El ARN circular (circARN) es una clase única de moléculas de ARN no codificante. Se forman a través de un mecanismo llamado empalme inverso. Los dos exones del ARNm precursor se conectan en una estructura de bucle cerrado durante el empalme. Esto evita las estructuras comunes de tapa 5' y cola 3' que se encuentran en las moléculas de ARN lineal. Esta estructura circular confiere una alta estabilidad a los circRNA, haciéndolos menos susceptibles a la degradación por nucleasas dentro de la célula. Por lo tanto, tienen una vida media más larga en las células, lo que les permite lograr efectos de baja dosis y de larga duración en aplicaciones prácticas. Además, el circRNA tiene la ventaja de un proceso de producción relativamente simple porque no requiere el nucleótidos modificados la protección o poliadenilación, lo que convierte al ARN circular en un punto clave en el desarrollo de fármacos.
Tiene ventajas significativas en el desarrollo de fármacos, cuyos detalles se describen principalmente listado En lo siguiente:
01 Mayor estabilidad
La estructura del circRNA lo hace resistente a la degradación por nucleasas, por lo que Tiene una vida media más larga y una mayor estabilidad en las células, lo que es crucial para el efecto sostenido de los medicamentos.
02 Baja inmunogenicidad
En comparación con el ARN lineal, el circRNA tiene menor inmunogenicidad, lo que reduce la posibilidad de reacciones inmunes, lo que lo hace más adecuado como transportador de fármacos.
03 Expresión proteica eficiente
Las investigaciones muestran que los circRNA diseñados pueden expresar proteínas de manera estable y eficiente en células eucariotas, lo que es particularmente importante para la terapia de reemplazo de proteínas.
04 Posibles aplicaciones para el tratamiento de enfermedades
El circRNA ha demostrado tener potencial en el tratamiento de diversas enfermedades, incluidas enfermedades raras, terapia contra el cáncer y como parte del desarrollo de vacunas.
05 Sistema de entrega innovador
Los sistemas de administración recientemente desarrollados, como las nanopartículas lipídicas (LNP), pueden administrar eficazmente el ARN circular a las células objetivo, lo que es crucial para la focalización y la eficacia de los medicamentos.
06 Desarrollo de vacunas
Las vacunas de ARNcirc han demostrado potencial en el desarrollo de vacunas contra la COVID-19, capaces de inducir la producción de anticuerpos más neutralizantes y respuestas efectivas de células T, y son más estables a temperaturas ambiente en comparación con el ARNm lineal, lo que ayuda a simplificar las condiciones de almacenamiento y transporte.
07 Edición genética
El circRNA también muestra potencial en el campo de la edición genética, pudiendo servir como plantilla para sistemas de edición genética, proporcionando una expresión proteica más persistente y estable.
El proceso de producción de circRNA incluye: preparación de la plantilla, transcripción in vitro, eliminación de la plantilla de ADN, circularización y purificación. Después de la circularización del ARN, el ARN no circularizado debe digerirse con Ribonucleasa R (RNasa R) para enriquecer el ARN circular.
YEASEN Tiene un diseño racional de enzimas moleculares bidireccionales y una plataforma de evolución dirigida, así como una base de producción de enzimas moleculares diseñada específicamente para productos de nivel GMP.. Desarrollar y producir productos de ARNasa R de grado GMP con alta pureza y fuerte actividad digestiva, brindando apoyo para el lanzamiento de nuevas vacunas/medicamentos de ARN.
Figura 1: Diagrama del proceso de producción de ARN circular
(Fuente: Front Immunol 2023 Jan 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)
La ARNasa R (ribonucleasa R, RNasa R) es una exorribonucleasa 3'→5' dependiente de Mg2+ que se origina a partir de Escherichia coliPuede digerir todo el ARN lineal y tiene dificultad para digerir el ARN circular, el ARN Lasso, o moléculas de ARN bicatenario con menos de 7 nucleótidos que sobresalen en el extremo 3'. La ARNasa R se utiliza comúnmente para eliminar moléculas de ARN lineales, logrando así el propósito de enriquecer ARN no lineales como el ARN circular y el ARN lariat.
