رونویسی معکوس فرآیند تبدیل RNA به DNA مکمل (cDNA) است که با واسطه آنزیم رونوشت معکوس انجام می شود. در حضور پرایمرهای بازپخت، ترانس کریپتاز معکوس ابتدا به الگوی RNA متصل می شود. فعالیت DNA پلیمراز وابسته به RNA مربوط به ترانس کریپتاز معکوس، cDNA را با ترکیب dNTPs از مخلوط واکنش سنتز می کند. این فرآیند منجر به تشکیل یک رشته هیبریدی cDNA:RNA می شود که به عنوان سنتز cDNA رشته اول شناخته می شود.
رونوشت معکوس ویروس لوسمی موش مولونی (M-MLV) یکی از رونوشت‌های معکوس رایج در روش‌های آزمایشگاهی زیست‌شناسی مولکولی است. برای دستیابی به راندمان رونویسی معکوس بالاتر، پایداری حرارتی بهتر و افزایش سرعت سنتز cDNA، رونوشت معکوس اصلی اغلب به صورت مهندسی ژنتیکی ساخته می شود. در حال حاضر، معرف های رونویسی معکوس موجود در بازار معمولاً به زمان واکنش بین 15 تا 30 دقیقه نیاز دارند که نسبتا طولانی است. هنگامی که تعداد نمونه های واکنش زیاد باشد، هزینه کلی زمان می تواند به طور چشمگیری افزایش یابد. محصولات سری رونویسی معکوس 5 دقیقه ای YESSEN می توانند فرآیند رونویسی معکوس را تنها در عرض 5 دقیقه تکمیل کنند و در زمان صرفه جویی کنند و بسیار کارآمد باشند.
| پمحصول پositioning | نام محصول | گربه# |
| پیش میکس رونویسی معکوس سریع، کارآمد و پربازده | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix برای qPCR | 11156ES |
| پیش میکس رونویسی معکوس سریع، کارآمد و پربازده (با حذف gDNA) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| تکمیل سریع یک مرحله ای حذف gDNA و پیش میکس رونویسی معکوس | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix برای qPCR | 11151ES |
| کیت رونویسی معکوس سریع انتخاب پرایمر منعطف (با حذف gDNA) | 11150ES | |
| کیت رونویسی معکوس سریع انتخاب پرایمر منعطف (با رنگ حذف و ردیابی gDNA) | Hifair™ کیت سنتز cDNA رشته اول AdvanceFast | 11149ES |
بوتیک توصیه یک
پیش میکس رونویسی معکوس سریع، کارآمد و پربازده (با حذف gDNA) (Cat #11155ES)
بازده رونویسی معکوس بالا از الگوهای مختلف
| نمونه | 293T سلول | آرابیدوپسیس تالیانا | موش | جگر ماهی |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| برند A | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| برند B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| برند سی | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| برند D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
شکل رونویسی معکوس با استفاده از الگوهای RNA از سلول های 293T انسانی، Arabidopsis thaliana، کبد موش و کبد ماهی انجام شد. برندهای A، B، C و D همگی معرف‌های رونویسی معکوس هضم دو مرحله‌ای با زمان‌های رونویسی معکوس متفاوت از 15 تا 20 دقیقه هستند. نتایج آزمایش نشان می‌دهد که کیت رونویسی معکوس 5 دقیقه‌ای Hifair 11155ES با بازدهی بالاتر در مقایسه با مارک‌های دیگر برتری دارد و مقادیر Ct کمتر است.
توصیه بوتیک دو
پیش میکس هضم یک مرحله‌ای و رونویسی معکوس 5 دقیقه‌ای (Cat #11151ES)
بازده رونویسی معکوس بالا
شکل با استفاده از RNA سلول 293T انسان به عنوان الگو، سه ژن به ترتیب مورد آزمایش قرار گرفتند. مارک‌های A، B و C همگی معرف‌های حذف یک مرحله‌ای gDNA و رونویسی معکوس هستند. نتایج آزمایش نشان می دهد که با ورودی 1 میکروگرم و 10 نانوگرم RNA کل، بازده رونویسی معکوس با کیت 11151ES نسبت به مارک های دیگر، با مقادیر Ct کوچکتر، برتر است.
شکل با استفاده از RNA آرابیدوپسیس تالیانا به عنوان الگو، برندهای A، B و C همگی معرف‌های حذف یک مرحله‌ای gDNA و رونویسی معکوس هستند. نتایج آزمایش نشان می دهد که با ورودی 1 میکروگرم و 10 نانوگرم RNA کل، بازده رونویسی معکوس با کیت 11151ES نسبت به مارک های دیگر، با مقادیر Ct کوچکتر، برتر است.
حساسیت عالی
شکل با استفاده از RNA سلول 293T انسان به عنوان الگو، ژن‌هایی با محتوای 30% GC، 50% GC، 60% GC و 70% GC تکثیر شدند. ورودی‌های RNA کل 100 پی‌گرم، 1 نانوگرم، 10 نانوگرم، 100 نانوگرم و 1 میکروگرم برای رونویسی معکوس و به دنبال آن تشخیص کمی فلورسنت استفاده شد. نتایج نشان می‌دهد که 11151ES می‌تواند رونویسی معکوس را برای ورودی‌های RNA در محدوده 100 pg تا 1 میکروگرم جای دهد.
