—— ژنوتیپ بیشتر، زمان کمتر و معرف های کمتر

ژنوتیپ مبتنی بر PCR و سایر آزمایش‌ها اغلب نیاز به خالص‌سازی DNA ژنومی از نمونه‌ها دارند. هنگامی که نمونه های زیادی برای آزمایش وجود دارد، فرآیند خالص سازی DNA ژنومی زمان بر، تکراری و پرهزینه است. YEASEN Biology مجموعه ای از محصولات Direct PCR Kit را با اصلاح Taq DNA پلیمراز و بهینه سازی سیستم واکنش PCR ایجاد کرده است که نیاز به خالص سازی ژنومی را از بین می برد.

PCR هوشمندانه: مستقیم PCR

کیت مستقیم PCR YEASEN مستقیماً از نمونه شروع می شود و با استفاده از حداقل مقادیر نمونه خام (شکل 1-A) یا محصولات لیز شده آنها (شکل 1-B) بدون خالص سازی ژنومی به عنوان الگوهایی برای ژنوتیپ مبتنی بر PCR (شکل 1) استفاده می کند. در مقایسه با ژنوتیپ مبتنی بر PCR معمولی، کیت مستقیم PCR از نمونه کمتری استفاده می کند، کارکرد آن آسان است، هزینه آزمایشی پایینی دارد و امکان تشخیص نمونه با توان بالا را فراهم می کند.

شکل 1 گردش کار تقویت مستقیم PCR

الف. روش مستقیم: مقدار کمی از نمونه را بردارید و مستقیماً برای شناسایی PCR به مخلوط اصلی PCR اضافه کنید.

ب. روش لیز: پس از نمونه برداری، نمونه را به محلول لیز اضافه کنید تا لیز و DNA ژنومی آزاد شود. مقدار کمی از مایع رویی لیزات را بردارید و آن را به PCR Master Mix برای شناسایی PCR اضافه کنید.

مزایای فنی

مستقیم: بدون نیاز به تصفیه DNA وقت گیر و گران قیمت.
سریع: آماده سازی الگو در 10 دقیقه تکمیل شد و واکنش PCR در کمتر از 30 دقیقه تکمیل شد.
ساده: نمونه ها را می توان بدون نیاز به برش یا آسیاب لیز کرد و مخلوط PCR به شکل پیش مخلوط است که تعداد مراحل پیپت را کاهش می دهد.
صرفه جویی: مقدار کمی از مواد استفاده شده.
بازده بالا: واکنش های لیز را می توان در یک صفحه 96 چاهی کامل کرد.
مقاوم در برابر مهار: مقاوم به نمونه های مختلف حیوانی و گیاهی.

فرآیند آزمایشی کیت مستقیم PCR

این سری از محصولات از یک سیستم لیز پروتئاز منحصر به فرد برای لیز نمونه ها استفاده می کنند. محلول لیز را می توان مستقیماً به عنوان یک الگو استفاده کرد و با PCR Master Mix ارائه شده در کیت برای تقویت ژن جفت کرد.

