Ces dernières années, l’incidence mondiale des maladies infectieuses a augmenté, les agents pathogènes devenant de plus en plus divers et complexes. L’un des principaux défis dans ce scénario est que près de la moitié des patients sont confrontés à la situation difficile d’avoir des agents pathogènes inconnus, ce qui rend le diagnostic rapide de ces agents pathogènes une tâche ardue. Actuellement, la détection clinique des agents pathogènes repose principalement sur des méthodes de culture traditionnelles, des techniques de PCR, le séquençage métagénomique (mNGS) et le séquençage ciblé des agents pathogènes (tNGS).
La PCR quantitative fluorescente en temps réel a gagné en importance dans la détection des acides nucléiques du SARS-CoV-2. De même, la mNGS a attiré l'attention pour ses contributions à la lutte contre le SARS-CoV-2 et est passée du milieu clinique à une utilisation quotidienne. La tNGS, qui offre les avantages de la PCR et de la NGS, tels que la rapidité, la précision et la rentabilité des services de séquençage, gagne de plus en plus de terrain dans le domaine des tests cliniques.
Parallèlement, l'application des produits biologiques s'est étendue à la biomédecine, à l'agriculture biologique, à la bioénergie, à la fabrication biologique, à la protection de l'environnement et à d'autres domaines. Alors que la part de marché des produits biologiques continue de croître, les organismes gouvernementaux et les autorités compétentes ont mis en place des systèmes et des normes de gestion de la qualité normalisés pour ces produits. Un domaine d'intérêt particulier concerne la présence de résidus d'acide nucléique provenant de cellules hôtes dans les produits biologiques.
Les produits biologiques tels que les médicaments à base de protéines recombinantes, les médicaments à base d'anticorps, les vaccins et les thérapies cellulaires et géniques sont produits à l'aide de souches ou de lignées cellulaires consécutives, ce qui peut entraîner la rétention d'acides nucléiques hôtes dans les produits finaux. Les acides nucléiques hôtes résiduels peuvent avoir des conséquences néfastes, telles qu'une prolifération cellulaire incontrôlée conduisant à la formation de tumeurs ou à l'exacerbation des réponses immunitaires en introduisant des gènes viraux. Par conséquent, l'élimination efficace des résidus d'acides nucléiques et la détection rigoureuse des résidus sont essentielles pour garantir la sécurité des produits biologiques et répondre aux exigences de la recherche. Dans l'industrie, les méthodes qPCR/RT-qPCR sont largement utilisées pour développer des kits de détection pour la détection des résidus d'acides nucléiques hôtes dans les produits biologiques.
De plus, les enzymes moléculaires commerciales sont généralement exprimées à l'aide de souches génétiquement modifiées, telles que E. coli, ce qui entraîne la présence d'ADN génomique de l'hôte dans ces enzymes moléculaires. De plus, des facteurs environnementaux et humains peuvent introduire de l'ADN contaminé dans les produits enzymatiques moléculaires.
Lors du processus de détection des agents pathogènes, les acides nucléiques bactériens de fond issus de la contamination peuvent éclipser les acides nucléiques cibles en faible abondance ou être détectés à côté des acides nucléiques cibles. Cela peut avoir un impact sur la sensibilité de la détection des cibles ou conduire à des résultats faussement positifs, ce qui complique le diagnostic et les décisions de traitement prises par les professionnels de santé.
Lors du développement et de la production de produits de contrôle qualité pour les tests de résidus d'acides nucléiques de l'hôte, la présence d'acides nucléiques résiduels de l'hôte, notamment ceux provenant d'humains, de souris, d'E. coli, de levures et d'autres, dans les enzymes moléculaires peut entraîner des inexactitudes dans la quantification des produits de contrôle qualité des résidus d'acides nucléiques de l'hôte. Cela présente des risques potentiels pour la sécurité lors de la fabrication de produits biologiques.
YEASEN UCF.MEMT solution enzymatique moléculaire à très faible résidu
Afin de résoudre le problème des bactéries de fond et des interférences entre les résidus d'acide nucléique de l'hôte, YEASEN a mis en place une plateforme complète de R&D et de production pour UCF.MEMT Enzymes moléculaires à très faible résidu. Et a réussi à produire à grande échelle une variété d'UCF.MOIMT enzymes moléculaires à très faible résidu grâce à la sélection des matériaux, au contrôle environnemental, à l’optimisation des processus et à l’assurance qualité.
