La peste porcine africaine (PPA) est une maladie infectieuse aiguë, grave et hautement contagieuse causée par le virus de la peste porcine africaine (PPA) qui infecte les porcs domestiques ou les sangliers. Sa morbidité et sa mortalité peuvent atteindre 100 %, mettant gravement en danger l'industrie porcine mondiale et causant des pertes économiques incalculables. L'Organisation mondiale de la santé animale (OIE) la classe parmi les maladies animales à déclaration obligatoire.

Il n’existe actuellement aucun vaccin ni traitement efficace contre la peste porcine africaine. Un diagnostic rapide et précis de la peste porcine africaine par des méthodes de diagnostic en laboratoire est essentiel pour prévenir la propagation de la maladie. L’OIE recommande la qPCR comme principal outil de diagnostic de routine de la PPA.

Yeasen est un fabricant possédant une riche expérience dans la recherche et le développement de matières premières IVD. Face à la peste porcine africaine, Yeasen réagit positivement et coopère avec ses clients pour développer trois solutions de processus complètes, de l'extraction à la détection du virus de la peste porcine africaine. Quelles sont donc ces trois solutions ? Et quelles sont les applications de ces solutions ? Continuer à lire...

Figure 1. Solutions de détection de la peste porcine africaine Yeasen

Solution I : TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)（enquête）

Caractéristiques du produit

👍Système antipollution UDG, prévenant efficacement le risque de contamination par aérosols

👍Stabilité à long terme de la solution PCR pré-mélangée (master mix + amorces + sondes) à température ambiante, simplifiant considérablement la difficulté de détection

👍Efficacité d'amplification élevée et bonne répétabilité

👍Adapté aux systèmes et plateformes multiples

Présentation de cas

👉Stabilité à long terme de la solution PCR pré-mélangée
Le numéro de référence 13171 a été utilisé pour configurer la solution PCR pré-mélangée qui peut être placée à 37 °C pendant 7 jours et répétée 15 fois de congélation et de décongélation dans l'amplification du système plasmidique ASF. Les résultats ont montré que la valeur Ct et la sensibilité de la solution PCR n'ont pas significativement différé après 7 jours à 37 °C, et la valeur Ct n'a pas changé de manière significative après 15 fois de congélation et de décongélation répétées.

Figure 2. Mélange maître qPCR multiplex TaqMan Cat#13171 (UDG plus) (Renseigner) utilisé dans une solution PCR pré-mélangée avec une stabilité à long terme dans l'amplification du système plasmidique ASF. 2A-Valeur Ct à 37℃ pendant 0 jour et 7 jours 2B-Sensibilité à 37℃ pendant 0 jour et 7 jours 2C-Stabilité après congélation-décongélation 15 fois

👉Réactifs stables et reproductibles
Quatre lots différents de Cat#13171 ont été sélectionnés pour répéter l'expérience d'amplification du système plasmidique ASFV 20 fois. Aucune différence significative n'a été observée dans les valeurs de Ct, avec un CV inférieur à 1 %.

Figure 3.Test de répétabilité du Yeasen Cat#13171

👉Applicable multi-plateforme multi-système
Le Yeasen Cat#13171 a été utilisé pour amplifier les plasmides doubles ASFV/ACT de la peste porcine africaine sur les plateformes Bio-Rad CFX96, ABI Q5 et Slan respectivement. On peut constater que le Yeasen Cat#13171 est adapté à différents types d'instruments et que les données sont fiables et stables.

Figure 4. Système de PCR en temps réel Bio-Rad CFX96

Figure 5. Système PCR en temps réel ABI Q5

Figure 6. Système PCR en temps réel Slan

Solution II:Master mix qPCR multiplexé TaqMan universel

Le mélange maître qPCR multiplex Universal TaqMan de Yeasen (réf. 11211) est optimisé pour une amplification efficace de modèles à faible concentration à l'aide d'ADN polymérase Taq à démarrage à chaud modifiée par anticorps et d'un tampon multiplex correspondant. Ce produit prend en charge jusqu'à 4 réactions de PCR dans un seul tube et est idéal pour le génotypage et l'analyse qPCR multiplex.

Caractéristiques du produit

👍Forte tolérance aux impuretés sanguines, peut être utilisé avec le réactif d'extraction d'acide nucléique Yeasen Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2, idéal pour la qPCR directe
👍Sensibilité ultra-élevée à 3 copies/réaction, améliore considérablement la précision de détection
👍Stabilité à long terme de la solution PCR pré-mélangée (master mix + amorces + sondes) à température ambiante, simplifiant grandement la difficulté de détection

Présentation de cas

👉Forte tolérance aux impuretés du sang
Par rapport aux produits similaires d'autres marques, Yeasen Cat#11211 présente une tolérance plus élevée aux inhibiteurs présents dans les échantillons sanguins. Les résultats ont montré que Yeasen Cat#11211 présente une tolérance élevée à l'EDTA et au citrate de sodium et peut supporter 0,5 % de sang total.

Figure 7. Cat#11211 Mélange maître qPCR multiplex Universal TaqMan et des mélanges maîtres de différentes marques sont utilisés pour les solutions ASF qPCR supplémentées respectivement avec 3 mM d'EDTA (3A), 6 mM de citrate de sodium (3B) et 0,5 % de sang (3C).

👉Sensibilité ultra élevée à 3 copies/réaction

L'amplification du plasmide ASFV avec 20 réplicats a été réalisée sur la base de produits de différentes marques. Les résultats des expériences montrent que le taux de détection des produits Yeasen est plus élevé.

Figure 8. Comparaison des taux de détection entre des produits similaires de différentes marques (3 copies dans le système final)

👉Stabilité à long terme, stable pendant 7 jours à température ambiante

La solution PCR du système plasmidique double ASFV/ACT peut maintenir des performances stables après 7 jours à 4℃, 25℃ et 37℃. On peut constater que la valeur Ct et la valeur de fluorescence n'ont pas changé de manière significative.

Figure 9. Stabilité de la solution PCR

Solution III: Amplification isotherme

Les produits Yeasen prennent en charge la technologie d'amplification isotherme qui permet d'effectuer la détection ASF plus rapidement et plus efficacement. Référence n° 14402 ADN polymérase Hieff™ Bst Plus (40 U/μL) est dérivé de l'ADN polymérase I de Geobacillus sp thermophile, dépourvu d'activité exonucléase 5'-3'. Ce produit a une activité ADN polymérase 5'-3' plus forte, une activité de déplacement de brin et une tolérance au dUTP, ce qui le rend plus adapté aux réactions d'amplification isotherme antipollution, telles que LAMP, CPA, etc.

Caractéristiques du produit

👍Efficacité d'amplification élevée

👍Amplification à haut rendement

👍Tolérance au dUTP, peut être utilisé en combinaison avec la glycosylase ADN uracile Cat#10303 (UDG/UNG) (Renseigner), thermolabile, 1 U/μL pour prévenir le risque de contamination par aérosol

Présentation de cas

👉Alternative supérieure aux produits de marque N* importés

Le processus d'amplification a été réalisé à l'aide de l'ADN polymérase Bst de Yeasen et de N* Company, respectivement. Aucune différence significative n'a été observée dans la valeur Ct et l'intensité de fluorescence entre les différentes marques.

Figure 10. Courbes d'amplification de différentes marques

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