شکل 2 فرآیند آزمایش مستقیم PCR بافت موش

شکل3 فرآیند آزمایش مستقیم PCR روی بافت گیاهی

جدول انتخاب محصول مستقیم PCR

سری محصولات	Mouse Direct PCR نسل دوم	ماوس Direct PCR نسل اول	PCR مستقیم خون	Plant Direct PCR
شماره محصول	10189ES	10185ES	10188ES	10187ES
مشخصات	20 T/50 T/200 T/500 T	50 T/200 T	20 T/50 T/200 T/500 T	50 T/200 T
ویژگی ها
طول آمپلیکون	≤5 کیلوبایت	≤1 کیلوبایت	≤8 کیلوبایت	≤1 کیلوبایت
زمان افزایش (s/kb)	3-20 ثانیه	30 ثانیه	≤2 کیلوبایت: 3-5 ثانیه ≤8 کیلوبایت: 10 ثانیه	60 ثانیه
ارگانیسم های کاربردی	موش ها، موش ها	موش ها، موش ها	انسان، موش، بز، مرغ، خوک و غیره	برنج، ذرت، تنباکو، کلزا، گندم، سویا و غیره.
انواع بافت/مواد قابل اجرا	دم موش، گوش موش، انگشتان پا (با ماهیچه) و سایر اندام ها	دم موش، گوش موش، انگشتان پا (با ماهیچه) و سایر اندام ها	خون تازه حاوی ضد انعقادهای رایج مانند EDTA، هپارین، سیترات، خون سرد (یخ زده) و لکه های خونی خشک تجاری مانند Whatman903^® و FTA^®	برگ های نرم، برگ های پیر، نهال، ساقه های نرم
استفاده از نمونه	بافت: 5 میلی گرم دم موش: 1-5 میلی متر	بافت: 5-10 میلی گرم دم موش: 1-5 میلی متر	خون کامل: 0.5 تا 20 درصد واتمن^® لکه های خونی خشک شده: 1 میلی متر مربع	برگ: 1-10 میلی متر بذر: 1-3 میلی متر
زمان انتشار ژنومی	5-10 دقیقه	15 دقیقه	0-3 دقیقه	0-10 دقیقه
ساختار نهایی محصول	پایان های بلانت	پایان های بلانت	پایان های بلانت	پایان های بلانت
دمای بازپخت	Tm-(2~5)℃	Tm-(2~5)℃	Tm-(1~2)℃	Tm-(2~5)℃
GC Clipping Range	29-70٪	30-70٪	30-75٪	40-65٪
فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3'	بله	بله	بله	بله
برنامه های کاربردی
ژنوتیپ کردن	بله	بله	بله	بله
Multiplex PCR	تا 5 برابر		تا 3-4 برابر
تقویت نمونه مستقیم	بله	بله	بله	بله
سایر ویژگی ها
نشانگر الکتروفورز	بی رنگ	آبی	بی رنگ	آبی
شروع داغ	بله	بله	بله	بله
پیش میکس / کیت	کیت (همراه با مخلوط)	کیت (همراه با مخلوط)	کیت (با مخلوط+بافر)	کیت (همراه با مخلوط)

مزایای محصول

Taq DNA Polymerase اصلاح شده ضمانت مستقیم PCR است: تحمل فوق العاده ای نسبت به مهارکننده ها دارد.

هنگامی که از نمونه های خالص نشده به عنوان الگو استفاده می شود، بسیاری از اجزایی که واکنش های PCR را مهار می کنند معرفی می شوند. دستیابی به نتایج ایده آل یا حتی انجام تقویت PCR با سیستم های واکنش معمولی PCR و Taq DNA پلیمراز دشوار است. مخلوط PCR در این سری از کیت ها، یک پیش مخلوط بهینه شده با فرمول است که از Taq DNA پلیمراز اصلاح شده استفاده می کند، که توانایی اتصال به DNA الگو را افزایش می دهد و تحمل بالاتری نسبت به مهارکننده های معمول PCR دارد، بنابراین سازگاری قالب گسترده تری دارد.

شکل 4 مخلوط PCR در کیت مستقیم PCR تحمل بالاتری نسبت به ناخالصی ها دارد. همان مقدار الگو برای PCR با مخلوط های مختلف PCR استفاده می شود و غلظت های مختلفی از مهارکننده های واکنش PCR به سیستم اضافه می شود. مقدار محصولات PCR در شرایط مختلف مقایسه می شود.

YEASEN مجموعه ای از محصولات را برای نمونه های مختلف توسعه داده است:

I. نوع مخصوص جوندگان: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)

نمونه های قابل اجرا: بافت های موش (مانند دم موش، گوش موش، انگشت موش و غیره)

راندمان تقویت بالا (طول، سرعت، سازگاری GC)

شکل 5 کیت PCR مستقیم بافت موش، لیزات را از بافت های مختلف تقویت می کند. 1: پلاسمید. 2: گوش موش; 3: دم موش; 4: کبد شرایط لیز: لیز 70 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه، غیرفعال سازی 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه. قطعات هدف 1 است kb، 2 kb، 3 kb و 6 kb، با زمان های افزایشی به ترتیب روی 3، 5، 10 و 20 ثانیه بر کیلوبایت تنظیم شده است. م: 10510ES60 (YEASEN).

