Concanavalin A (ConA)-Perlen sind superparamagnetische Polymermikrokügelchen, die kovalent mit Concanavalin A gekoppelt sind. (ein pflanzliches Mannose/Glukose-bindendes Lektin, das aus den Samen von Getreidepflanzen isoliert wird) auf ihrer Oberfläche. Diese Perlen besitzen mehrere bemerkenswerte Eigenschaften, einschließlich Monodispersität und starker magnetischer Reaktivität. Wenn Ca²⁺ und Mg²⁺ Ionen vorhanden sind, können ConA-Magnetkügelchen verschiedene Biomoleküle wie Polysaccharide, Glykoproteine ​​und Glykolipide effizient und schnell trennen und reinigen, indem sie die Affinität zwischen ConA-Globulin A und den terminalen α-D-Mannose- und α-D-Glucosegruppen ausnutzen.

ConA-Magnetkügelchen bieten eine praktische Methode zum Trennen oder Fixieren von Zellen und sorgen so für minimalen Zellverlust bei nachfolgenden Waschschritten. Darüber hinaus können sie zum Sammeln und Fixieren von Zellkernen eingesetzt werden. Darüber hinaus finden diese Kügelchen Anwendung in innovativen Techniken wie CUT & Run und CUT & Tag, revolutionären Ansätzen, die in ChIP-seq-Experimenten verwendet werden.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass ConA-Magnetkügelchen leistungsstarke Werkzeuge für die effiziente Reinigung von Biomolekülen, die bequeme Zelltrennung und -fixierung, die Sammlung von Zellkernen und die Anwendung in modernsten experimentellen Techniken sind.

Technische Daten

Eigenschaften

Abbildungen und Tabellen

Tabelle 1. Die Yeasen ConA-Perlen haben eine hohe Aufnahmerate. Die Menge an Concanavalin A (ConA), die im Verhältnis zu den Mikrokugeln verwendet wird, wurde überprüft, um eine maximale Bindungskapazität sicherzustellen und gleichzeitig eine übermäßige Aggregation magnetischer Perlen nach der Zellbindung in CUT&Tag-Experimenten zu verhindern. Beispielsweise kann die Verwendung von 10 μL ConA-beschichteter Perlen eine Menge an Zellen binden, die dem E7-Niveau entspricht, mit einer Bindungseffizienz von über 98 %.

Abbildung 1. Yeasen ConA-Perlen weisen eine hohe Dispersität auf. Beim Etikettierungsprozess der Perlen wurde ein nicht-biologisches Dichtungsmittel gewählt, um einen effizienten Verschluss zu gewährleisten, der nicht durch Chargenschwankungen beeinträchtigt wird. Dies garantiert eine ausgezeichnete Versiegelung der magnetischen Perlen und bewahrt ihre hohe Monodispersität während der Lagerung der ConA-beschichteten Perlen, was für eine effiziente Bindung an Kohlenhydratmoleküle in nachfolgenden Experimenten von Vorteil ist.

Abbildung 2. CUT&Tag-Chromatin-Signalverteilung mit Yeasen Con A Beads.

Lagerung

Dieses Produkt sollte 2 Jahre lang bei 2–8 °C gelagert werden.

Anweisungen

Die folgenden Operationen dienen als Beispiel für die Reinigung von Glykoproteinen oder die Isolierung von Zellen. CUT&Tag Experimente , siehe Yeasen Cat# 12598ES für Protokoll.

1. Vorbereitung der Puffer

1) Vom Kunden bereitgestellt

1. Erforderliche Materialien (nicht im Lieferumfang enthalten): Magnetständer, Eppendorf-Röhrchen, PCR-Röhrchen, Magnetständer, Thermocycler usw.
2. Gleichen Sie die Perlen bei Raumtemperatur für mindestens 30 Minuten. Resuspendieren Sie die Perlen gründlich durch Vortexen oder Schütteln der Flasche.

