Beschreibung
SUMO-Protease erkennt das komplette SUMO-Markierungsprotein (Small Ubiquitin-like Modifier) mit 100 Aminosäuren und schneidet SUMO effizient aus dem Fusionsprotein heraus. Im Vergleich zu den Erkennungsstellen von EK und TEV weist SUMO-Protease aufgrund ihrer langen Erkennungssequenz eine hohe Spezifität auf und behält ihre hohe Aktivität in einer Vielzahl von Reaktionsumgebungssystemen bei, wie z. B. Temperatur (4–30 °C), pH-Wert (5,5–9,5) usw. SUMO-Protease weist außerdem eine polymerisierte His-Markierung auf, die es einfach macht, SUMO-Protease zu entfernen und das Zielprotein durch Affinitätschromatographie zu reinigen.
Technische Daten
| Kat.-Nr. | 20410ES60 / 20410ES70 / 20410ES80 |
| Größe | 100 HE / 500 HE / 1000 HE |
| Enzymaktivität | 1 U/µL |
| Einheit Definition | Die Menge an Enzym, die benötigt wird, um schneiden >85 % des 3 μg Substrats in einem 1×rTEV-Puffer (50 mM Tris, pH 8,0, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT) bei 30℃ für 1 h wurde als Aktivitätseinheit definiert |
| Quelle | Ausgedrückt in Escherichia coli |
| Etikett | Polymerisierte sein Etikett |
| Proteinreinheit | > 90 % |
| Molekulargewicht | 26,55 kDa |
| Lagerung Puffer | 25 mM Tris-HCl, pH 8,0、0,1 % Igepal (NP-40)、250 mM NaCl、500 μM DTT、50% Glycerin |
Komponenten
Notiz:Die Enzymaktivitätsdefinition erfolgt über 10×Proteasepuffer (-Salz). SUMO-Protease hat eine relativ hohe Aktivität In 10×Proteasepuffer (-Salz), Für instabile Substrate sollte jedoch 10×Proteasepuffer (+Salz) ausgewählt werden. Wir bieten auch Reaktionspuffer 20410-B2 mit +Salz an.Wählen Sie den richtigen Puffer für Ihr Experiment. 20410-B2:500 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 % Igepal (NP-40), 1,5 M NaCl, 10 mM DTT；20410-B1:500 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 % Igepal (NP-40), 10 mM DTT. | ||||||||||||||||||||
Lagerung
Dieses Produkt sollte gelagert werden bei -85~-65℃ für 1 Jahr.
Anweisungen
- Im EP-Röhrchen wird folgendes Reaktionssystem formuliert:
- Bei 30 °C inkubieren, nach 1, 2, 4 und 6 Stunden 20 μL der obigen Reaktionslösung in ein separates EP-Röhrchen absaugen jeweils.
- 20 μL hinzufügen von 2×SDS Puffer in das EP-Röhrchen laden und bei -20 °C platzieren.
- Nachdem die Reaktion aller Proben abgeschlossen war, wurden die Proben 5 Minuten lang gekocht und 30 μL für die SDS-PAGE-Analyse entnommen. Bestimmen Sie die optimale Reaktionszeit.
| Komponenten | Volumen (μL) (Das Reaktionssystem kann im gleichen Maßstab verkleinert werden) |
| Fusionsprotein | 50 μg |
| 10×Proteasepuffer | 20 μL |
| SUMO-Protease (1U/μL) | 10 μl |
| ddH2O | bis 200 μL |
Notiz: Wenn das Fusionsprotein eine Behandlung bei niedrigen Temperaturen erfordert, kann die Reaktionslösung auf 4 °C erhitzt werden, um die Reaktionszeit zu verlängern und die Menge des SUMO-Enzyms zu erhöhen und so die Wirkung der enzymatischen Verdauung sicherzustellen.
Tisch 1. SUMO Protease Verdauungsaktivität bei unterschiedlichen Temperaturen
| Inkubation Zeit（H） | Verdauungsaktivität bei unterschiedlichen Temperaturen (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 25℃ | 30℃ | |
| 0,5 | 48 | 73 | 83 | 88 |
| 1 | 60 | 87 | 90 | 93 |
| 2 | 71 | 94 | 94 | 95 |
| 3 | 74 | 95 | 95 | 95 |
Hinweise
1. Bitte tragen Sie die erforderliche persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie etwa Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten.
2. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
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Anfrage
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