Descripción
La ARN polimerasa T7 utiliza ADN bicatenario que contiene la secuencia promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') como plantilla y NTP como sustratos para sintetizar ARN complementario a la cadena inversa de ADN aguas abajo del promotor. Tanto el ADN bicatenario lineal con extremos romos o salientes 5' pueden servir como sustratos de plantilla para la ARN polimerasa T7, lo que significa que los plásmidos linealizados o los productos de PCR se pueden utilizar como plantillas para la síntesis de ARN in vitro.
Este kit emplea un principio de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) en sándwich para detectar la ARN polimerasa T7 residual. Los estándares de ARN polimerasa T7 y las muestras de prueba se agregan a los pocillos de la microplaca recubiertos previamente con anticuerpos anti-ARN polimerasa T7 (36705-A). Luego se agregan los anticuerpos de detección de ARN polimerasa T7 marcados con biotina diluidos (36705-C), seguidos de estreptavidina-HRP (SA-HRP) (36705-D), formando un complejo anticuerpo + antígeno + anticuerpo-biotina + SA-HRP. Después del lavado, se agrega el sustrato TMB (36705-H) para el desarrollo del color. La TMB es catalizada por HRP para pasar de incolora a azul y finalmente a amarilla tras la adición de la solución de parada (36705-I). La intensidad del color amarillo se correlaciona positivamente con la cantidad de ARN polimerasa T7 detectada en la muestra.
Componentes
| No. | Nombre | 36705ES48 | 36705ES96 |
| 36705-A | Tiras de microtitulación recubiertas con ARN polimerasa anti-T7 | 48 yo | 96T |
| 36705-B* | Estándar: ARN polimerasa T7 | 1 frasco | 2 frasco |
| 36705-C | Detección Anticuerpo:Biotina-conjugado Anticuerpos | 60 microlitros | 120 microlitros |
| 36705-D | Estreptavidina-HRP | 30 microlitros | 60 microlitros |
| 36705-E | Tampón de dilución 1 | 25 ml | 45 ml |
| 36705-F | Concentración de tampón de lavadotasa (20×) | 25 ml | 50 ml |
| 36705-G | Tampón de dilución 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36705-H | Sustrato TMB | 8 ml | 15 ml |
| 36705-I | Detener la solución | 5 ml | 10 ml |
| 36705-J | Sellador de placas | 3 cada uno | 5 cada uno |
*El estándar 36705-B es un polvo liofilizado.
Compatible con la ARN polimerasa T7: 10625, 10628 y 10629.
Datos de validación
Tabla 1. Rango de linealidad: 1～32 ng/mL ，R2=0,999 ，CV≤5%。
| estándar | Concentración.（ (ng/ml) | Promedio（ (ng/ml) | Recuperación（%） | % de CV |
| Norma 1 | 32 | 31.965 | 99,9% | 2,2% |
| Estándar 2 | 16 | 16.070 | 100,5% | 5.0% |
| Estándar 3 | 8 | 7.812 | 97,7% | 2,1% |
| Estándar 4 | 4 | 4.192 | 104,8% | 0,8% |
| Estándar 5 | 2 | 2.020 | 101,8% | 3,5% |
| Norma 6 | 1 | 1.173 | 117,3% | 0,0% |
| CAROLINA DEL NORTE | 0 | / | / | / |
Tabla 2. Alta especificidad
| Nombre de la proteína | Concentración. | Detectado o no |
| PAGPositivo docontrol | 1 ng/ml | Detectado |
| norteNegativo docontrol | 0 ng/ml | Dakota del Norte |
| Ultranucleasa | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| Sal Ultranucleasa activa | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| DNasa I | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| Inhibidor de la ARNasa murina | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| Enzima de operculación de vaccinia | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| Pirofosfatasa inorgánica | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| ARNm Cap 2 ´-O-Metiltransferasa | 10 μg/ml | Dakota del Norte |
| 1% de BSA | 10 metrog/ml | Dakota del Norte |
Tabla 3. LOQ: El límite de cuantificación de este producto se determina diluyendo el punto de concentración más bajo de la curva estándar, donde el coeficiente de variación (CV) en la concentración más baja es inferior al 20%. Esto se define como el límite de cuantificación, que es 1 ng/mL.
| Std6 valor teórico (ng/ml) | Valor medio de la prueba estándar 6 (ng/ml) | yoest repeticiones | % de CV | Recuperación |
| 1 | 0,858 | 24 | 12,6% | 85,8% |
Tabla 4. LOD: El límite de detección de este producto se define como la concentración estándar correspondiente al valor de detección medio del control negativo (NC) más dos veces la desviación estándar. Al medir 24 estándares NC, calcular la media y la desviación estándar, se determina que el límite de detección es de 0,318 ng/mL.
| Valor medio（sobredosis） | DAKOTA DEL SUR（sobredosis） | Valor medio + 2 DE (OD) | Valor medio + 2 DE (ng/ml) |
| 0,0527 | 0,0038 | 0,0604 | 0,3176 |
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