(1) F: Was ist der Unterschied zwischen DNA-Transfektion und siRNA-Transfektion?

A: 1. Da es nur 20 Basenpaare gibt, ist siRNA viel kleiner als DNA mit Tausenden oder sogar mehr als 10.000 Basenpaaren.

2. Die zur Transfektion von DNA verwendeten Transfektionsreagenzien und -methoden sind nicht für die Transfektion von siRNA geeignet.

3. Bei der siRNA-Transfektion werden strengere Anforderungen an die Zytotoxizität der Transfektionsreagenzien gestellt als bei der DNA-Transfektion.

(2) F: Muss das Transfektionsreagenz nach der Transfektion gewechselt werden?

A: Beim Medienwechsel lassen sich zwei Situationen unterscheiden:

1. Wenn vor der Transfektion kein Mediumwechsel erfolgt, sollte das Medium etwa 6 Stunden nach der Transfektion gewechselt werden, um die für das Zellwachstum benötigten Nährstoffe sicherzustellen.

2. Wenn vor der Transfektion eine Änderung erfolgt, kann das Medium wie üblich gewechselt werden, wenn im Medium ein Nährstoffmangel vorliegt.

(3) F: Wie effizient ist das PEI-Transfektionsreagenz für die Transfektion von siRNA und Plasmid?

A: Dieses PEI-Transfektionsreagenz wurde speziell für siRNA entwickelt und eine Plasmidtransfektion wird nicht empfohlen.

(4) F: Kann das Transfektionsreagenz eingefroren werden?

A: Nicht einfrieren, da es sich bei dem Transfektionsreagenz um ein kationisches PEI-Transfektionsreagenz handelt. Einfrieren bei niedriger Temperatur zerstört die Aktivität des PEI-Transfektionsreagenz. Daher ist es am besten, es bei 4 Grad zu lagern, um die beste Transfektionseffizienz aufrechtzuerhalten.

(5) F: Wie kann die Transfektionseffizienz verbessert werden?

A: a: Zelldichte zum Zeitpunkt der Transfektion, 30 %–50 %.

b: Zur siRNA- und Liposomenverdünnung während der Transfektion sollte serumfreies Opti-MEM-Medium verwendet werden.

c: Das Medium kann 4-6 Stunden nach der Transfektion gewechselt werden.

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