Der Magnetisch Rest DNA Probe Vorbereitungskit Ist geeignet für Die Vorbehandlung von Rest DNA In verschieden biologisch Proben. Es kann die Trennung und Reinigung von Spuren von Wirtszell-Rest-DNA in Proben maximieren, indem einzigartige magnetische Perlen und ein sorgfältig optimiertes Puffersystem.

Der Magnet Kit zur Probenvorbereitung für Rest-DNA kann mit einer Vielzahl von Wirtszell-Rest-DNA verwendet werden Nachweiskits, einschließlich CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (Kat.-Nr. 41301ES), HEK293-Kit zur Erkennung von DNA-Rückständen in Wirtszellen (Kat.-Nr. 41302ES), Vero-Kit zur Erkennung von DNA-Rückständen in Wirtszellen (Kat.-Nr. 41303ES), und E.coli Wirtszell-DNA-Rückstandserkennungskit (Kat.-Nr. 41304ES).

Produktkomponenten

Versand und Lagerung

1. Teil I wird mit einem Eisbeutel geliefert, 4°C für 1 Jahr oder -20°C bei Langzeitlagerung.

2. Teil II wird bei Raumtemperatur versendet und 1 Jahr bei Raumtemperatur gelagert.

3. Teil III wird auf Trockeneis versendet und bei -20 °C gelagert für 1 Jahr.

4. Bitte prüfen Sie nach Erhalt der Ware die Vollständigkeit der drei Bestandteile Teil I, Teil II und Teil III und lagern Sie diese umgehend bei der entsprechenden Lagertemperatur.

Vorsichtsmaßnahmen

1. Bitte lesen Sie die Bedienungsanleitung vor der Verwendung sorgfältig durch und befolgen Sie sie strikt. Es wird empfohlen, die Probenverarbeitung auf einer Reinraumbank oder in einer biologischen Sicherheitswerkbank durchzuführen.

2. Achten Sie darauf, ob es zu Niederschlägen oder Trübungen der bei Raumtemperatur gelagerten Lösung kommt (insbesondere bei niedrigen Raumtemperaturen, z. B. im Winter). Um die Anwendungswirkung nicht zu beeinträchtigen, können Sie ein Wasserbad bei 37 °C nehmen, bis die Lösung klar ist.

3. Während der Elution können magnetische Kügelchen zurückbleiben. Vermeiden Sie daher beim Entnehmen der Proben das Ansaugen magnetischer Kügelchen.

4. Bitte wechseln Sie die Spitzen häufig, um eine Kreuzkontamination beim Arbeiten mit diesem Produkt zu vermeiden.

5. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit beim Arbeiten mit diesem Produkt persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie Laborkittel und Einweghandschuhe.

6. Dieses Produkt ist NUR für Forschungszwecke bestimmt!

Vorbereitung

1. Selbst mitzubringende Ausrüstung: Vortex-Schüttler, Wasserbad oder Metallbad, Zentrifuge, magnetisches Trenngestell, automatischer Nukleinsäureextraktor Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A oder vollautomatischer Nukleinsäureextraktor anderer Marken.

2. Selbst bereitgestellte Verbrauchsmaterialien: 10 μl – 1000 μl Filterspitzen mit geringer Adsorption, 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen mit geringer Adsorption, PCR-Röhrchen oder 96-Well-Platten und entsprechende Röhrchendeckel oder Membranen.

3. Selbst hergestellte Reagenzien: absoluter Ethanol (Analysenqualität), 1×PBS-Puffer (pH 7,4, frei von Mg- und Ca-Ionen), hochreines Wasser.

4. Bei der ersten Verwendung den Flaschen mit Waschlösung A* und Waschlösung B* die auf dem Etikett oder in der Gebrauchsanweisung angegebene Menge wasserfreien Ethanols zugeben. Vor Gebrauch gründlich mischen und gut kennzeichnen. Verschließen Sie die Flasche nach Gebrauch fest, um den Ethanolstand in der Flasche aufrechtzuerhalten.

Manuelle Rest-DNA-Extraktion

1. Probenverarbeitung

1.1 Wenn die Probe einen relativ hohen DNA-Gehalt enthält, wie z. B. ein Impfstoff, verdünnen Sie sie bitte im entsprechenden Verhältnis mit 1×PBS-Puffer (pH 7).4, frei von Mg- und Ca-Ionen) und dann extrahieren (die Verdünnung der Probe dient dazu, dass der Nachweiswert im linearen Bereich der Standardkurve liegt und dann die Genauigkeit des Nachweises sicherzustellen. Normalerweise kann eine 100-fache Verdünnung in Betracht gezogen werden).

