Doppelsträngige RNA (dsRNA) entsteht als Nebenprodukt bei der In-vitro-Transkription von mRNA. Dieses Nebenprodukt besitzt im menschlichen Körper immunogene Eigenschaften und kann eine Immunreaktion hervorrufen, die den mRNA-Spiegel senkt. Dies macht dsRNA zu einer problematischen Prozessverunreinigung, die eine gründliche Beseitigung und strenge Kontrolle ihrer Restpräsenz erfordert.

Um dieses Problem zu lösen, verwendet das ELISA-Nachweiskit für doppelsträngige RNA (dsRNA) die experimentellen Prinzipien eines Doppelantikörper-Sandwich-Enzymeimmunoassays (ELISA) zur Quantifizierung von restlicher dsRNA. Das Kit kann nicht nur zum Nachweis regulärer dsRNAs verwendet werden, sondern auch zum Nachweis von peudo UTP, N1-Me-peudo UTP und 5-OMe-UTP-modifizierte dsRNAs.

Bei diesem Verfahren werden sowohl ein Standard als auch die Testprobe auf eine Enzymplatte (Bezeichnung 36717-A) gegeben, die zuvor mit Anti-dsRNA-Antikörpern beschichtet wurde. Anschließend werden biotinmarkierte dsRNA-Nachweisantikörper (36717-F) in verdünnter Form hinzugefügt. Schließlich wird Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) eingeführt, um einen Komplex aus Antikörpern, Antigenen, Biotin und SA-HRP zu bilden.

Nach dem Waschen der Platte wird durch Zugabe der chromogenen TMB-Lösung (36717-K) die Farbentwicklung eingeleitet. Unter dem Einfluss der HRP-Enzymkatalyse erfährt TMB eine Transformation von farblos nach blau, die dann durch Zugabe der Stopplösung (36717-L) gestoppt wird. Letztendlich führt diese Transformation zu einem gelben Farbton, dessen Intensität positiv mit der in der Probe identifizierten dsRNA-Menge korreliert.

Dieses Kit dient einem vielseitigen Zweck und ermöglicht die Optimierung des Reinigungsprozesses biologischer Produkte, die Verunreinigungskontrolle während der Zwischenphasen und Freigabetests zur Bewertung des Endprodukts.

PProdukt VAlidation Bericht

Komponenten

Versand und Lagerung

Das Kit wird mit einem Eisbeutel geliefert und kann bei 2 °C bis 8 °C gelagert werden. Ungeöffnet ist das Produkt ein Jahr lang gültig. Nach dem Öffnen ist das Reagenz ein halbes Jahr lang gültig. Frieren Sie dieses Produkt niemals ein.

Anweisungen

1. Vorbereitung vor dem Experiment

1) Experimentiermaterialien, die nicht in diesem Set enthalten sind, aber für das Experiment benötigt werden:

a. RNase-freie Spitzen;

b. RNase-freies Zentrifugenröhrchen;

c. Staubfreies Papier;

d. RNase-freie Probenvorbehandlungsplatte;

e. Deionisiertes Wasser oder doppelt destilliertes Wasser.

2) Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Instrumente und Ausrüstung:

a. Multifunktionales Mikroplattenlesegerät (einschließlich Dual-Wellenlängen-Erkennungsmodus, der 450 nm und 650 nm abdeckt; 450 nm kann als Erkennungswellenlänge und 650 nm als Referenzwellenlänge verwendet werden);

b. Vollautomatischer Plattenwascher, Wirbelmischer, Konstanttemperaturmischer, Zentrifuge;

c. Präzisions-Mikropipetten und Mehrkanal-Mikropipetten unterschiedlicher Spezifikationen;

d. Timer, 4℃ Kühlschrank;

e. Mikroplattenschüttler.

2. Ergebnisanalyse

a. Wenn der OD-Wert der zu testenden Probe den OD-Wert am höchsten Punkt der Standardkurve überschreitet, muss die Probe verdünnt und erneut gemessen werden.

b. Verfahren zur Kurvenentwicklung: Erstellen Sie eine Standardkurve, indem Sie die Standardkonzentrationen auf der x-Achse und die entsprechenden kalibrierten Standardabsorptionswerte auf der y-Achse auftragen. Verschiedene Zeichen- und Statistiksoftwaretools können bei der Erstellung von Standardkurven und der Bestimmung unbekannter Probenkonzentrationen hilfreich sein. Es empfiehlt sich, für dieses Experiment eine Anpassungsmethode mit vier oder fünf Parametern zu verwenden.Berechnen Sie abschließend die Restmenge an dsRNA in der Probe, indem Sie sich auf die Standardkurve beziehen und den Verdünnungsfaktor der Probe berücksichtigen.

c. Die bereitgestellte Standardkurve dient als illustratives Beispiel (nur zu Referenzzwecken). Der tatsächliche Probengehalt sollte mithilfe einer Standardkurve ermittelt werden, die speziell für denselben experimentellen Standard erstellt wurde.

3. Ablaufdiagramm des Experiments

Abbildung 5 Ablaufdiagramm des Experiments

4. Produktleistung

Die Leistung dieses Kits wurde vollständig bewertet. Weitere Einzelheiten erhalten Sie vom technischen Personal, um den entsprechenden Leistungsüberprüfungsbericht zu erhalten.

5. Hinweise

1. Bitte lesen Sie diese Bedienungsanleitung sorgfältig durch, bevor Sie dieses Kit verwenden.
2. Bitte verwenden Sie dieses Produkt innerhalb der Gültigkeitsdauer. Es ist verboten, verwandte Reagenzien aus verschiedenen Chargen zu mischen.
3. Alle Reagenzien müssen vor der Verwendung wieder auf Raumtemperatur gebracht werden.
4. Bitte tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
5. Dieses Produkt dient ausschließlich wissenschaftlichen Forschungszwecken.
   
   

   Unterlagen:

   Sicherheitsdatenblatt

   Handbuch