Beschreibung
Das universelle Transfektionsreagenz Hieff Trans™ ist ein vielseitiges, praktisches und effizientes Liposomentransfektionsreagenz, das auf Basis der neuesten Nanotechnologie entwickelt wurde. Es eignet sich für die Transfektion von DNA, RNA und Oligonukleotiden, einschließlich Primärzellen. Schwer zu transfizierende Zellen, einschließlich Neuronen, weisen eine hohe Transfektionseffizienz auf. Seine einzigartige Formel ermöglicht die direkte Zugabe zum Medium, und die Anwesenheit von Serum beeinträchtigt die Transfektionseffizienz nicht, wodurch die durch die Serumentfernung verursachten Schäden an Zellen verringert werden. Es ist nicht erforderlich, den Nukleinsäure-Transfektionsreagenzkomplex nach der Transfektion zu entfernen oder durch frisches Medium zu ersetzen, und das frische Medium kann je nach Nährstoffstatus der Zellen auch nach 4–6 Stunden ersetzt werden.
Produktkomponenten
| Komponentennummer | Komponenten | Kat.-Nr./Größe | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
Versand und Lagerung
Das Produkt wird mit Kühlakkus geliefert und kann bei 2-8℃ ein Jahr lang gelagert werden. Nicht einfrieren!
Vorsichtsmaßnahmen
1) Während des Transfektionsvorgangs ist es besser, wenn die Zellkonfluenz 70 % bis 90 % erreicht, und die spezifische Beschichtungsdichte wird entsprechend der Situation der Zellen bestimmt.
2) Die Herstellung von Transfektionskomplexen erfordert die Verdünnung von DNA und Transfektionsreagenzien in serumfreiem Medium.
3) Während der Transfektion dürfen dem Medium keine Antibiotika zugesetzt werden.
4) Die Verwendung hochreiner DNA oder RNA trägt dazu bei, eine höhere Transfektionseffizienz zu erzielen, und Endotoxin in Plasmiden ist der Feind der Transfektion.
5) Bei 2–8 °C lagern. Achten Sie darauf, den Deckel nicht über einen längeren Zeitraum wiederholt zu öffnen.
6) Die Nukleinsäurekonzentration und das Reagenzvolumen sollten vor dem ersten Gebrauch optimiert werden, um eine maximale Transfektionseffizienz zu erzielen.
7) Dieses Produkt ist nur für wissenschaftliche Forschungszwecke bestimmt!
Anweisungen
Transfektion von DNA
[Hinweis] Die Menge des verwendeten Transfektionsreagenzes wird vom Zelltyp und anderen experimentellen Bedingungen beeinflusst. Es wird empfohlen, einen Gradienten einzustellen, um die optimale Verwendungsmenge beim ersten Mal zu optimieren.
1) Die Zellen werden plattiert und die Zellkonfluenz sollte zum Zeitpunkt der Transfektion 70–90 % betragen.
2) Verdünnen Sie die Universal-B-Lösung gemäß der folgenden Tabelle mit Opti-MEM-Medium und mischen Sie vorsichtig.
3) Verdünnen Sie die DNA mit Opti-MEM-Medium, um eine DNA-Vormischung zu erhalten. Fügen Sie dann die Universal-A-Lösung hinzu und mischen Sie vorsichtig, um verdünnte DNA zu erhalten.
4) Fügen Sie die verdünnte DNA der verdünnten Universal-B-Lösung hinzu (Verhältnis 1:1).
5) 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
6) Den DNA-Liposomenkomplex tropfenweise zu den Zellen hinzufügen und vorsichtig vermischen.
7) Bis zur Genexpressionsanalyse 48–96 Stunden lang bei 37 °C und 5 % CO2 im Inkubator inkubieren.
Transfektion von siRNA
Das Verfahren zur Transfektion von siRNA ist das gleiche wie bei der DNA-Transfektion, außer dass beim Verdünnen von siRNA keine Universal-A-Lösung (Schritt 3) hinzugefügt werden muss.