1. Probenhandhabung ( am Beispiel von Säugetierzellen ）

1. Bereiten Sie Säugetierzellen vor (1,0 × 10 ⁴~1.0×10 ⁵ Zellen), zentrifugieren (4℃, 600×g, 3~5 min) und vorsichtig verwerfen der Überstand.
2. 140 μL Bindungspuffer hinzufügen, gut mischen und die Zellen resuspendieren, zentrifugieren und sammeln (4℃, 600×g, 3~5 min), vorsichtig verwerfen der Überstand.
3. 90 μl Bindungspuffer hinzufügen, gut mischen und die Zellen resuspendieren.
   Achtung: Fest aneinander haftende Säugetierzellen können durch partielle Verdauung mit einem Enzym wie Trypsin gewonnen werden. Bei Tiergeweben, Pflanzenzellen oder Pilzzellen erfordert die Gewinnung dispergierter Zellen oder Protoplasten häufig spezielle Behandlungen, die auf ihre spezifischen Eigenschaften zugeschnitten sind.

1. Bereiten Sie ConA-Perlen vor

1. Die ConA-Perlen vorsichtig zu einer vollständigen Suspension pipettieren, 10 μL der Perlensuspension in einem neuen 200-μL-Zentrifugenröhrchen.
2. 40 μl Bindungspuffer hinzufügen, gut mischen und 1 Minute auf dem Magnetständer stehen lassen. Den Überstand verwerfen, nachdem die magnetischen Perlen an der Seitenwand des Zentrifugenröhrchens adsorbiert sind.
3. 10 μl Bindungspuffer hinzufügen, gut mischen und die ConA-Perlen resuspendieren.

1. Beispielbindung

1. Fügen Sie die vorbereitete Zellprobe zu den vorbehandelten Perlen hinzu, pipettieren Sie die resuspendierten Perlen vorsichtig und inkubieren Sie sie dann auf einem umgekehrten Mischer (Raumtemperatur 30 Minuten oder 4 °C über Nacht).
2. Stellen Sie es 1 Minute lang auf einen Magnetständer und warten Sie, bis die magnetischen Perlen an der Seitenwand des Zentrifugenröhrchens adsorbiert sind. Entsorgen Sie das Überstand vorsichtig.
3. Hinzufügen 500 μL Elutionspuffer zum Zell-ConA-Beads-Komplex und Vorsichtig pipettieren Perlen resuspendieren, dann Stellen Sie es 1 Minute lang auf einen Magnetständer und warten Sie, bis die magnetischen Perlen an der Seitenwand des Zentrifugenröhrchens adsorbiert sind. Entsorgen Sie das Überstand vorsichtig.
4. Wiederholen Sie Schritt 3) noch drei- oder viermal.

1. Elution

1. Für Glykoproteine ​​50–250 μl Elutionspuffer hinzufügen, die resuspendierten Perlen vorsichtig pipettieren und dann auf einem umgedrehten Mischer inkubieren (Raumtemperatur für 10–30 Minuten). Nach dem umgedrehten Mischen 1 Minute auf einem Magnetständer stehen lassen und den Überstand in einem neuen 1,5-ml-Röhrchen sammeln, um SDS-PAGE oder Western Blot durchzuführen.
2. Für Zellen ist keine Elution erforderlich.

Hinweise

1. Gleichen Sie die ConA Perlen bei Zimmertemperatur vor Gebrauch.
2. Einfrieren vermeiden, da es sonst zu einer Zersetzung des Perlenmaterials bzw. zu einem Verlust der Aktivität kommt.
3. Um aktiv zu sein, erfordert ConA die Anwesenheit von Ca2+- und Mn2+-Ionen. Daher sollten während des Experiments Reagenzien vermieden werden, die EDTA oder andere Metallionenchelatoren enthalten.
4. Bei der Inkubation mit Zellen können ConA-Kügelchen aggregieren. Dies ist normal und hat keinen Einfluss auf die normale Verwendung der magnetischen Kügelchen.
5. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
6. Bitte arbeiten Sie zu Ihrer Sicherheit mit Laborkitteln und Einweghandschuhen.

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