توصیه بوتیک Tسه
کیت 5 دقیقه ای رونویسی معکوس سریع (گربه #11149/11150ES)
حساسیت بالا، با حداقل محدودیت تشخیص تا 10 pg
شکل با استفاده از RNA کل از سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس با 11149ES انجام شد و cDNA حاصل تحت آنالیز کمی qPCR قرار گرفت. نتایج نشان می‌دهد که 11149ES می‌تواند ورودی‌های RNA را از 10 pg تا 1 میکروگرم با موفقیت معکوس کند و نتایج کمی دقیق را تضمین کند.
عملکرد تقویت خوب، با طولانی ترین تقویت یک قطعه 14 کیلوبایتی
شکلبا استفاده از RNA کل از سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس با 11149ES انجام شد و cDNA حاصل تحت تشخیص PCR قرار گرفت. نتایج نشان می‌دهد که 11149ES قادر به سنتز قطعات cDNA با طول 1 تا 14 کیلوبایت است، با PCR بعدی که سناریوهای کاربردی خاصی دارد. اگر نیاز به رونویسی معکوس مستقیم قطعات بیش از 10 کیلوبایت باشد، توصیه می‌شود زمان رونویسی معکوس را به 20-30 دقیقه افزایش دهید تا از بدست آوردن قطعات نهایی اطمینان حاصل شود.
مقایسه کارایی رونویسی معکوس
| مقدار ورودی RNA | مقدار Ct | |
| 11149ES | برند A | |
| 1 میکروگرم | 15.2 | 15.5 |
| 100 نانوگرم | 18.0 | 18.5 |
| 10 نانوگرم | 21 | 21.7 |
| 1 نانوگرم | 24.5 | 25.1 |
| 100 صفحه | 29.1 | 29.7 |
| 10 صفحه | 32.7 | 34.3 |
شکل با استفاده از RNA کل از سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس با 11149ES و نام تجاری A انجام شد، با 11149ES که تحت مرحله حذف gDNA قرار نگرفت. cDNA حاصل تحت آنالیز کمی qPCR قرار گرفت. نتایج نشان می دهد که زمان رونویسی معکوس برای برند A 13 دقیقه، در حالی که برای 11149ES 5 دقیقه بوده است. تجزیه و تحلیل کمی محصولات مختلف نشان می دهد که مقادیر Ct برای 11149ES کوچکتر یا مشابه با مارک های رقابتی است، که نشان می دهد راندمان رونویسی معکوس 5 دقیقه ای 11149ES نسبت به مارک A برتر یا تقریباً معادل است.
| مقدار ورودی RNA | مقدار Ct | |
| 11149ES | برند B | |
| 1 میکروگرم | 16.2 | 17.4 |
| 100 نانوگرم | 19.0 | 20.5 |
| 10 نانوگرم | 22 | 23.8 |
| 1 نانوگرم | 26 | 27.9 |
| 100 صفحه | 31.4 | 33.2 |
| 10 صفحه | 32.9 | 35.6 |
شکلبا استفاده از RNA کل از سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس با 11149ES و Brand B انجام شد، با 11149ES که مرحله حذف gDNA را طی نمی کرد. cDNA حاصل تحت آنالیز کمی qPCR قرار گرفت. نتایج نشان می دهد که زمان رونویسی معکوس برای برند B 20 دقیقه، در حالی که برای 11149ES 5 دقیقه بود. تجزیه و تحلیل کمی مقادیر مختلف زیرلایه نشان می دهد که مقادیر Ct برای 11149ES کوچکتر یا مشابه با مارک B است، که نشان می دهد راندمان رونویسی معکوس 5 دقیقه ای 11149ES نسبت به مارک B یا تقریباً معادل آن است.
محصولات مرتبط توصیه شده
| روش | پمحصول پositioning | نام محصول | گربه# |
| qPCR مبتنی بر رنگ | پیش مخلوط کمی جهانی با ویژگی بالا (مبتنی بر رنگ) | Hieff UNICON™ پیشرفته qPCR SYBR Master Mix | 11185ES |
| پیش مخلوط کمی جهانی با حساسیت بالا (مبتنی بر رنگ) | 11184ES | ||
| رونویسی معکوس | پیش میکس هضم یک مرحله ای و رونویسی معکوس 5 دقیقه ای (برای qPCR) | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix برای qPCR | 11151ES |
| رونویسی معکوس سریع 5 دقیقه ای، قادر به سنتز cDNA تا 14 کیلوبایت، با حذف gDNA (برای PCR/qPCR) - نسخه Tracer | Hifair™ کیت سنتز cDNA رشته اول AdvanceFast | 11149ES | |
| رونویسی معکوس سریع 5 دقیقه ای، قادر به سنتز cDNA تا 14 کیلوبایت، با حذف gDNA (برای PCR/qPCR) | Hifair™ کیت سنتز cDNA رشته اول AdvanceFast (بدون رنگ) | 11150ES | |
| پیش مخلوط سنتز cDNA رشته اول با کیفیت بالا، با حذف gDNA (برای qPCR) | Hifair™ III 1st Strand CDNA Synthesis SuperMix برای qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES |