La tecnología de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos se puede dividir en muchas categorías según los diferentes principios de amplificación. En la actualidad, la más común y ampliamente utilizada es la tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) desarrollada por el académico japonés Notomi et al. en 2000. La ADN polimerasa Bst es la enzima principal de la tecnología de amplificación isotérmica. ¿Cuál es la función y el rendimiento de la ADN polimerasa Bst en LAMP?

1. ¿Qué papel desempeña la ADN polimerasa Bst en LAMP?
2. ¿Qué es la ADN polimerasa Bst Plus liofilizada?
3. ¿Cuál es la característica del producto? Liofilizado mejor Más ADN Polimerasa (14405ES)?
4. ¿Cuál es el rendimiento del producto liofilizado? mejor Más ADN ¿Polimerasa(14405ES)?
5. Productos relacionados
6. Respecto a la lectura

1. ¿Qué papel desempeña la ADN polimerasa Bst en LAMP?

La característica técnica de LAMP es diseñar cuatro cebadores para seis regiones del gen objetivo y llevar a cabo la reacción de amplificación utilizando la ADN polimerasa BST en condiciones de temperatura constante de 60~65 ℃, logrando una amplificación de 109-1010 veces en 15-60 minutos. La ADN polimerasa Bst tiene una fuerte estabilidad térmica, actividad de desplazamiento de cadena y actividad de polimerasa. Puede ser una plantilla de amplificación rápida, eficiente y específica en condiciones de temperatura constante sin ciclo de amplificación de desnaturalización térmica por PCR, y completar todo el experimento LAMP en 1 hora.

2. ¿Qué es la ADN polimerasa Bst Plus liofilizada?

La ADN polimerasa Bst Plus liofilizada se utiliza para congelar la ADN polimerasa Bst Plus sin glicerol, lo que resuelve el problema de la inestabilidad de la enzima Bst sin glicerol. Al mismo tiempo, este producto tiene una fuerte actividad de ADN polimerasa 5'-3', actividad de desplazamiento de cadena y tolerancia a dUTP, lo que lo hace más adecuado para la reacción de amplificación isotérmica anticontaminación. Es conveniente para los clientes utilizarlo en la producción de productos liofilizados.

Figura 1: 14405ES-Bst Plus ADN polimerasa liofilizada (60 U/μL, sin glicerol)

3. ¿Cuál es la característica del producto liofilizado? mejor Más ADN ¿Polimerasa(14405ES)?

• La enzima libre de glicerol, adecuada para la liofilización.
• Transporte a temperatura normal para reducir costes
• Fuerte actividad de desplazamiento de hebras, sensible y estable.
• Redisolución rápida y operación conveniente.

4. ¿Cuál es el rendimiento del producto liofilizado? mejor Más ADN ¿Polimerasa(14405ES)?

4.1 Forma del polvo liofilizado: en comparación con el momento T0, la forma del polvo permanece sin cambios después de 45 ℃ - 15 DÍAS de liofilización.

Figura 2. Forma del polvo liofilizado

4.2 estabilidad

El rendimiento del polvo liofilizado después de la aceleración térmica aún puede ser consistente con el del reactivo líquido, y el polvo liofilizado (14405ES) es
Universal y se puede utilizar para el método de tinte fluorescente y el método de indicador de pH.

4.2.1 Método de colorante fluorescente: estabilidad

En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el rendimiento del polvo liofilizado Bst sin glicerol después de T0, 45 ℃ -7 días y 45 ℃ -15 días de aceleración térmica es consistente con el de la versión líquida de la enzima Bst sin glicerol, y el NTC no alcanza su pico.

Condiciones experimentales:

Nota: El grupo de control es una versión líquida sin enzima glicerol Bst de la misma concentración.

Figura 3. Resultados de estabilidad

4.2.2 Método de colorante fluorescente: rendimiento de la enzima Bst después de la liofilización del sistema RT-LAMP

En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el rendimiento del producto del polvo liofilizado de Bst sin glicerol liofilizado en el sistema RT-LAMP después de 45 ℃ - 15 días fue consistente con el de la versión líquida de la enzima Bst sin glicerol. La tasa de detección del producto en el grupo de control y el sistema RT-LAMP después del liofilizado fue del 100% (16/16) y del 94% (15/16) respectivamente.

Condiciones experimentales:

Nota: El grupo de control es una versión líquida sin enzima glicerol Bst de la misma concentración.

Figura 4. Rendimiento de la enzima Bst después de la liofilización del sistema RT-LAMP

4.2.3 Método indicador de pH ——Estabilidad

En el sistema de amplificación del indicador de pH RT-LAMP, en comparación con el tiempo T0, la tasa de detección del polvo liofilizado Bst fue del 88% (7/8) después de 45 ℃ - 15 días de aceleración térmica.

Condiciones experimentales:

Nota: El grupo de control es una versión líquida sin enzima glicerol Bst de la misma concentración.

Figura 5. Resultados de estabilidad

4.2.4 Método del indicador de pH: estabilidad ante recongelación

En el sistema de amplificación del indicador de pH RT-LAMP, después de 45 ℃ - 7 días de recongelación, el rendimiento es estable. El grupo de control es enzima Bst líquida. En comparación con el grupo de control, la tasa de detección de 14405ES después de la aceleración térmica es del 94% (30/32).

Condiciones experimentales:

Nota: El grupo de control es una versión líquida sin enzima glicerol Bst de la misma concentración.

Figura 6. Resultados de estabilidad de recongelación

4.3 Especificidad

En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el NTC de 48 pocillos no alcanzó su pico y la especificidad de 14405ES fue del 100%.

Condiciones experimentales:

Nota: El grupo de control es una versión líquida sin enzima glicerol Bst de la misma concentración.

Figura 7. Resultados específicos

5. Productos relacionados

Los productos relacionados que Yeasen puede proporcionar se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1.Productos relacionados

6. Respecto a la lectura

¡Elegir las materias primas enzimáticas clave adecuadas para hacer que LAMP / RT-LAMP sea más sensible y rápido!

Guía de selección de la transcriptasa inversa

YEASEN UDG: El "experto en antiincrustaciones" en reacciones PCR