als Vorlage. Während des Experiments wurden Reverse Transkription und quantitative PCR im selben Röhrchen durchgeführt, was den Versuchsablauf vereinfachte und das Kontaminationsrisiko verringerte.
In diesem Kit wurde der Erststrang der cDNA effizient mit dem hitzebeständigen Hifair™ synthetisiert. Reverse Transkriptase und quantitativ amplifiziert durch UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. Das Kit enthält hauptsächlich optimierten MP-Puffer und Enzyme. Die Pufferlösung enthält bereits Mg2+ und dNTP-Mix. Darüber hinaus werden Faktoren hinzugefügt, die die unspezifische PCR-Amplifikation wirksam hemmen und die Amplifikationseffizienz mehrerer qPCR-Reaktionen verbessern können, wodurch die Amplifikationseffizienz sichergestellt und bis zu mehrere Amplifikationsreaktionen durchgeführt werden können. Das dUTP/UDG-System wurde hinzugefügt, um das Risiko einer Aerosolkontamination wirksam zu verhindern.
Besonderheit
Merkmale
1. GGute Vielseitigkeit: Es eignet sich für die qPCR-Amplifikation und den Nachweis von Nukleinsäuren pathogener Mikroorganismen, menschlicher Genome, Pflanzen und anderer Arten.
2. Hohe Empfindlichkeit: Das sorgfältig optimierte Puffersystem verbessert die Nachweisempfindlichkeit von Vorlagen mit niedriger Konzentration auf bis zu 250 Kopien/ml.
3. dUP/UDG-System: Das dUTP/Hitzelabile UDG-Anti-Pollution-System wird eingeführt, um die Aerosolverschmutzung von Produkten effizient abzubauen, falsche Positivmeldungen zu reduzieren und authentische Ergebnisse sicherzustellen.
4. Unterstützunging schnelles Programm: kompatibel mit 40min Fastenprogramm.
5. Super Stabilität: stabilt 14 Tage lang bei 37 °C, 10-maliges Einfrieren und Auftauen.
Technische Daten
| Komponenten Nr. | 16901ES60 / 16901ES80 / 16901ES92 |
| Größe | 100 T / 1000 T / 10000 T |
Komponenten
| Name | 16901ES60 (100T) | 16901ES80 (1.000 t) | 16901ES92 (10.000 t) | |
| 16901-A | 500 μl | 5 ml | 50 ml | |
| 16901-B | Hifair™ Enzymmischung | 100 μl | 1 ml | 10 ml |
Notiz: 1) 5×Hifair™ MP Buffer ist die Abkürzung für Hifair™ Überlegener Multiplex One Step RT-qPCR-Sondenpuffer, der dNTPs, dUTP, Mg enthält2+, Stabilisatoren und mehr.
2) Hifair™ Enzymmischung enthält hauptsächlich Hifair™ Reverse Transkriptase, UNICON™ HotStart Taq DNA-Polymere, RNaseinhibitor, Und UDGase und so weiter.
Lagerung
Das Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25 °C bis -15 °C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen sollte vermieden werden.
Anweisungen
| Volumen (μL) | Endkonzentration | |
| 5×Hifair™ MP-Puffer | 5 | 1× |
| Hifair™ Enzymmischung | 1 | - |
| Primer-Mix (10 μM) | je 0,4 | 0,16 μM |
| Sondenmischung (10 μM) | je 0,2 | 0.08 μM |
| 1-5 | - | |
| RNase-freies H2O | bis 25 | - |
1. Reaktionszusammensetzung:
Notiz:Vor Gebrauch unbedingt gut vermischen und übermäßige Blasenbildung durch heftige Vibrationen vermeiden.
A) Primerkonzentration: Grundierung Mischung inklusive Multiplexprimer, je nach Situation kann die optimale Primerkonzentration zwischen 0,1 und 1,0 μM liegen.
B) Sondenkonzentration: Sondenmischung einschließlich Multiplexsondenmarkierungsdifferenzfluoreszenzgruppe, abhängig von der Situation kann die optimale Sondenkonzentration zwischen 0,05 und 0 liegen.5 μM.
C) Verdünnung der Vorlage: qPCR ist hochempfindlich und es wird empfohlen, die Vorlage zu verdünnen. Der Kontroll-Ct-Wert liegt zwischen 20 und 35.
D) Systemvorbereitung: Kopf mit Filterelement entfernen. Kreuzkontamination und Aerosolkontamination vermeiden.
2. Optimiertes Fahrradprotokoll
(1) Standard-Amplifikationsverfahren
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus | |
| 1 | Umgekehrte Transkription | 50°CA | 1 | |
| 2 | Erste Denaturierung | 95°C | 5 Min | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C | 15 Sek | 45 Zyklen |
| 60°CB | 30 SekC |
Notiz:
a) Reverse Transkription: Die Temperatur kann auswählen 50°C oder 55°C für 10-15 Minuten.
b) Amplifikationsreaktion: Die Temperatur wird entsprechend dem Tm-Wert der entwickelten Primer angepasst.
c) Fluoreszenzsignalerfassung: Bitte stellen Sie den Versuchsablauf entsprechend den Anforderungen der Instrument Handbuch.
(2) Schnelles Amplifikationsprogramm
|
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus |
| 1 | Umgekehrte Transkription | 50°C | 5 Min | 1 |
| 2 | Erste Denaturierung | 95°C | 30 Sek | 1 |
| 3 | Amplifikationsreaktion | 95°C | 5 Sek | 45 Zyklen |
| 60°C | 20 Sek |
Notiz:Wenn der aktuelle qPCR-Detektor eine schnelle Amplifikation unterstützt, führen Sie zur Bestätigung einen Vortest durch.
3. Anwendungsgeräte
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 und 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Angewandte Wissenschaft LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Wissenschaftlicher PikoReal Cycler; Cepheiden SmartCycler®; Illumina Öko-qPCR; SLAN 96S, 96P.
Hinweise
Bitte tragen Sie die notwendige persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten.!
Bitte verwenden Sie RNasefreie Verbrauchsmaterialien für das Experiment.
Dieses Produkt ist für Forschung nur verwenden!
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