La aplicación principal regiones son:
- Investigación sobre la expresión genética;
- Investigación sobre empalme alternativo;
- Enriquecer circRNA a partir de muestras biológicas;
- Identificar la estructura del lazo intrónico del ARN;
- Identificar el exón circRNA.
Características del producto
- Pureza de proteína (SDS-PAGE) ≥95%;
- Sin residuos de exonucleasa;
- En comparación con los competidores, el producto tiene una capacidad equivalente para digerir ARN lineal;
- En comparación con los competidores, el producto tiene un efecto similar en el enriquecimiento de circRNA.
Demostración de rendimiento
Pureza de la proteína (SDS-PAGE) ≥95%
Figura 2: Prueba de pureza de proteínas: De izquierda a derecha, los resultados corresponden a diferentes volúmenes (1 μL, 2 μL, 3 μL) de la misma concentración de producto. Los resultados muestran que la pureza proteica de YEASEN El producto de ARNasa R es ≥95%.
Sin residuos de exonucleasa
Figura 3: Detección residual de exonucleasa: añadir 20 U de YEASEN Se añadió ARNasa R a 0,5 μg de la digestión con λDNA-Hind III, se incubó a 37 °C durante 4 horas y luego se realizó una electroforesis en gel de agarosa. Los resultados muestran que las bandas de ADN no cambiaron, lo que indica que no hay exonucleasa residual en el YEASEN. Producto de la ARNasa R.
Comparable al producto RNase R de marca importada en la digestión de ARN lineal
Figura 4: Comparación de la capacidad de los productos de ARNasa R de YEASEN y los productos de ARNasa R de un fabricante importado para digerir ARN lineal: Cuando YEASEN El producto de ARNasa R y el producto de ARNasa R de un fabricante importado A se agregaron a un sistema de reacción que contenía sustratos de ARN lineal, los resultados mostraron que cuando la cantidad de producto de ARNasa R agregado alcanzó 2-4 U, las bandas de ARN se debilitaron o incluso desaparecieron, lo que indica que la ARNasa R tiene un efecto digestivo sobre las moléculas de ARN lineal. Además, la capacidad digestiva de YEASEN El producto RNasa R y el producto RNasa R del fabricante importado A en moléculas de ARN lineal son comparables.
Equivalente al efecto de enriquecimiento de circRNA del producto RNasa R de marca importada de A
Figura 5: Comparación del efecto de enriquecimiento del circRNA por YEASEN Producto de ARNasa R y producto de ARNasa R de un fabricante importado A: El sistema de reacción que contiene sustratos de ARN circular se sometió a reacciones con YEASEN productos y productos de ARNasa R de un fabricante importado A, respectivamente.Los resultados mostraron que no hubo diferencia significativa en el brillo de las bandas de ARN después del tratamiento con el producto RNase R de YEASEN y el producto RNase R del fabricante importado A, lo que indica que el circRNA puede soportar la digestión por RNase R. Los resultados anteriores confirman que tanto YEASEN Los productos y productos RNase R de un fabricante importado se pueden utilizar de manera eficaz para el enriquecimiento de circRNA.
Comentarios de clientes
YFACILITAR La ARNasa R tiene mejores efectos de escisión en el ARN lineal en comparación con otras marcas.
Figura 6: Comparación de los efectos de la digestión con ARNasa R en moléculas de ARNm lineales entre YEASEN Productos y fabricantes A y B:La reacción se llevó a cabo añadiendo el YEASEN El producto de ARNasa R y los productos de ARNasa R de los fabricantes A y B se agregaron a un sistema de reacción que contenía 1 μg de sustrato de ARNm lineal. Los resultados mostraron que el YEASEN El producto RNasa R tuvo una mejor eficiencia de digestión en ARN lineal en comparación con los productos RNasa R de los fabricantes A y B.
Información del producto
| Nombre del producto | Código del producto | Especificaciones del producto |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616ES | 500 µl/1 ml/5 ml/10 ml/100 ml |
Referencias
1.Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vacunas circulares de ARN contra el SARS-CoV-2 y variantes emergentes. Célula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. La caja de herramientas bioinformática para el descubrimiento y análisis de circRNA. Bioinform breve. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001