Das Kit ist mit einem leistungsstarken Lysepuffer ausgestattet, der Proben (z. B. Zellen, Mäuseschwanz, Mäuseohr, Mäusezehe, Muskeln usw.) schnell lysieren kann, um genomische DNA freizusetzen. Das Lysat kann ohne Reinigung direkt zum PCR-Reaktionssystem hinzugefügt werden, was die Handhabung erleichtert. Darüber hinaus erfordert dieses Kit nur wenig Probeneinsatz, für Experimente können 5 mg Mäusegewebe oder 1–5 mm Mäuseschwanz verwendet werden.

Komponenten

Lagerung

19697-A (Lyse-Lösung) sollte bei 2~8℃ für 1 Jahre. Bei mehrmaliger Verwendung bitte in getrennten Verpackungen einfrieren, um Kreuzkontamination zu vermeiden. 19687-B (Stopplösung) sollte gelagert werden bei -25~-16℃ für 1 Jahre.

Anweisungen

Freisetzung genomischer Maus-DNA

1. Schneiden Sie 5–10 mg tierisches Gewebe oder einen 1–5 mm langen Mäuseschwanz in ein 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen*.
2. Geben Sie 90 μl Puffer ML in das obige Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es vorsichtig, um die Probe vollständig mit dem Lysat zu infiltrieren, und zentrifugieren Sie kurz.
3. 15 Minuten lang bei 95 °C in einem thermostatischen Inkubator inkubieren**.
4. 10 μL MT-Puffer hinzufügen, durch Mischen verrühren und Lyse beenden.
5. Optionaler Schritt: Zentrifugation bei 12.000 U/min für 2 Minuten.
6. Übertragen Sie das Überstand in ein neues Zentrifugenröhrchen und lagern Sie es bei 4 °C oder -20 °C oder verwenden Sie das Überstand direkt für eine anschließende PCR-Amplifikation.

* Damit die Lysereaktion reibungsloser ablaufen kann, sollte das Gewebe möglichst stark zerschnitten werden.

**Eine Inkubation bei 95°C für 15 Minuten ist für die meisten PCR-Anforderungen im Allgemeinen ausreichend. Wenn eine größere Menge DNA benötigt wird oder die Probe schwer zu lysieren ist, kann die Zeit auf 30 Minuten verlängert werden. Der Gewebeblock muss nicht vollständig lysiert werden, und der Rückstand kann in einem anschließenden Zentrifugationsschritt entfernt werden.

Freisetzung zellgenomischer DNA

Nachdem transfizierte Zellen 3 Tage lang in einer 48-Well-Platte kultiviert wurden und eine Zelldichte von etwa 70.000 Zellen/Well erreicht wurde, entfernen Sie das Medium so vollständig wie möglich. Fügen Sie dann 90 µl ML-Puffer direkt pro Well hinzu und pipettieren Sie jedes Well. Übertragen Sie alles auf die 96-Well-PCR-Platte. Nach der Behandlung mit einer PCR-Maschine bei 95 °C für 5–15 Minuten und Abkühlen fügen Sie 10 µl MT-Puffer hinzu und blasen Sie gleichmäßig und gründlich. Fügen Sie unter Verwendung eines hochpräzisen Enzyms (Kat.-Nr. 10164) oder Taq-Enzyms 0,5–2 µl Zelllysat zu jeweils 50 µl PCR-Reaktionssystem hinzu und führen Sie eine PCR durch.

Abbildung 1. Direkte PCR mit Zelllysat, behandelt mit 19697.

Hinweise

1. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte tragen Sie zu Ihrer Sicherheit eine Schutzbrille, einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
3. Um eine Kreuzkontamination zwischen den Proben zu vermeiden, ist es notwendig, den Rand des Probenahmegeräts oder den Teil, der in direktem Kontakt mit der Probe steht, nach jeder Probenahme in eine 2%ige Natriumhypochloritlösung einzutauchen, es mehrmals zu waschen und dann die Restflüssigkeit mit einem sauberen Papiertuch zu trocknen, bevor es wieder verwendet wird.Zur Vereinfachung des Tests können mehrere Probenahmegeräte vorbereitet und nach Gebrauch einheitlich gereinigt werden, um sicherzustellen, dass jede einzelne Probe mit einem kontaminationsfreien Probenahmegerät entnommen wird.
4. Es wird empfohlen, frisch entnommenes tierisches Gewebe zu verwenden. Bei langfristig gefrorenem Gewebe sollte wiederholtes Einfrieren und Auftauen so weit wie möglich vermieden werden, da es sonst zur Degradation der Vorlage führt und die PCR-Effizienz beeinträchtigt.

Unterlagen:

Benutzerhandbücher