Enzima molecular ultra de ADN ultra baja, herramienta de desarrollo de la detección de patógenos y control de calidad del producto biológico

En los últimos años, la incidencia mundial de enfermedades infecciosas ha ido en aumento, y los patógenos se han vuelto cada vez más diversos y complejos. Un desafío importante en este escenario es que aproximadamente la mitad de los pacientes se enfrentan al dilema de tener patógenos desconocidos, lo que hace que el diagnóstico rápido de estos patógenos sea una tarea abrumadora. Actualmente, la detección clínica de patógenos se basa principalmente en métodos de cultivo tradicionales, técnicas de PCR, secuenciación metagenómica (mNGS) y secuenciación dirigida a patógenos (tNGS).

La PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real ha ganado prominencia en la detección de ácidos nucleicos del SARS-CoV-2. De manera similar, la mNGS ha ganado atención por sus contribuciones a la lucha contra el SARS-CoV-2 y ha pasado de los entornos clínicos al uso cotidiano. La tNGS, que ofrece las ventajas tanto de la PCR como de la NGS, como la velocidad, la precisión y la rentabilidad en los servicios de secuenciación, está ganando cada vez más terreno en el campo de las pruebas clínicas.

Al mismo tiempo, la aplicación de productos biológicos se ha ampliado a la biomedicina, la agricultura biológica, la bioenergía, la fabricación biológica, la protección del medio ambiente y otros ámbitos. A medida que la cuota de mercado de los productos biológicos sigue creciendo, los organismos gubernamentales y las autoridades pertinentes han establecido sistemas y normas de gestión de calidad estandarizados para estos productos. Un área de especial interés se refiere a la presencia de residuos de ácidos nucleicos de células huésped en productos biológicos.

Los productos biológicos, como los fármacos de proteínas recombinantes, los fármacos de anticuerpos, las vacunas y las terapias celulares y genéticas, se producen utilizando cepas o líneas celulares consecutivas, lo que potencialmente da como resultado la retención de ácidos nucleicos del huésped en los productos finales. Los ácidos nucleicos residuales del huésped pueden tener consecuencias adversas, como la proliferación celular descontrolada que conduce a la formación de tumores o la exacerbación de las respuestas inmunitarias mediante la introducción de genes virales. Por lo tanto, la eliminación eficaz de residuos de ácidos nucleicos y la detección rigurosa de residuos son cruciales para garantizar la seguridad de los productos biológicos y cumplir con los requisitos de investigación. En la industria, los métodos qPCR/RT-qPCR se emplean ampliamente para desarrollar kits de detección para la detección de residuos de ácidos nucleicos del huésped en productos biológicos.

Además, las enzimas moleculares comerciales suelen expresarse mediante cepas modificadas genéticamente, como E. coli, lo que da lugar a la presencia de ADN genómico del huésped en estas enzimas moleculares. Además, los factores ambientales y humanos pueden introducir ADN contaminado en los productos de enzimas moleculares.

Durante el proceso de detección de patógenos, los ácidos nucleicos bacterianos de fondo provenientes de la contaminación pueden eclipsar a los ácidos nucleicos objetivo con baja abundancia o ser detectados junto con los ácidos nucleicos objetivo. Esto puede afectar la sensibilidad de la detección del objetivo o generar resultados falsos positivos, lo que complica el diagnóstico y las decisiones de tratamiento que toman los profesionales médicos.

En el desarrollo y la producción de productos de control de calidad para la prueba de residuos de ácidos nucleicos del huésped, la presencia de ácidos nucleicos residuales del huésped, incluidos los de seres humanos, ratones, E. coli, levaduras y otros, en enzimas moleculares puede generar imprecisiones en la cuantificación de los productos de control de calidad de residuos de ácidos nucleicos del huésped. Esto plantea posibles riesgos de seguridad en la fabricación de productos biológicos.

