Beschreibung
Wenn Zellen eine Apoptose durchlaufen, aktivieren sie Endonuklease-Enzyme, die genomische DNA zwischen Nukleosomen schneiden. Eine DNA-Leiter von 180–200 bp kann nach Extraktion der DNA während der Apoptose durch Elektrophorese nachgewiesen werden.
Mit dem TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) Cell apoptosis Assay Kit (FITC) können Brüche der Kern-DNA in Gewebezellen im späten apoptotischen Stadium nachgewiesen werden. Das Prinzip besteht darin, dass FITC-12-dUTP wird in das 3‘-Hydroxylterminal (3‘-OH) der genomischen DNA eingefügt, das bei einem DNA-Bruch durch die Einwirkung der terminalen Desoxynukleotidyl-Transferase (TdT) freigelegt wird. Dies kann mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie nachgewiesen werden.
Dieses Kit optimiert die Markierungsreaktion durch Verwendung von FITC-12-dUTP und unmarkiertem dNTP im optimalen Verhältnis für den Nukleotid-Einbau am 3' -OH Terminal, was zu einem längeren „Markierungsschwanz“ am Ende desselben gebrochenen DNA-Fragments führt. Der „Etikettierschwanz“ verringert die sterische Hinderung markierter Gruppen auf benachbarten dNTP, erhöht die Anzahl fluoreszierender Gruppen auf jedem gebrochenen Fragment und verringert die Aggregation und Löschung, die durch benachbarte fluoreszierende Gruppen verursacht werden kann, wodurch die Nachweisempfindlichkeit verbessert und nichtspezifische Reaktionen verringert werden.
Dieses Kit hat ein breites Anwendungsspektrum. Es kann zum Nachweis von Apoptose in gefrorenen oder Paraffinschnitten sowie in kultivierten adhärenten Zellen oder Suspensionszellen verwendet werden.
Merkmale
- Die Reagenzien in diesem Kit werden zur einfachen Verwendung in flüssiger Form bereitgestellt.
- Das Kit kann für verschiedene Zwecke verwendet werden: Durchflusszytometrie, Fluoreszenzmikroskopie zur Erkennung.
- Unter dem Fluoreszenzmikroskop ist der Farbunterschied deutlich zu erkennen.
Anwendungen
- Dieses Kit kann für Durchflusszytometrie und Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden.
- Mit diesem Kit kann die frühe Apoptose von Zellen erkannt werden.
- Dieses Kit kann zwischen spätapoptotischen und nekrotischen Zellen unterscheiden.
Technische Daten
| Anwendung | Die verifizierte Anwendung des Kits bestand in der Erkennung apoptotischer Zellen mittels Durchflusszytometrie oder Immunfluoreszenzzytologie. |
| Verpackungsform | Flasche |
Komponenten
| Komponente | Name | 40306ES20 (20 Zähne) | 40306ES50 (50 Zähne) | 40306ES60 (100T) |
| 40306-A | 5×Äquilibrierungspuffer | 750 μl | 1,25 ml × 2 | 1,25 ml × 3 |
| 40306-B | FITC-12-dUTP-Markierungsmischung | 100 μl | 250 μl | 250 μL × 2 |
| 40306-C | Rekombinantes TdT-Enzym | 20 μl | 50 μl | 50 μL × 2 |
| 40306-D | Proteinase K (2 mg/mL) | 40 μl | 100 μl | 100 μL × 2 |
| 40306-E | DNase I (1 U/µL) | 5 μl | 12,5 μl | 25 μl |
| 40306-F | 10 × DNase I Puffer | 100 μl | 250 μl | 500 μl |
Versand und Lagerung
Das Produkt wird mit Trockeneis geliefert und kann bei -15℃ gelagert werden ~ -25℃ für 1 Jahr.
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