La ultranucleasa UCF.ME™, también conocida como nucleasa totipotente, nucleasa de amplio espectro y endonucleasa inhibidora no limitante, se originó a partir de Serratia Marcescen, pero posteriormente fue rediseñada y producida por el equipo de investigación y desarrollo de Yeasen, expresada en E. coli. Tiene un peso molecular de 26,5 kD y un punto isoeléctrico de 6,85. Sorprendentemente, tiene la capacidad de degradar completamente el ácido nucleico en oligonucleótidos 5'-monofosfato que varían de 2 a 5 bases de longitud. Tanto la ultranucleasa como la ultranucleasa activa con sal sirven como excelentes alternativas a la benzonasa.
1. ¿Qué es la nucleasa totipotente?
2. ¿Cuáles son los escenarios de uso de la nucleasa totipotente?
3. ¿Cuáles son las ventajas que debe tener la nucleasa totipotente?
4. Preguntas frecuentes
5. Productos relacionados
1. ¿Qué es la nucleasa totipotente?
Las nucleasas totipotentes son endonucleasas modificadas genéticamente con la capacidad de degradar una amplia gama de formas de ácidos nucleicos, que abarcan ácidos nucleicos monocatenarios, bicatenarios, lineales, nativos y desnaturalizados. Generan oligonucleótidos 5'-monofosfato con longitudes que van de 3 a 5 bases y no muestran reconocimiento de bases específicas. Estas nucleasas versátiles muestran una estabilidad y una actividad de digestión robustas en diversas condiciones, lo que las hace altamente eficientes para eliminar residuos de ácidos nucleicos en muestras o productos. Esto mejora la pureza de la muestra y la eficacia biológica de los productos, lo que convierte a las nucleasas totipotentes en la preparación enzimática preferida para la investigación científica, las vacunas y las industrias como la de los productos farmacéuticos proteínicos y polisacáridos.
Además, las nucleasas totipotentes desempeñan un papel crucial en la eliminación de ácidos nucleicos durante la preparación de vacunas, anticuerpos, terapia celular y otros productos biológicos, lo que garantiza el cumplimiento de las regulaciones de la FDA que estipulan que el ácido nucleico residual en el producto final para uso terapéutico no debe superar los 10 pg/dosis. Al degradar los ácidos nucleicos, las nucleasas totipotentes reducen la viscosidad de los lisados celulares, lo que facilita el proceso de filtración/ultrafiltración de la solución durante la purificación de partículas derivadas de células, como virus, vectores AAV y cuerpos de inclusión. Esto agiliza el procesamiento, mejora la centrifugación, mejora la eficiencia de separación de la precipitación y el sobrenadante y aumenta la eficacia de la purificación cromatográfica, lo que en última instancia aumenta el rendimiento y la pureza del producto.
2. ¿Cuáles son los escenarios de uso de la nucleasa totipotente?
UltraNuclease tiene una amplia gama de aplicaciones y aquí están los escenarios de uso específicos.
2.1 Purificación de virus (lentivirus, AAV, vacuna de adenovirus recombinante, virus inactivados, virus oncolíticos, etc.)
El uso de virus en el sector biomédico se está expandiendo significativamente y abarca aplicaciones como vacunas, terapia celular, terapia génica y otros campos. Las células huésped responsables de la producción de virus son predominantemente células de paso continuo (CCL). Las CCL muestran una predisposición genética al crecimiento descontrolado, lo que les otorga la capacidad de proliferar indefinidamente. Sin embargo, la presencia de ADN residual de las CCL puede plantear riesgos potenciales, como la proliferación descontrolada de células humanas que conduce a la formación de tumores. Además, estos fragmentos de ADN residual pueden contener genomas virales infecciosos, lo que genera inquietudes sobre el riesgo de infección junto con la tumorogénesis. En consecuencia, son imperativas medidas de control estrictas para gestionar el ADN residual en los productos biológicos, garantizando su seguridad. En este sentido, nuestra UCF.ME™ UltraNuclease ofrece una solución segura para la purificación de virus.