YEASEN UCF.ME^MT. Solución enzimática de peso molecular ultrabajo de residuos

Para resolver el problema de la interferencia de los residuos de ácidos nucleicos de las bacterias de fondo y del huésped, YEASEN Ha establecido una plataforma completa de I+D y producción para UCF.ME^MT. enzimas de peso molecular ultrabajo y ha logrado una producción a gran escala de una variedad de UCF.A MÍ^MT. enzimas de peso molecular ultrabajo a través de la selección de materiales, control ambiental, optimización de procesos y garantía de calidad.

YEASEN UCF.ME^MT. Productos enzimáticos de peso molecular ultrabajo

YEASEN reformó un conjunto completo de enzimas moleculares como qPCR/RT-qPCR, creación de bibliotecas NGS. Al mismo tiempo, UCF.ME™ El proceso de residuos ultra bajos se utiliza para procesar productos de enzimas moleculares, podemos proporcionar un conjunto completo de materias primas de enzimas moleculares de alto rendimiento y residuos ultra bajos para qPCR/RT-qPCR y NGS. a Mejorar la precisión de detección.

Mesa 1 La lista de YEASEN UCF.ME^MT. Productos enzimáticos de peso molecular ultrabajo

Presentación parcial de datos (UCF.ME)^MT. (ADN polimerasa Taq sensible al inicio en caliente como ejemplo)

• Rresiduode coli ADN genómico ＜0.005 copias/U

1. coliResiduos de ADN genómico de diferentes lotes de UCF.ME^MT.Se detectó la enzima Taq (Cat#14314ES). El resultado mostró que E. coli Residuos de ADN genómico Residuos de la ADN polimerasa Taq estaban muy por debajo de 0,005 copias/U.

Cifra 1:Detección de E. coli gramoResiduos de ADN de UCF.ME^MT. Enzima Taq (Cat. n.° 14314ES)

• No se detectó ADN plasmídico residual

Residuos de ADN plasmídico de UCF.ME^MT. Se detectaron la enzima Taq (Cat#14314ES) y la ADN polimerasa Taq de marca A. Los resultados mostraron que había residuos de ADN plasmídico en la ADN polimerasa Taq de marca A. No se detectó ADN plasmídico en UCF.ME.^MT. Enzima Taq (Cat#14314ES).

Figura 2: Resultados de la detección de residuos de ADN plasmídico

• No se detectaron once tipos de bacterias de fondo comunes

Utilice el UCF.ME^MT. Enzima Taq (Cat#14314ES) acoplada con cebadores y sondas de Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Maltófilo de Stenotrophomonas, Neumonía por estreptococo, Enterococcus faecium, Estafilococo áureo, E. coli, Enterococcus faecalis Para preparar la premezcla de qPCR, se detectó NTC (control sin plantilla) y los resultados mostraron que no se detectaron residuos de las 11 bacterias de fondo comunes mencionadas anteriormente en UCF.ME.^MT. Enzima Taq (Cat#14314ES).

Figura 3: Resultados de pruebas de 11 bacterias de fondo comunes (limitado por el espacio, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens y Klebsiella pneumoniae se muestran como ejemplos)

• Presentación del caso de prueba del cliente

La enzima comercial Taq y YEASEN UCF.ME^MT. La enzima Taq (Cat#14314ES) se utilizó para detectar NTC junto con el cliente. E. coli cebador específico, y los resultados mostraron que la enzima Taq comercial alcanzó su pico 5 veces en 22 experimentos repetidos. El UCF.ME^MT. La enzima Taq (Cat#14314ES) no alcanzó su pico en 22 réplicas, lo que indica que el UCF.ME^MT. La enzima Taq (Cat#14314ES) no se detectó E. coli ADNg.

Cifra 4: Ddetección resultado de MI.coli Residuos de ADN genómico (caso de prueba del cliente)

Izquierda: enzima Taq convencional disponible comercialmente; Derecha: UCF.ME^MT. Enzima Taq (Cat. n.° 14314ES)

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