Das Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit dient zum Nachweis von Antikörpern und zugehörigen Antigenen, die direkt oder indirekt mit Meerrettichperoxidase (HRP) markiert sind. Das Prinzip des Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit besteht darin, dass Proteine ​​oder Nukleinsäuren nach der Elektrophorese auf die geprägte Membran übertragen werden und die Zielproteine ​​auf der Membran durch mit HRP markierte Primärantikörper und Sekundärantikörper gebunden werden oder die Nukleinsäuren auf der Membran direkt oder indirekt durch mit HRP markierte Sonden gebunden werden. Nach dem Waschen der Membran wurde die vom Produkt hergestellte ECL-Arbeitslösung verwendet, um die Membran mehrere Minuten lang bei Raumtemperatur zu inkubieren. Die geprägte Membran wurde in Plastikfolie eingewickelt und an der Röntgenbelichtungskassette befestigt. Dann wird der Röntgenfilm in einer Dunkelkammer auf die Membran gedrückt und mehrere Sekunden bis mehrere Stunden lang belichtet. Nach der Entwicklung und Fixierung können Protein- oder Nukleinsäurebänder deutlich auf dem Röntgenfilm angezeigt werden.

Dieses Kit verfügt über ein einzigartiges lumineszierendes Substratsystem, das die Hintergrundbelichtung reduziert und gleichzeitig ein neues Oxidationsmittel einführt. Dies verbessert die Stabilität des Kits erheblich und ermöglicht es, dass es bei Raumtemperatur bis zu einem Jahr stabil bleibt. Neben Röntgenstrahlen kann der Fluoreszenz-CCD-Scan auch direkt hauptsächlich für die WB-Erkennung und das Chemilumineszenz-Immunerkennungssystem verwendet werden.

Merkmale

Dank der hohen Empfindlichkeit und des hohen Signal-Rausch-Verhältnisses kann es Antigene mittlerer Güteklasse erkennen.

Leuchtet schnell und hell, das aufgedruckte Filmband kann unter einer Leuchtstofflampe beobachtet werden.

Zum Nachweis höherer Zielhäufigkeit eignen sich herkömmliche Proteinproben besonders gut.

Neues Oxidationsmittel, bei Raumtemperatur bis zu einem Jahr stabil.

Anwendungen

Chemilumineszenz-ELISA

Western Blot

Dot Blot-DNA/RNA

Southern Blot-DNA

Northern Blot-RNA

Technische Daten

Komponenten

Versand und Lagerung

Das Produkt wird bei Raumtemperatur versandt und kann bei Raumtemperatur ein Jahr lang gelagert werden. Bei längerer Nichtverwendung wird eine Lagerung bei 2 empfohlen.℃~8℃ um die Gültigkeitsdauer zu verlängern.

Hinweise: 36222-A lichtgeschützt lagern!

Anleitung (zB Röntgenfilm)

1. Routineelektrophorese, Transfermembran, mit HRP markierter Antikörper oder mit HRP markierte Nukleinsäuresonde, Inkubation und Waschmembran.

Hinweise: Die ECL-Leuchtlösung ist das Farbsubstrat von HRP, daher muss das Nachweissystem auf einem HRP-Enzym-markierten Antikörper oder einer Nukleinsäuresonde basieren.

2. Gleichzeitig mit dem letzten Waschen der Membran wurde die lumineszierende Arbeitslösung frisch zubereitet (100–200 μl lumineszierende Arbeitslösung/cm2 Membran): Nehmen Sie das gleiche Volumen von Reagenz A und B und mischen Sie es gut, um es später zu verwenden.

Hinweise: Für Reagenz A und Reagenz B müssen unterschiedliche Spitzen verwendet werden. Es wird empfohlen, die Arbeitsflüssigkeit sofort zu verwenden. Sie kann auch nach einigen Stunden bei Raumtemperatur noch verwendet werden, die Empfindlichkeit nimmt jedoch leicht ab.