La sal desempeña un papel fundamental en la mitigación de la agregación de proteínas o virus, facilitando la separación del ADN y el ARN de las proteínas y otros componentes celulares. La UltraNucleasa Activa de Sal, al ser una endonucleasa no específica, exhibe una actividad óptima en altas concentraciones de sal. En condiciones de alta salinidad, las enzimas obtienen un mejor acceso al ADN y ARN liberados, mejorando su degradación. Las nucleasas con mayor actividad en entornos de alta salinidad demuestran ser más efectivas para mejorar los procesos de purificación. La UltraNucleasa Activa de Sal se puede emplear para reducir la viscosidad en los sobrenadantes y lisados celulares, mejorando la eficiencia de la purificación en condiciones de alta salinidad. Esta enzima también reduce los residuos de ácidos nucleicos del huésped al nivel de picogramos, mejorando así el rendimiento y la seguridad de varias aplicaciones de productos biológicos, incluida la purificación de virus, la fabricación de vacunas y la producción de productos farmacéuticos proteicos y polisacáridos.
2.2 Purificación de la proteína recombinante expresada en E. coli
Algunas proteínas expresadas en E. coli tienen tendencia a agregarse en cuerpos de inclusión, lo que complica el proceso de purificación, ya que a menudo se entrelazan con el ADN del huésped. Las células bacterianas rotas resultantes pueden presentar una alta viscosidad, lo que disminuye significativamente la eficiencia de la purificación de proteínas. Sin embargo, al introducir 10-50 U/mL de UCF.ME™ UltraNuclease en la solución bacteriana durante la disrupción ultrasónica e incubar la muestra a 37 °C durante 30 minutos o a 4 °C durante la noche después de completar la disrupción, se puede reducir eficazmente la viscosidad en la solución bacteriana. Esto, a su vez, mejora sustancialmente la eficiencia del proceso de purificación. En resumen, puede confiar en nuestra UCF.ME™ UltraNuclease para facilitar la purificación eficaz de la proteína.
2.3 Prevenir la aglomeración celular
En los últimos años, el uso de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) criopreservadas en inmunoensayos ha aumentado drásticamente. La característica más importante de las células PBMC es que son muy fáciles de aglutinar después de la reanimación, lo que puede conducir fácilmente a una baja calidad celular y a resultados de pruebas poco confiables. Cuando se reaniman las células, se agrega la concentración adecuada (25-50 U/mL) de UCF.ME™ UltraNuclease al medio de cultivo y las células se cocultivan, lo que puede prevenir eficazmente la aglutinación celular. Por lo tanto, puede aprovechar al máximo nuestra UCF.ME™ UltraNuclease para aumentar las probabilidades de un resultado exitoso.
3. ¿Cuáles son las ventajas que debe tener la nucleasa totipotente?
3.1 Amplia gama de aplicaciones
La UltraNucleasa UCF.ME™ puede cortar y degradar varias formas de ADN y ARN en una variedad de condiciones experimentales y puede aplicarse para eliminar el ácido nucleico residual en varios productos biológicos.
3.2 Alta pureza, alta actividad enzimática.
Para nuestra UltraNucleasa UCF.ME™, su pureza enzimática es mayor o igual al 99% (HPLC) y su actividad enzimática es mayor o igual a 1,5*106 U/mg (utilizando un método cuantitativo absoluto para sustrato general).
3.3 Fuerte adaptabilidad
La ultranucleasa UCF.ME™ tiene una alta estabilidad en el almacenamiento y en condiciones de congelación y descongelación. Almacenamos la ultranucleasa UCF.ME™ a -20 °C, 4 °C y 37 °C para detectar la tendencia de la actividad enzimática. Cuando se colocó a 37 °C durante 2 semanas, no hubo cambios significativos en la actividad enzimática.Mientras tanto, para garantizar la estabilidad de la enzima, utilizamos una combinación de hielo seco + paquete de hielo para transporte UltraNucleasa UCF.ME™ a su disposición. También tiene una gran tolerancia y puede adaptarse a una variedad de condiciones de funcionamiento.
3.4 Cumplir con la farmacopea
La UltraNucleasa UCF.ME™ se fabrica en UCF.ME (Fábrica Ultra Limpia. Enzima Molecular) y es un tipo de enzima ultralimpia. ¿Qué es una enzima ultralimpia? Es una enzima molecular que alcanza estándares de calidad de no HCD, HCR, HCP, SIN ADNSA, SIN ARNSA, sin residuos de proteasa, sin residuos microbianos, sin patógenos, de origen animal, sin contaminación por antibióticos, con residuos de endotoxinas ultra bajos, alta actividad enzimática y alta pureza, etc. Por lo tanto, puede confiar en nuestros productos de manera segura y confiable.