Tabelle 1 Das Ausmaß der Transfektion in verschiedenen Zellkulturgefäßen (nur als Referenz)
| Zellkulturgefäße | 96-Well | 24-Well | 6-Well | |
| Anhaftende Zellen | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Verdünnen Sie die Universal-B-Lösung mit Opti-MEM-Medium gemäß der folgenden Tabelle und mischen Sie vorsichtig. | Opti-MEM-Medium | 5 μl | 25 μl | 125 μl |
| Universal-B | 0,2 μl | 1 μl | 5 μl | |
| Verdünnen Sie die DNA mit Opti-MEM-Medium, um eine DNA-Vormischung zu erhalten, geben Sie dann die Universal-A-Lösung hinzu und mischen Sie vorsichtig, um verdünnte DNA zu erhalten. | Opti-MEM-Medium | 5 μl | 25 μl | 125 μl |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-A (2 μl/μg DNA) | 0,2 μl | 1 μl | 5 μl | |
| Fügen Sie die verdünnte DNA der verdünnten Universal-B-Lösung hinzu (Verhältnis 1:1). | Verdünnte DNA-Lösung | 5 μl | 25 μl | 125 μl |
| Universal-B | 5 μl | 25 μl | 125 μl | |
| 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. | ||||
| DNA-Liposomen-Komplex | Komponenten (jede Vertiefung) | 96-Well | 24-Well | 6-Well |
| Opti-MEM | 10 μl | 50 μl | 250 μl | |
| DNA (0,5–5 μg/μl) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-B | 0,2 μl | 1 μl | 5 μl | |
| Universal-A | 0,2 μl | 1 μl | 5 μl | |
| Den DNA-Liposomenkomplex tropfenweise zu den Zellen hinzufügen und vorsichtig vermischen. | DNA-Liposomen-Komplex | 10 μl | 50 μl | 250 μl |
[Hinweis] Die in der Tabelle verwendete Menge dient nur als Referenz. Die spezifische Menge an DNA und Universal-B-Lösung sollte je nach Zelltyp und anderen experimentellen Bedingungen optimiert werden. Es wird empfohlen, das Verhältnis zwischen 1:0,5 und 1:5 einzuhalten.
(1) F: Kann bei der Herstellung des Nukleinsäure-Transfektionsreagenzkomplexes Serum vorhanden sein?
A: Das Vorhandensein von Serum beeinflusst die Bildung von Liposomen. Es wird empfohlen, bei der Herstellung von Nukleinsäure-Transfektionsreagenzkomplexen serumfreies Medium (im Allgemeinen MEM-Medium) zu verwenden.
(2) F: Kann das Transfektionsreagenz eingefroren werden?
A: Dieses Reagenz muss bei 2–8 °C gelagert werden. Wiederholtes und längeres Öffnen der Kappe sollte vermieden werden, da ein langfristiges Öffnen der Kappe zu einer Oxidation der Liposomen führt und die Transfektionseffizienz beeinträchtigt.
(3) F: Worauf muss ich bei der Verwendung des Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent achten?
A: 1) Während des Transfektionsvorgangs ist es besser, wenn die Zellkonfluenz 70 % bis 90 % erreicht, und die spezifische Beschichtungsdichte wird entsprechend der Situation der Zellen bestimmt.
2) Die Herstellung von Transfektionskomplexen erfordert die Verdünnung von DNA und Transfektionsreagenzien in serumfreiem Medium.
3) Während der Transfektion dürfen dem Medium keine Antibiotika zugesetzt werden.
4) Die Verwendung hochreiner DNA oder RNA trägt dazu bei, eine höhere Transfektionseffizienz zu erzielen, und Endotoxin in Plasmiden ist der Feind der Transfektion.
5) Bei 2–8 °C lagern. Achten Sie darauf, den Deckel nicht über einen längeren Zeitraum wiederholt zu öffnen.
6) Die Nukleinsäurekonzentration und das Reagenzvolumen sollten vor dem ersten Gebrauch optimiert werden, um die höchste Transfektionseffizienz zu erzielen.
(4) F: Muss die Transfektion nach der Transfektion beendet werden?
A: Nicht nötig. Es ist nicht notwendig, den Nukleinsäure-Transfektionsreagenz-Komplex nach der Transfektion zu entfernen oder durch frisches Medium zu ersetzen. Das frische Medium kann je nach Nährstoffstatus der Zellen auch nach 4-6 Stunden ausgetauscht werden.
(5) F: Kann das Transfektionsreagenz für die Transfektion der Verpackung viraler Vektoren verwendet werden?
A: Ja.Die Effizienz der Verpackung viraler Vektoren hängt nicht unbedingt mit der Effizienz der Transfektion zusammen, sondern auch mit der Auswahl der Verpackungsplasmide und dem Verhältnis zwischen den Plasmiden.
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