3. Nehmen Sie die Membran mit einer flachen Pinzette heraus und legen Sie sie auf Filterpapier, damit die Lotion abtropfen kann. Lassen Sie die Membran nicht vollständig austrocknen. Tauchen Sie die Membran vollständig in die lumineszierende Arbeitslösung ein und achten Sie darauf, dass sie ausreichend mit der lumineszierenden Arbeitsflüssigkeit in Kontakt kommt. Inkubieren Sie sie 1–2 Minuten bei Raumtemperatur und bereiten Sie sie sofort für die Tablettenbelichtung vor.

4. Nehmen Sie die Membran mit einer Pinzette auf und legen Sie sie auf Filterpapier, um die lumineszierende Arbeitsflüssigkeit abtropfen zu lassen. Waschen Sie die lumineszierende Flüssigkeit jedoch nicht ab.

5. Legen Sie ein Stück Plastikfolie, das größer als die Membran ist, auf die Innenfläche der Röntgenfilm-Obscura. Befestigen Sie die bedruckte Membran an der Plastikfolie, falten Sie die Plastikfolie vollständig um die bedruckte Membran, entfernen Sie die Gasblase und falten Sie sie. Schneiden Sie den Rand der überschüssigen Plastikfolie ab. Verwenden Sie Filterpapier, um überschüssige leuchtende Arbeitsflüssigkeit aufzusaugen. Befestigen Sie die Plastikfolie, die die bedruckte Membran in der Obscura bedeckt, mit Klebeband, wobei das Proteinband nach oben zeigt.

6. Ein Stück Röntgenfilm wurde aus der Dunkelkammer genommen und auf die eingewickelte Membran gelegt. Der Film wurde angedrückt und 30 Sekunden bis 2 Minuten lang belichtet. Dann wurde der Film entwickelt und fixiert.

Hinweise: Die Belichtungszeit sollte der Belichtungsintensität entsprechend angepasst werden.Wenn der Hintergrund zu hoch ist, verwenden Sie zwei Röntgenfilme gleichzeitig.

Andere Belichtungsmethoden

Bei Verwendung von CCD-Fotografie: Die Membran kann in die Arbeitsflüssigkeit gelegt werden. Nach dem Booten gemäß den Gebrauchsanweisungen den Film entfernen und Fotos machen. Darüber hinaus können die Messparameter der Maschine je nach Situation angepasst werden, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu verbessern.

Hinweise

1. Beim Membrantransfer, Versiegeln und Inkubieren sollten Blasen vermieden werden. Darüber hinaus verhindert das Tragen von Handschuhen Fingerabdrücke auf der Membran und hält sie sauber.

2. Längere Belichtung oder übermäßiges Protein verdunkeln den Hintergrund und führen dazu, dass die Änderung der Bandstärke nicht mehr linear ist. Unterbelichtung verwischt die Bänder.

3. Manche Plastikfolien können die Fluoreszenz beim Einwickeln der bedruckten Membran löschen. Es sollte Plastikfolie von hoher Qualität gewählt werden.

4. Vermeiden Sie es, mehrere Membranen in dieselbe Waschmembranbox zu legen, da gegenseitige Adsorption oder Reibung einen tiefen Hintergrund verursachen kann.

5. Die Position und Größe der Bänder auf dem Film können mithilfe sichtbarer vorgefärbter Proteinmarker und Fluoreszenz-Autoradiographie-Belichtungsmarkierungen genau bestimmt werden.

6. Verwenden Sie ein Biotin-Avidin-System und vermeiden Sie die Verwendung von Milchverschluss, da dieser zu einem zu hohen Hintergrund führen kann.

7. Metalloxidpartikel können körnige Flecken auf der Membran verursachen. Vermeiden Sie die Verwendung rostiger Scheren und Pinzetten. Verwenden Sie flache Pinzetten aus Kunststoff.

8. Natriumazid (NaN3) kann die HRP-Aktivität hemmen. Zur Wiederherstellung von HRP-markierten Sonden oder Antikörpern sollte die Verwendung von NaN3 vermieden werden, ggf. nicht mehr als 0,01 %.

9. Dieses Produkt weist gemäß der üblichen chemischen Behandlung keine besondere Toxizität auf.

10. Bitte tragen Sie die notwendige persönliche Schutzausrüstung wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten.!

11. Nur für Forschungszwecke!

Unterlagen:

Sicherheitsdatenblatt

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Benutzerhandbücher

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Zitate und Referenzen:

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