3.5 Producción GMP
Todo el proceso de producción de UltraNuclease se completa en el taller de producción GMP y el plan de inspección de calidad es estrictamente realizado por el farmacopea método, satisfaciendo la demanda a gran escala desde la investigación y el desarrollo hasta la producción.
UCF.ME™ Socio de UltraNuclease: kit ELISA UltraNuclease
En los pasos de purificación normales, UCF.ME™ Ultranucleasa Se elimina fácilmente como impureza. Para detectar el residuo de UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN ha desarrollado el kit ELISA UltraNuclease de apoyo, que puede detectar con precisión el residuo de UCF.ME™ UltraNuclease en la muestra. El kit tiene una linealidad, repetibilidad, tasa de recuperación y especificidad excelentes.
Ultranucleasa Kit ELISA
El rango lineal está entre 0,047 y 3 ng/mL, y R2 es mayor que 0,99. Con una buena reproducibilidad entre lotes, agregamos una concentración fija de UltraNuclease a la muestra y usamos 3 lotes diferentes de kits ELISA para la detección. La tasa de recuperación de la detección está entre el 70% y el 110% cuando la concentración de nucleasa está entre 3 y 0,186 ng/mL, y el CV es menor del 10%. Además, las tasas de recuperación de muestra simuladas de UltraNuclease con diferentes concentraciones están todas entre el 70% y el 130% y son mejores que las de otras marcas. También tiene una fuerte especificidad que evaluamos la unión no específica del anticuerpo UltraNuclease a 8 muestras comunes. Los resultados del grupo de interferencia y el grupo de control se superpusieron, y no se observó ninguna interferencia.
Tras la presentación de DMF de UltraNuclease, YEASEN ha obtenido DMF de Ultranucleasa activa salina de la FDA de EE. UU.
El número de presentación es:
| Número | Nombre del producto | Número de presentación |
| 1 | Ultranucleasa | MF037298 |
| 2 | Ultranucleasa activa de sal | MF037815 |
4. Preguntas frecuentes
P1: ¿En qué paso agregar UltraNuclease?
R: Depende de las muestras con las que se esté trabajando. En la purificación de virus, generalmente se agrega después de la clarificación del virus; en la purificación de proteínas de E. coli, se puede agregar cuando las células están lisadas; en el caso de la agregación celular, se puede agregar directamente al medio para el cocultivo con células.
Pregunta 2: Si la temperatura de reacción no puede alcanzar los 37°C, ¿cómo utilizarlo?
A: La actividad enzimática de UltraNuclease se ve afectada por la temperatura, el tiempo de tratamiento y las unidades de actividad enzimática. Si la temperatura no puede alcanzar los 37 °C, se puede agregar la cantidad de enzima adecuada o se puede extender el tiempo de incubación.
P3: ¿UltraNuclease es compatible con los inhibidores de proteasa?
A: Compatible, pero tenga en cuenta que muchos inhibidores de proteasa contienen EDTA. Cuando el EDTA comienza a ser superior a 1 mM, inhibirá la actividad de algunas nucleasas.
Pregunta 4: ¿Cómo eliminar UltraNuclease?
A: Se puede eliminar mediante métodos como TFF, diálisis y columnas cromatográficas.
Pregunta 5: ¿Se puede utilizar el kit ELISA UltraNuclease para la detección de otras marcas de residuos de nucleasas totipotentes?
A: No recomendamos hacer esto. El kit ELISA está completamente desarrollado en base a UltraNuclease y puede cuantificar UltraNuclease con precisión. Las nucleasas altipotentes de otras marcas pueden ser diferentes de UltraNuclease en términos de secuencia y proceso de producción, y los resultados de la prueba pueden ser inexactos.
5. Productos relacionados
Los productos proporcionados por Yeasen son los siguientes.
Tabla 1 Productos relacionados
| Nombre del producto | Código SKU | Presupuesto |
| 20157ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Sal activa Kit ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |