خطی PEI 40000، یک معرف ترانسفکشن کارآمدتر
به طور کلی، ترانسفکشن فرآیند وارد کردن مصنوعی اسیدهای نوکلئیک (DNA یا RNA) به سلول‌های یوکاریوتی است. معرف های ترانسفکشن، همانطور که از نامش پیداست، مجموعه ای از معرف های دخیل در ترانسفکشن هستند. در طول فرآیند ترانسفکشن، ما اغلب با راندمان ترانسفکشن پایین، محدوده کاربرد باریک، سمیت قوی، عملیات دست و پا گیر و قیمت گران معرف های ترانسفکشن دچار مشکل می شویم. بنابراین، آیا یک معرف ترانسفکشن وجود دارد که بتواند این مشکلات را حل کند؟ بله، PEI خطی بهترین انتخاب برای حل این مشکلات است.
توجه: Yeasen یک Novel PEI راه اندازی کرده است معرف ترانسفکشن Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV برای تولید در مقیاس بزرگ ناقل های مختلف ویروس و بیان گذرا پروتئین های مناسب برای سیستم های چسبنده و سوسپانسیون.
1. انواع ترانسفکشن سلولی چیست؟
2. خطی PEI MW 40000 چیست؟
3. خطی PEI MW 40000 چگونه کار می کند؟
4. ویژگی های PEI MW 40000 چیست؟
5. دیگر معرف های ترانسفکشن از Yeasen
6. با توجه به خواندن
1. انواع ترانسفکشن سلولی چیست؟
قبل از معرفی خطی PEI MW 40000، اجازه دهید ابتدا به طور خلاصه انواع ترانسفکشن سلولی را درک کنیم. ترانسفکشن سلولی برای تحقیقات ژنتیکی، تحقیقات پروتئینی و تحقیقات سیتولوژی اهمیت زیادی دارد، که به فرآیند وارد کردن مصنوعی اسیدهای نوکلئیک (DNA یا RNA) به سلول ها با استفاده از ابزارهای عفونت غیر ویروسی اشاره دارد. هدف اصلی ترانسفکشن، مطالعه عملکرد ژن ها یا محصولات ژنی، با افزایش یا مهار بیان ژن خاص در سلول ها، یا تولید پروتئین های نوترکیب است. معرفی اسید نوکلئیک اگزوژن ویژگی های سلول ها را تغییر می دهد تا به هدف ترانسفکشن دست یابد که برای مطالعه تنظیم ژن و بیان پروتئین و همچنین سنتز و تولید پروتئین ها مفید است.
ترانسفکشن های سلولی را می توان با روش های شیمیایی، بیولوژیکی و فیزیکی یا زمان ماندن یک ژن خارجی در سلول تقسیم کرد. در ترانسفکشن گذرا، اسید نوکلئیک معرفی شده می تواند برای مدت محدودی بدون تکثیر در سلول وجود داشته باشد، در حالی که با ترانسفکشن پایدار، نوکلئیک اسید وارد شده در ژنوم میزبان ادغام می شود و می تواند در نتاج سلول ترانسفکت شده بیان شود.
با روش‌های مختلف انتقال سلولی، چگونه روش مناسب را انتخاب کنیم؟
هیچ روش ترانسفکشن واحدی برای همه انواع سلول مناسب نیست و تمام نیازهای تجربی را برآورده می کند. روش ترانسفکشن بهینه باید با توجه به الزامات نوع سلول و شرایط آزمایشی انتخاب شود.
در حال حاضر، معرفهای ترانسفکشن شیمیایی به دلیل سهولت کار و سازگاری با انواع رده‌های سلولی، هنوز روش‌های اصلی انتقال سلول هستند.
2. خطی PEI MW 40000 چیست؟
پلی اتیلن خطی (PEI) MW40000 (لیز سریع) یک معرف ترانسفکشن گذرا بر پایه پلی اتیلن ایمین با وزن مولکولی 40000 (PEI 40000) است. PEI 40000 یک پلیمر کاتیونی بسیار باردار است که به راحتی می تواند مولکول های اسید نوکلئیک با بار منفی را به هم متصل کرده و کمپلکس ها را تشکیل دهد و در نتیجه کمپلکس هایی را به سلول وارد کند.
در مقایسه با معرف ترانسفکشن PEI 25000، PEI 40000 به راحتی حل می شود و می تواند مستقیماً در آب حل شود. علاوه بر این، PEI 25000 حاوی 4-11٪ باقی مانده های پروپیونیل است که از اتصال ستون فقرات پلیمری به DNA جلوگیری می کند.اما PEI 40000 یک ساخت سوله کامل است، بنابراین عملکرد آن به طور مداوم کارآمد است.
3. خطی PEI MW 40000 چگونه کار می کند؟
پلی اتیلن ایمین (PEI) یک ناقل غیر ویروسی چند منظوره عالی با چسبندگی سلولی خوب است و می تواند برای انتقال سلول ها مستقل از مهارکننده های لیزوزومی استفاده شود. PEI و DNA توسط نیروهای الکترواستاتیکی محدود می شوند و باعث می شوند DNA از ساختار سیم پیچ سست به مجتمع های ذرات کروی فرو بریزد. کمپلکس‌های PEI-DNA معمولاً دارای بار مثبت هستند تا به صورت الکترواستاتیکی با غشای سلولی خارجی تعامل داشته و توسط اندوسیتوز جذب شوند. سپس مجتمع‌های PEI-DNA اندوسیتوز شده توسط آندوزوم‌ها برای انتقال به لیزوزوم‌ها برای تخریب دستگیر می‌شوند. فشار یونی داخلی در حال افزایش باعث تورم و پارگی آندوزوم می شود و DNA خارجی را در سیتوپلاسم آزاد می کند. این مکانیسم ترانسفکشن اثر "اسفنج پروتون" نامیده می شود.
مطالعات نشان داده اند که مولکول های PEI می توانند سطح کمپلکس های PEI-DNA را بپوشانند تا به اندازه کافی از DNA در برابر تخریب توسط نوکلئازها در سیتوپلاسم محافظت کنند و از انتقال DNA خارجی از سیتوپلاسم به هسته اطمینان حاصل کنند. علاوه بر این، مولکول‌های PEI می‌توانند وارد غشاهای فسفولیپید شوند و کانال‌های پایداری برای انتقال DNA به هسته سلول ایجاد کنند. مولکول های PEI وارد هسته سلول نمی شوند و نقش مهمی به عنوان یک ناقل DNA ایفا می کنند.
بیان ژن را می توان 1-4 روز پس از معرفی ژن اگزوژن به سلول های پستانداران تشخیص داد. این بیان به این دلیل است که بخشی از DNA معرفی شده پس از ورود به هسته به mRNA رونویسی می شود و سپس به سیتوپلاسم ترجمه می شود. از آنجایی که اجرای این روش نسبتاً ساده و آسان است، با انتخاب یک بردار بیانی خوب و روش ترانسفکشن می توان میزان بیان پروتئین را به سطح بالاتری رساند. معرف های ترانسفکشن PEI به طور گسترده در تحقیقات علمی و کاربردهای صنعتی به عنوان یک روش ترانسفکشن رایج برای مطالعه ساختار و عملکرد پروتئین استفاده شده است.
4. ویژگی های PEI MW 40000 چیست؟
به عنوان یک معرف انتقال گذرا با سمیت سلولی کم، PEI 40000 دارای راندمان انتقال بالا و کارایی بیان ژن بالا در سلول هایی مانند HEK293 و CHO است. معرف ترانسفکشن خطی PEI برای طیف وسیعی از رده های سلولی از جمله سلول های HEK-293، HEK293T، CHO-K1، COS-1، COS-7، NIH/3T3، HepG2 و سلول های Hela تأیید شده است. راندمان ترانسفکشن 80 تا 90 درصد است. برای مشاهده داده های عملکرد ادامه دهید:
- راندمان انتقال بالا، مناسب برای سلول های چسبنده و معلق
این برای انواع رده های سلولی از جمله HEK-293، HEK293T، CHO-K1، COS-1، COS-7، NIH/3T3، Sf9، HepG2، و سلول های Hela و غیره مناسب است، راندمان انتقال به 80٪ تا 90٪ می رسد.
