Beschreibung
Bei Eukaryoten erfährt mRNA posttranskriptionelle Modifikationen und bildet am 5'-Ende eine spezielle Struktur, die sogenannte Cap-Struktur. Diese Struktur spielt eine wichtige Rolle bei der Stabilität, dem Transport und der Translation von mRNA. Das Capping-Enzym des Vacciniavirus ist ein wirksames Enzym, das die Bildung der Cap-Struktur katalysiert. Es besteht aus zwei Untereinheiten, D1 und D12, und besitzt RNA-Triphosphatase-Aktivität, Guanylyltransferase-Aktivität und Guanin-N7-Methyltransferase-Aktivität. Es kann die 7-Methylguanosin-Cap-Struktur (m7Gppp) an das 5'-Ende der RNA anhängen (m7Gppp5'N).
Das Capping-Enzym des Vacciniavirus ist in Gegenwart von Capping-Puffer (Capping-Puffer), Guanosintriphosphat (GTP), S-Adenosylmethionin (SAM) und anderen Komponenten in geeigneten Konzentrationen in der Lage, RNA innerhalb einer Stunde zu cappen und dabei die richtige Richtung sicherzustellen.
Dieses Kit verwendet das Prinzip eines Doppelantikörper-Sandwich-Enzymimmunoassays (ELISA), um die Restmenge des Capping-Enzyms des Vacciniavirus zu erkennen. Der Capping-Enzym-Standard des Vacciniavirus und die Testproben werden zu einer vorbeschichteten Enzymplatte mit Antikörpern gegen das Capping-Enzym des Vacciniavirus (36709-A) gegeben, gefolgt von der Zugabe eines verdünnten biotinmarkierten Capping-Enzym-Nachweisantikörpers (36709-C) und schließlich Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36709-D). Dadurch entsteht der Antikörper+Antigen+Antikörper-Biotin+SA-HRP-Komplex. Nach dem Waschen wird zur Farbentwicklung eine TMB-Substratlösung (36709-H) zugegeben.
Unter der Katalyse des HRP-Enzyms wandelt sich TMB von farblos nach blau um und wird unter Einwirkung der Stopplösung (36709-I) schließlich gelb. Die Intensität der gelben Farbe korreliert positiv mit der Menge des in der Probe nachgewiesenen Vacciniavirus-Capping-Enzyms.
Komponenten
| NEIN. | Name | 36709ES48 | 36709ES96 |
| 36709-A | Anti-Vaccinia Capping Enzyme beschichtet Mikrotiterstreifen | 48 T | 96 T |
| 36709-B* | Standard: Vaccinia-Capping-Enzym | 1 Phiole | 2 Phiole |
| 36709-C | Erkennung Antikörper: Biotin-konjugiert Antikörper | 60 μL | 120 μL |
| 36709-D | Streptavidin-HRP | 20 μL | 40 μL |
| 36709-E | Verdünnungspuffer 1 | 25 ml | 45 ml |
| 36709-F | WaschpufferkonzentratPreis (20×) | 25 ml | 50 ml |
| 36709-G | Verdünnungspuffer 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36709-H | TMB-Substrat | 8 ml | 15 ml |
| 36709-I | Lösung stoppen | 5 ml | 10 ml |
| 36709-J | Plattenversiegler | je 3 | je 5 |
*Der Standard 36709-B ist ein gefriergetrocknetes Pulver.
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