YEASEN UCF.MEMT produits enzymatiques moléculaires à très faible teneur en résidus
YEASEN a réformé un ensemble complet d'enzymes moléculaires telles que qPCR/RT-qPCR, la création de bibliothèques NGS. Dans le même temps, UCF.ME™ Le procédé à très faible résidu est utilisé pour traiter les produits enzymatiques moléculaires. Nous pouvons fournir un ensemble complet de matières premières enzymatiques moléculaires à hautes performances et à très faible résidu hôte pour la qPCR/RT-qPCR et la NGS à améliorer la précision de la détection.
Tableau 1 La liste de YEASEN UCF.MEMT produits enzymatiques moléculaires à très faible résidu
| Classification des produits | Nom du produit | Numéro de catalogue | Critères de Escherichia coli Contrôle de qualité de l'ADN génomique |
| UCF.MEMT produits enzymatiques à très faible résidu pour qPCR/RT-qPCR | Hieff UCF.MEMT ADN polymérase Taq sensible au démarrage à chaud (5 (U/μL) | 14314ES | < 0,005 copies/unité |
| Hifair UCF.MEMT Transcriptase inverse V (200 U/μL) | 14608ES | <0,005 copies/U | |
| UCF.MEMT Inhibiteur de RNase murine (40 U/μL) | 14672ES | < 0,001 copies/unité | |
| UCF.MEMT Inhibiteur de RNase à haute affinité (40 U/μL) | 14675ES | < 0,001 copies/unité | |
| UCF.MEMT Uracile ADN glycosylase (UDG/UNG), thermolabile, 1 U/μL | 14466ES | < 0,1 copie/unité | |
| UCF.MEMT Uracile ADN glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 14454ES | < 0,1 copie/unité |
Présentation partielle des données (UCF.ME)MT ADN polymérase Taq sensible au démarrage à chaud, par exemple）
- Rrésidude coli ADN génomique ＜0.005 exemplaires/U
- coliRésidus d'ADN génomique de différents lots d'UCF.MEMTL'enzyme Taq (Cat#14314ES) a été détectée. Le résultat a montré que Escherichia coli Résidus d'ADNg Résidus de l'ADN polymérase Taq étaient bien en dessous de 0,005 copies/U.
Chiffre 1: Détection de E.coli gRésidu d'ADN de UCF.MEMT Enzyme Taq (Cat#14314ES)
- Aucun ADN plasmidique résiduel n'a été détecté
Résidus d'ADN plasmidique de UCF.MEMT L'enzyme Taq (Cat#14314ES) et l'ADN polymérase Taq de la marque A ont été détectées. Les résultats ont montré qu'il y avait un résidu d'ADN plasmidique dans l'ADN polymérase Taq de la marque A. Aucun ADN plasmidique n'a été détecté dans UCF.MEMT Enzyme Taq (Cat#14314ES).
Figure 2: Résultats de la détection des résidus d'ADN plasmidique
- Onze types de bactéries courantes n'ont pas été détectés
Utilisez UCF.MEMT Enzyme Taq (Cat#14314ES) couplée à des amorces et des sondes de Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Stenotrophomonas maltophil, Streptococcus pneumoniae, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis pour préparer le prémélange qPCR. Le NTC (No Template Control) a été détecté, les résultats ont montré qu'aucun résidu des 11 bactéries de fond communes ci-dessus n'a été détecté dans UCF.MEMT Enzyme Taq (Cat#14314ES).
Figure 3: Résultats des tests de 11 bactéries de fond courantes (limitées par l'espace, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens et Klebsiella pneumoniae sont présentés à titre d’exemples)
- Présentation du cas de test du client
L'enzyme Taq commerciale et YEASEN UCF.MEMT L'enzyme Taq (Cat#14314ES) a été utilisée pour détecter le NTC avec celle du client Escherichia coli amorce spécifique, et les résultats ont montré que l'enzyme Taq commerciale a atteint un pic 5 fois dans 22 expériences répétées. L'UCF.MEMT L'enzyme Taq (Cat#14314ES) n'a pas atteint son pic dans 22 réplicats, indiquant que l'UCF.MEMT L'enzyme Taq (Cat#14314ES) n'a pas détecté Escherichia coli ADNg.
Chiffre 4: Dprotection résultat de E.coli Résidu d'ADN génomique (cas de test du client)
Gauche : enzyme Taq conventionnelle disponible dans le commerce ; Droite : UCF.MEMT Enzyme Taq (Cat#14314ES)
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| Classification des produits | Nom du produit | Numéro de catalogue |
| Kit de détection des résidus d'acide nucléique de l'hôte | Kit de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes CHO (3G) | 41332ES |
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