1.2 Wenn die zu untersuchende Probe ist ein trockenes Pulver, verdünnen Sie es zu 10 mg/ml oder 100 mg/ml mit Reinstwasser vor Gebrauch.

1.3 Wenn die Probe eine komplexe Matrix aufweist, sollte ein Standardadditions- und Wiederfindungsexperiment durchgeführt werden, um die geeignete Verdünnung zu bestimmen.

2. 100 μL Probe in ein 1,5 mL Röhrchen geben, Anschließend 100 μl Lyse-Puffer und 10 μl Proteinase K hinzufügen, vortexen und 10 Sekunden lang mischen.

[Hinweise]: Fügen Sie 10 μL Proteinase K hinzu, wenn die Konzentration der Proteinprobe 0–100 mg/ml beträgt, und fügen Sie 20 μL Proteinase K hinzu, wenn die Konzentration der Proteinprobe 100–200 mg/ml beträgt.

3. Inkubieren bei 60°C für 20 Minuten.

4. Dann hinzufügen 400 μl der Bindungslösung, 9 μl Glykogen und 6 μl Poly A-Kaliumsalz, vortexen und gut mischen.

5. 20 μL Magnetkügelchen hinzufügen, gut vortexen und mischen und 10 Minuten stehen lassen. Bitte vortexen und 10 Sekunden lang mischen alle 3 Min.

[Hinweise]: Die Magnetkügelchen müssen vor Gebrauch verwirbelt werden, um sicherzustellen, dass die Magnetkügelchen gründlich resuspendiert sind. Nach 4-5 Probenzugabe auf einmal wird empfohlen, erneut zu mischen.

7. Zentrifugieren Sie die Lösung kurz und stellen Sie das Zentrifugenröhrchen für 1–2 Minuten auf das Magnetgestell. Nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert wurden, entfernen Sie vorsichtig die Flüssigkeit.

8. 500 μL Waschlösung A hinzufügen (Bitte prüfen Sie vor der Verwendung, ob absoluter Ethanol hinzugefügt wurde.) Durch Schütteln oder Vortexen mischen, um sicherzustellen, dass die magnetischen Perlen verteilt sind und sich keine magnetischen Perlen an der Wand des Zentrifugenröhrchens ansammeln.

9. Kurz zentrifugieren und das Zentrifugenröhrchen für 1–2 Minuten auf ein Magnetgestell stellen. Nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert sind, die Flüssigkeit vorsichtig entfernen.

10. 500 μL Waschlösung B hinzufügen (bitte vor Gebrauch prüfen, ob absoluter Ethanol hinzugefügt wurde), Durch Schütteln oder Vortexen wird sichergestellt, dass die magnetischen Perlen verteilt sind und sich keine magnetischen Perlen an der Wand des Zentrifugenröhrchens ansammeln.

11. Kurz zentrifugieren und das Zentrifugenröhrchen für 1–2 Minuten auf ein Magnetgestell stellen. Nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert sind, die Flüssigkeit vorsichtig entfernen.

12. Um sicherzustellen, dass die Restflüssigkeit so weit wie möglich entfernt wird, zentrifugieren Sie das Röhrchen 10 Sekunden lang schnell, legen Sie es auf ein magnetisches Gestell und saugen Sie die Restflüssigkeit mit einer 10-μL-Pipette ab.

13. Öffnen Sie die Kappe der Tube und lassen Sie sie 3 Minuten bei Raumtemperatur stehen. bis das Ethanol vollständig verdunstet ist. Wenn auf der Oberfläche der Magnetkügelchen keine Reflektionen oder Risse auftreten, bedeutet dies, dass das Ethanol vollständig verdunstet ist.

14. Das Röhrchen vom Magnetständer nehmen, 50-100 μL vorgewärmtes Eluat bei 65 °C hinzufügen, schütteln und gut mischen. Dann kurz zentrifugieren, 5 Minuten bei 65 °C inkubieren, alle 2-3 Minuten einmal schütteln und mischen.

15. Nochmals kurz zentrifugieren, das Zentrifugenröhrchen für 2 Min. auf einen Magnetständer stellen. Nachdem die Magnetkügelchen vollständig adsorbiert sind, die DNA-Lösung vorsichtig in ein neues Zentrifugenröhrchen überführen und bei -20°C bzw. bei -80°C für die Langzeitlagerung lagern.