سازگاری قالب گسترده (10189ES)

شکل 6 از Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus برای لیز مستقیم (70 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه) و تکثیر سلولهای 293 انسانی استفاده شد. (1)، بزاق (2) و بافت پوست سر (3). همه نمونه ها باندهای هدف شفاف M: 10510ES60 (YEASEN) را نشان دادند.

II. نوع جهانی خون چند گونه: کیت پیشرفته مستقیم PCR خون (10188ES)
طول تقویت تا 8 کیلوبایت

شکل 7 قطعات DNA با طول های مختلف مستقیماً از خون کامل انسان با استفاده از کیت Blood Advanced Direct PCR تکثیر شدند. نمونه های خون در دمای 20- درجه سانتیگراد با EDTA به عنوان ضد انعقاد نگهداری شد. غلظت الگوی خون 10 درصد و زمان گسترش روی 10 ثانیه بر کیلوبایت تنظیم شد. M: 10510ES60 (YEASEN).

تحمل بالا

شکل 8 الف: کیت Blood Advanced Direct PCR برای تکثیر قطعه DNA 2 کیلوبایتی با محتوای GC 71 درصد مستقیماً از خون کامل ضد انعقاد EDTA انسان استفاده می شود. غلظت الگوی خون از 0.5 تا 50 درصد گرادیان تنظیم شده است و زمان گسترش روی 10 ثانیه در کیلوبایت تنظیم شده است. ب: کیت Blood Advanced Direct PCR برای تکثیر قطعه DNA 2.2 کیلوبایتی با محتوای GC 67 درصد مستقیماً از خون کامل ضد انعقاد EDTA موش استفاده می شود. غلظت الگوی خون از 0.5-50٪ تنظیم شده است و زمان گسترش 10 ثانیه در کیلوبایت است. M: 10510ES60 (YEASEN).

III. نوع مخصوص گیاه: کیت PCR مستقیم بافت گیاهی (10187ES)
با انواع مختلف نمونه های گیاهی تایید شده است

شکل 9 تکثیر مستقیم از بافت برگ انواع مختلف گیاهان حاصل می شود. M: نردبان DNA 100 جفت باز. ج: DNA ژنومی خالص شده از گیاهان مربوطه به عنوان یک الگو. 1-2: لیز بافت برگ به عنوان الگو. تعداد چرخه: 30 سیکل.

پرونده مشتری

I. شناسایی ژنوتیپ موش

یک شرکت بیولوژیکی در گوانگژو:

شکل 10 تقویت دم ماوس با استفاده از کیت مستقیم PCR ماوس (10189ES). ژن هدف: 500 جفت باز; زمان لیز: 10 دقیقه; سیستم واکنش PCR: 25 میکرولیتر، زمان گسترش: 5 ثانیه در کیلوبایت.

II.تقویت مستقیم ژن برنج

XX دانشگاه

شکل 11 کیت PCR مستقیم گیاهی (10187ES) برای تقویت ژن های مربوط به برنج استفاده می شود.

آرسرخوش پمحصولات

موقعیت یابی محصول	نام محصول	شماره محصول	مشخصات محصول
آگارز با کیفیت بالا	آگارز	10208ES60/76	100 گرم / 500 گرم
لکه های اسید نوکلئیک (زیر نور UV)	رنگ آمیزی ژل اسید نوکلئیک سال قرمز (10000× در آب)	10202ES76	500 میکرولیتر
ارتقاء سریع PCR، می تواند PCR کلنی باشد و برای تقویت الگوی پیچیده مناسب باشد	2×هیف^TM Ultra-Rapid II HotStart PCR Master Mix	10167ES03/08	1 میلی لیتر/5×1 میلی لیتر

مقاله قبلی مقاله بعدی

PCR مستقیم از نمونه های متعدد حیوانات و گیاه