جدول 1.فهرست خطوط سلولی معتبر
| سلول های چسبنده (1 میکروگرم DNA) | کارایی | سلول های معلق (2 میکروگرم DNA) | کارایی |
| HEK-293 | 80-90٪ | CHO-K1 | 85% |
| Sf9 | 80-90٪ | HEK-293T | 70-80% |
| HepG2 | 80-90٪ | THP-1 | 70-80% |
| هلا | 80-90٪ |
| |
شکل 2. PEI 40000 پلاسمید GFP را به سلول های چسبنده HEK-293 ترانسفکت کرد، بازده انتقال پس از 72 ساعت به 90% رسید (سمت چپ). PEI 40000 پلاسمید GFP را به سلول های سوسپانسیون CHO-K1 ترانسفکت کرد و راندمان ترانسفکشن پس از 72 ساعت به 80 درصد رسید (سمت راست)
- سمیت کم
این زنده ماندن سلول را تضمین می کند و کارایی انتقال را بهبود می بخشد.
شکل 3. PEI 40000 ارائه شده توسط YEASEN دارای سمیت سلولی بسیار کمتری نسبت به پلی رقیب است**
- راندمان ترانسفکشن بالاتر از PEI 25000 است که می تواند به طور کامل جایگزین PEI 25000 شود.
PEI 25000 حاوی 4-11 درصد باقیمانده پروپیونیل است که از اتصال ستون فقرات پلیمری به DNA جلوگیری می کند. در مقایسه با PEI 25000، PEI 40000 یک ساخت سوله کامل است، بنابراین عملکرد آن به طور مداوم کارآمد است.
شکل 4. سلول های HEK-293 به طور موقت با پلاسمید GFP با استفاده از معرف های ترانسفکشن PEI 25000 و PEI 40000 ترانسفکت شدند و فلورسانس پس از 72 ساعت مشاهده شد. نتایج تجربی: راندمان ترانسفکشن PEI 40000 بهتر از PEI25000 است.
- پیکربندی ساده و زمان انتقال کوتاه
این محصول از نوع فوری بوده و بدون تنظیم PH به طور مستقیم در آب حل می شود. و سازگار با سرم و آنتی بیوتیک، بدون نیاز به تغییر محیط.
- مقرون به صرفه، مناسب برای ترانسفکشن گذرا در مقیاس بزرگ
معرف ترانسفکشن Yeasen PEI 40000 در مقایسه با محصولات وارداتی دارای قیمت پایین و دسته های پایدار است.
5. دیگر معرف های انتقال از Yeasen
Yeasen دارای خط تولید کاملی از معرفهای ترانسفکشن است، از جمله روش‌های رایج ترانسفکشن شیمیایی، معرفهای لیپوزوم کاتیونی، و معرفهای پلیمری کاتیونی، که می‌تواند در انواع سناریوهای استفاده اعمال شود. در این بخش، تمام معرفهای ترانسفکشن Yeasen و کاربردهای آن‌ها را در جدول زیر فهرست می‌کنیم، شما می‌توانید بهترین مورد را که برای آزمایش خود مناسب است انتخاب کنید.
جدول 2.لیست معرفهای ترانسفکشن Yeasen
| گربه# | نام محصول | نوع اسید نوکلئیک | نوع سلول |
| 40823ES | DNA | پایبند و سلول های معلق | |
| 40816ES | DNA | پایبند و سلول های معلق | |
| 40820ES | DNA | پایبند و سلول های معلق | |
| 40821ES | DNA | پایبند و سلول های معلق | |
| 40802ES | DNA (<10kb)، shRNA | الفسلول های ورنتی | |
| 40805ES | Hieff Trans™ Suspension بدون سلول معرف ترانسفکشن لیپوزومی (پرس و جو کنید) | DNA (<10kb) | سلول های معلق (برای سلول های خونی معلق یا ایمنی سلول ها، کارایی ترانسفکشن از معرف های شیمیایی فعلی است بالا نیست روش الکتروپوراسیون یا ویروس توصیه می شوند.) |
| 40806ES | siRNA،miRNA،pre-miRNA، mimic miRNA، antitimiRNA | سلول های چسبنده و معلق |
6. با توجه به خواندن
معرف ترانسفکشن - Hieff Trans™ و PEI
راهنمای انتخاب محصول معرف انتقال سلول در شرایط آزمایشگاهی
مرجع：
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). شکل گیری و رفتار تجمعی مجتمع های پلی اتیلن-DNA. گروه داروسازی، نانجینگ 210009.
[2] سابین، ج.، و همکاران. (2022). بینش های جدید در مورد مکانیسم انتقال پلی اتیلن و پیامدهای آن بر ژن درمانی و واکسن های DNA کلوئیدها و سطوح B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] انتقال گذرا سلولی پستانداران با پلی اتیلنیمین (PEI). Longo PA، Kavran JM، Kim MS، Leahy DJ