Beschreibung
Hier ist die englische Übersetzung des Textes:
Anorganische Pyrophosphatase (PPase) katalysiert die Umwandlung eines Moleküls Pyrophosphat in zwei Moleküle Phosphationen. Bei Nukleinsäureamplifikationsexperimenten kann PPase das während der Reaktion entstehende anorganische Pyrophosphat hydrolysieren. Dies ist eine stark exergonische Reaktion, die das Reaktionsgleichgewicht in Richtung der Produktseite verschieben und so eine Hemmung des Reaktionssystems verhindern kann.
Im Produktionsprozess von mRNA-Impfstoffprodukten kann die Zugabe von PPase die mRNA-Ausbeute verbessern. Bei Produkten mit mRNA als Endprodukt ist die zugesetzte PPase jedoch eine exogene Substanz, die während des Reinigungsprozesses entfernt werden muss. Daher ist es notwendig, die Restmenge an PPase zu ermitteln, um die Wirksamkeit des Reinigungsprozesses bei der Entfernung von Proteinrückständen zu bewerten und zu bestätigen, ob die restliche PPase im mRNA-Impfstoffprodukt auf ein akzeptables Niveau gereinigt wurde.
Dieses Kit verwendet das Prinzip eines Doppelantikörper-Sandwich-Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) zum Nachweis von PPase-Rückständen. PPase-Standard- und Testproben werden einer vorbeschichteten Enzymplatte mit Anti-PPase-Antikörpern (36706-A) hinzugefügt, gefolgt von der Zugabe eines verdünnten biotinmarkierten Nachweisantikörpers (36706-C) und schließlich Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36706-D). Dadurch entsteht der Antikörper+Antigen+Antikörper-Biotin+SA-HRP-Komplex. Nach dem Waschen wird TMB-Substratlösung (36706-H) hinzugefügt, um Farbe zu entwickeln.
Unter der Katalyse des HRP-Enzyms wandelt sich TMB von farblos nach blau um und wandelt sich unter Einwirkung der Stopplösung (36706-1) schließlich nach gelb um. Die Intensität der gelben Farbe korreliert positiv mit der in der Probe nachgewiesenen Menge an PPase.
Komponenten
| NEIN. | Name | 36706ES48 | 36706ES96 |
| 36706-A | Anti-PPase beschichtete Mikrotiter Streifen | 48T | 96T |
| 36706-B* | Standard: PPase | 1 Phiole | 2×1 Fläschchen |
| 36706-C | Nachweisantikörper: Biotin-konjugiertes Antibodien | 60 μL | 120 μL |
| 36706-D | Streptavidin-HRP | 30 μL | 60 μL |
| 36706-E | Verdünnung Puffer 1 | 25 ml | 45 ml |
| 36706-F | Waschen Puffer Konzentrat (20×) | 25 ml | 50 ml |
| 36706-G | Verdünnung Puffer 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36706-H | TMB-Substrat | 8 ml | 15 ml |
| 36706-1 | Lösung stoppen | 5 ml | 10 ml |
| 36706-J | Plattenversiegler | 3 Stück | 5 Stück |
*Der Standard 36706-B ist ein gefriergetrocknetes Pulver.
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