La contaminación por aerosoles en el entorno operativo como causa más común de falsos positivos en los resultados de PCR: el descubrimiento pionero de la uracilo ADN glicosilasa (UDG) por el científico estadounidense Lindahl en E. coli y Bacillus subtilis, y el establecimiento de un sistema de prevención de la contaminación por PCR mediante el uso de la enzima UDG con dUTP.
Las enzimas UDG disponibles comercialmente consisten principalmente en dos tipos: las enzimas UDG regulares derivadas de Escherichia coli y Bacillus subtilis, y las enzimas UDG termolábiles provenientes de bacterias marinas psicrofílicas. Las enzimas UDG regulares exhiben mayor resistencia al calor, reteniendo una pequeña cantidad de actividad de uracilo-ADN glicosilasa incluso después del tratamiento a 95 °C durante 10 minutos, lo que puede conducir a la degradación de los productos de amplificación objetivo que contienen dU. Además, debido al uso de cepas bacterianas modificadas genéticamente (como E. coli) para la expresión recombinante de enzimas moleculares, existe una cierta cantidad de ADN genómico huésped residual en estas enzimas. Junto con las influencias del entorno de fabricación y las fuentes humanas, los productos de enzimas moleculares son altamente susceptibles a la contaminación del ADN. Durante la detección de patógenos, el ADN contaminante puede enmascarar ácidos nucleicos objetivo de baja abundancia o detectarse junto con ellos, lo que afecta la interpretación de los resultados.
UCF.ME Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG) de Yeasen, termolábil
Descripción
UCF.ME Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG), termolábil, 1 U/μL (Cat#14466ES) Derivada de bacterias marinas psicrofílicas, es una enzima UDG termolábil residual ultra baja conocida como UCF.ME. El uso de este producto puede evitar que la actividad residual de las enzimas UDG convencionales después de la inactivación degrade los productos de amplificación que contienen dU a temperatura ambiente. También evita que las bacterias de fondo presentes en las enzimas moleculares provoquen falsos positivos en los resultados de PCR. Por lo tanto, la introducción de la enzima UDG termolábil residual ultra baja UCF.ME® es crucial para identificar con precisión los patógenos infecciosos y ayudar en el diagnóstico clínico de infecciones y enfermedades infecciosas.
Ventajas del producto
- Residuo ultra bajo de UCF.ME: residuo de ADN genómico de E. coli <0,1 copias/U;
- Residuos bajos de nucleasa: no hay exonucleasa residual, enzima de corte ni ARNasa;
- Fuerte capacidad de digestión: 0,05 U/T pueden digerir 105 copias/T de productos de dU-ADN;
- Buena termolabilidad: inactivación completa bajo cualquier condición de 50 °C durante 10 minutos, 55 °C durante 5 minutos o 95 °C durante 5 minutos;
- Compatible con sistemas de reacción RT-qPCR: no afecta al sistema de detección incluso con niveles de entrada altos (sistema de reacción 2U/20 μL).
（1）Pureza de la proteína ≥95 %
Cifra 1. Resultados de la detección de pureza de proteínas (SDS-PAGE)
（2）Nucleasas residuales bajas: sin exonucleasas residuales, enzimas de corte o ARNasas
Cifra 2. Resultados de la prueba de residuos de nucleasa
(3) Residuos de ADN genómico de E. coli < 0,1 copias/U, los niveles de residuos fueron significativamente inferiores a los del reactivo convencional.
Cifra 3. Resultados de la prueba de residuos de ADN genómico de E. coli
Cifra 4. Un total de 0,05 U de enzima UDG podrían digerir completamente 10^5 copias/T de productos de dU-ADN.
Figura 5. Después del tratamiento de inactivación por calor de 50 ℃, 10 min; 55 ℃, 5 min; 55 ℃, 10 min; 95 ℃, 5 min, 14466ES perdió la capacidad digestiva.
Figura 6. La mezcla RT-qPCR se preparó utilizando dos sondas de iniciación de los genes ORF1ab y N y 14466ES. Cuando se inyectó 14466ES en el sistema de reacción en una cantidad de 2 U/20 μL, no hubo inhibición de la RT-qPCR. reacción.
Recomendación de productos: Serie de materias primas enzimáticas para PCR con residuos ultra bajos
| Posicionamiento del producto | Nombre del producto | Gato |
| Prevención de la contaminación de UDG termolábil | UCF.ME Uracilo ADN glicosilasa (UDG/UNG), termolábil, 1 U/μL | 14466ES |
| Taq ADN polimerasa de arranque en caliente | ADN polimerasa Taq sensible al inicio en caliente Hieff UCF.ME (5 U/μL) | 14314ES |
| Transcriptasa inversa | Transcriptasa inversa Hifair UCF.ME V (200 U/μL) | 14608ES |
| Inhibidor de la ARNasa murina | 14672ES |