La peste porcina africana (PPA) es una enfermedad infecciosa aguda, grave y altamente contagiosa causada por el virus de la peste porcina africana (VPPA) que infecta a cerdos domésticos o jabalíes. Su morbilidad y mortalidad pueden alcanzar el 100%, poniendo en grave peligro la industria porcina mundial y causando pérdidas económicas incalculables. La Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) la clasifica como enfermedad animal de declaración obligatoria.

En la actualidad, no existe una vacuna ni un tratamiento eficaz contra la peste porcina africana. El diagnóstico rápido y preciso de la peste porcina africana mediante métodos de diagnóstico de laboratorio es fundamental para prevenir la propagación de la enfermedad. La OIE recomienda la PCR cuantitativa como principal herramienta para el diagnóstico sistemático de la peste porcina africana.

Yeasen es un fabricante con una amplia experiencia en I+D de materias primas para diagnóstico in vitro. Ante la peste porcina africana, Yeasen responde de forma positiva y coopera con los clientes para desarrollar tres soluciones integrales para el proceso, desde la extracción hasta la detección del virus de la peste porcina africana. ¿Cuáles son las tres soluciones? ¿Y cuáles son las aplicaciones de estas soluciones? Continúe leyendo...

Figura 1. Soluciones de detección de peste porcina africana de Yeasen

Solución I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)（consulta）

Características del producto

👍Sistema anticontaminación UDG que previene eficazmente el riesgo de contaminación por aerosoles

👍Estabilidad a largo plazo de la solución de PCR premezclada (mezcla maestra + cebadores + sondas) a temperatura ambiente, lo que simplifica enormemente la dificultad de detección.

👍Alta eficiencia de amplificación y buena repetibilidad.

👍Adecuado para múltiples plataformas y múltiples sistemas.

Caso de muestra

👉Estabilidad a largo plazo de la solución de PCR premezclada
Se utilizó el Cat#13171 para configurar la solución de PCR premezclada que se puede colocar a 37 °C durante 7 días y congelar y descongelar repetidamente 15 veces en la amplificación del sistema de plásmido ASF. Los resultados mostraron que el valor Ct y la sensibilidad de la solución de PCR no difirieron significativamente después de colocarla 7 días a 37 ℃, y el valor Ct no cambió significativamente después de congelarla y descongelarla repetidamente 15 veces.

Figura 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) (Preguntar) utilizado en solución de PCR premezclada con estabilidad a largo plazo en la amplificación del sistema de plásmido ASF. 2A-Valor Ct a 37 ℃ durante 0 días y 7 días 2B-Sensibilidad a 37 ℃ durante 0 días y 7 días 2C-Estabilidad después de congelación-descongelación 15 veces

👉Reactivos estables y reproducibles
Se seleccionaron cuatro lotes diferentes de Cat#13171 para repetir el experimento de amplificación del sistema plasmídico del virus de la peste porcina africana 20 veces. No hubo diferencias significativas en los valores de Ct, con un CV de menos del 1%.

Figura 3.Prueba de repetibilidad de Yeasen Cat#13171

👉Aplicable a múltiples plataformas y múltiples sistemas
Se utilizó el Yeasen Cat#13171 para amplificar los plásmidos duales ASFV/ACT de peste porcina africana en las plataformas Bio-Rad CFX96, ABI Q5 y ​​Slan respectivamente. Se puede observar que el Yeasen Cat#13171 es adecuado para varios tipos de instrumentos y que los datos son confiables y estables.

Figura 4. Sistema de PCR en tiempo real Bio-Rad CFX96

Figura 5. Sistema de PCR en tiempo real ABI Q5

Figura 6. Sistema de PCR en tiempo real Slan

Solución II:Mezcla maestra universal para qPCR multiplex TaqMan

La mezcla maestra para PCR cuantitativa multiplex TaqMan Universal de Yeasen (Cat. n.° 11211) está optimizada para lograr una amplificación eficiente de plantillas de baja concentración mediante la utilización de la ADN polimerasa Taq Hot-Start modificada con anticuerpos y un tampón multiplexado correspondiente. Este producto admite reacciones de PCR de hasta 4 plexos en un solo tubo y es ideal para la genotipificación y el análisis de PCR cuantitativa multiplex.

Características del producto

👍Fuerte tolerancia a las impurezas de la sangre, se puede utilizar con el reactivo de extracción de ácidos nucleicos Yeasen Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2, ideal para qPCR directa
👍Sensibilidad ultraalta a 3 copias/reacción, mejora enormemente la precisión de detección.
👍Estabilidad a largo plazo de la solución de PCR premezclada (mezcla maestra + cebadores + sondas) a temperatura ambiente, lo que simplifica enormemente la dificultad de detección.

Caso de muestra

👉Fuerte tolerancia a las impurezas de la sangre.
En comparación con productos similares de otras marcas, Yeasen Cat#11211 tiene una mayor tolerancia a los inhibidores en las muestras de sangre. Los resultados demostraron que Yeasen Cat#11211 tiene una alta tolerancia al EDTA y al citrato de sodio, y puede soportar el 0,5 % de sangre entera.

Figura 7. Cat#11211 Mezcla maestra universal para qPCR multiplex TaqMan y se utilizan mezclas maestras de varias marcas para soluciones de qPCR de PPA suplementadas con 3 mM de EDTA (3A), 6 mM de citrato de sodio (3B) y 0,5 % de sangre (3C), respectivamente.

👉Sensibilidad ultraalta a 3 copias/reacción

Se realizó la amplificación del plásmido ASFV con 20 réplicas en base a los productos de diferentes marcas. Los resultados de los experimentos muestran que la tasa de detección de los productos Yeasen es mayor.

Figura 8. Comparación de las tasas de detección entre productos similares de diferentes marcas (3 copias en el sistema final)

👉Estabilidad a largo plazo, estable durante 7 días a temperatura ambiente.

La solución de PCR del sistema de plásmido dual ASFV/ACT puede mantener un rendimiento estable después de 7 días a 4 ℃, 25 ℃ y 37 ℃. Se puede observar que el valor Ct y el valor de fluorescencia no cambiaron significativamente.

Figura 9. Estabilidad de la solución de PCR

Solución III: Amplificación isotérmica

Los productos de Yeasen admiten la tecnología de amplificación isotérmica que ayuda a realizar la detección de ASF de forma más rápida y eficiente. Cat# 14402 ADN polimerasa Hieff™ Bst Plus (40 U/μL) Se deriva de la ADN polimerasa I de Geobacillus sp termófilo, que carece de actividad exonucleasa 5'-3'. Este producto tiene una actividad de ADN polimerasa 5'-3' más fuerte, actividad de desplazamiento de cadena y tolerancia a dUTP, lo que lo hace más adecuado para reacciones de amplificación isotérmica anticontaminación, como LAMP, CPA, etc.

Características del producto

👍Alta eficiencia de amplificación

👍Amplificación de alto rendimiento

👍Tolerancia a dUTP, se puede utilizar en combinación con la uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG) Cat#10303 (Preguntar), termolábil, 1 U/μL para evitar el riesgo de contaminación por aerosoles

Caso de muestra

👉Alternativa superior a los productos importados de la marca N*

El proceso de amplificación se realizó utilizando la ADN polimerasa Bst de Yeasen y N* Company, respectivamente. No hubo diferencias significativas en el valor Ct ni en la intensidad de fluorescencia entre las diferentes marcas.

Figura 10. Curvas de amplificación de diferentes marcas.

Pedido de productos