Con el rápido desarrollo de la biotecnología, la terapia de ARNm, como método de tratamiento emergente, ha atraído mucha atención debido a su gran capacidad de programación y rápida velocidad de respuesta. En los campos de las vacunas de ARNm y la terapia génica, la síntesis eficiente de ARNm de alta calidad es un paso clave para lograr los objetivos terapéuticos. Durante este proceso, la ARN polimerasa T7 (T7 RNAP) desempeña un papel esencial, ya que puede catalizar eficientemente la síntesis in vitro de ARNm.
Aunque la ARN polimerasa T7 desempeña un papel crucial en la síntesis de ARNm, en la práctica suele producir ARN bicatenario (ARNbc) como subproducto. El ARNbc es una de las características distintivas de muchos virus y, por lo tanto, las proteínas de unión al ARNbc intracelulares lo reconocen fácilmente, lo que desencadena respuestas inmunitarias innatas y reacciones inflamatorias. Esto significa que si las formulaciones de ARNm contienen un nivel más alto de ARNbc, puede provocar una activación inmunitaria innecesaria, lo que podría afectar la eficacia terapéutica o causar efectos secundarios graves. El exceso de ARNbc también puede interferir con la función normal del ARNm, incluida la eficiencia de la traducción y la estabilidad del ARNm, lo que afecta indirectamente la eficacia de la terapia con ARNm.
Figura 1: El impacto de los subproductos de dsRNA y la reacción de ARN polimerasa T7 optimizada.
Por lo tanto, desarrollar y adoptar métodos efectivos para reducir la generación de dsRNA es una parte crucial del desarrollo de la tecnología de ARNm. Los investigadores han desarrollado varias estrategias, incluido el uso de ARN polimerasas T7 mejoradas, nucleótidos de modificación, optimización de tampones de transcripción IVT y procesos de purificación posteriores. Yeasen Biology utiliza las capacidades de su plataforma de evolución dirigida ZymeEditor para desarrollar continuamente la materia prima enzimática central para la síntesis in vitro de ARNm: la ARN polimerasa T7. Hemos desarrollado una ARN polimerasa T7 de bajo dsRNA que suprime la actividad RDRP de la ARN polimerasa T7, reduciendo fundamentalmente la formación de dsRNA, disminuyendo así significativamente el contenido de dsRNA.
Datos del producto
Rendimiento: más de 9 mg/mL
Contenido de dsRNA: el contenido de dsRNA se ha reducido significativamente al menos 10 veces
Eficiencia de tapado: más del 99%
ARN polimerasa T7 de baja dsRNA Proceso de selección:
1) la construcción de una biblioteca aleatoria y un método de detección de alto rendimiento FADS, una biblioteca de mutaciones aleatorias de más de 10^6 Fue proyectado.
2) Se utilizó un diseño semirracional y tecnología de microplacas para examinar una biblioteca saturada de sitios. Ambos métodos produjeron mutantes de la ARN polimerasa T7 con bajo contenido de dsRNA. Teniendo en cuenta el contenido de dsRNA y asegurándose de que no se reduzcan otros indicadores (como integridad/eficiencia de recubrimiento/rendimiento, etc.), Se seleccionaron varios mutantes y uno llamado CleaScrip™ T7 se utilizó para aplicación comercial.
Datos del producto
En diferentes escenarios de aplicación de longitud, la ARN polimerasa T7 de dsRNA bajo ha mostrado una disminución altamente significativa en comparación con WT T7 y los productos competitivos, al tiempo que garantiza que el rendimiento y la integridad no se reduzcan.
| Longitud del fragmento | Polímero de ARN T7 | Producir(mg/ml） |
Integridad(%） | Contenido de dsRNA (ng de dsRNA producido por 1ug de ARN) |
| 4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0,4273 |
| Limpiar Crip™ T7 | 12.1 | 89.9 | 0,0129 | |
| Empresa A | 11.0 | 87.8 | 0,0323 | |
| 9K | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
| Limpiar Crip™ T7 | 9.0 | 82.0 | 0,0379 | |
| Empresa A | 7.2 | 78,7 | 0,1805 |
Usando Con una concentración de 2,5 mM, se puede lograr una excelente eficiencia de recubrimiento en diferentes longitudes de fragmentos en comparación con el WT. Además, también se observa un rendimiento superior de expresión de proteínas a nivel celular.
| Entrada analógica de tapa (millones） | Eficiencia de tapado（%）4K | |
| Peso | ARNbc bajo | |
| 10 | 100 | 100 |
| 5 | 100 | 100 |
| 2.5 | 100 | 100 |
Se ha presentado una patente en Estados Unidos.
Información del producto
| Nombre del producto | Número de catálogo | Especificación | Volumen |
| Escritura limpiaMT. ARN polimerasa T7 (ARNbc bajo, 250 U/μL) | 10628ES | 100/2500/25 000 KU | 400 μL/10 mL/100 mL |
| Escritura limpiaMT. ARN polimerasa T7 de grado GMP (ARNbc bajo, 250 U/μL) | 10629ES | 100/2500/25 000 KU | 400 μL/10 mL/100 mL |