Description
L'ARN polymérase T7 utilise l'ADN double brin contenant la séquence promotrice T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') comme matrice et les NTP comme substrats pour synthétiser l'ARN complémentaire du brin inverse de l'ADN en aval du promoteur. L'ADN double brin linéaire avec des extrémités franches ou des surplombs 5' peut servir de substrats de matrice pour l'ARN polymérase T7, ce qui signifie que les plasmides linéarisés ou les produits PCR peuvent être utilisés comme matrices pour la synthèse d'ARN in vitro.
Ce kit utilise un principe de dosage immuno-enzymatique en sandwich (ELISA) pour détecter l'ARN polymérase T7 résiduelle. Les étalons et les échantillons de test de l'ARN polymérase T7 sont ajoutés aux puits de la microplaque pré-revêtus d'anticorps anti-ARN polymérase T7 (36705-A). Des anticorps de détection de l'ARN polymérase T7 marqués à la biotine dilués (36705-C) sont ensuite ajoutés, suivis de streptavidine-HRP (SA-HRP) (36705-D), formant un complexe anticorps + antigène + anticorps-biotine + SA-HRP. Après lavage, le substrat TMB (36705-H) est ajouté pour le développement de la couleur. Le TMB est catalysé par HRP pour passer de l'incolore au bleu et enfin au jaune lors de l'ajout de la solution d'arrêt (36705-I). L'intensité de la couleur jaune est positivement corrélée à la quantité d'ARN polymérase T7 détectée dans l'échantillon.
Composants
| Non. | Nom | 36705ES48 | 36705ES96 |
| 36705-A | Bandelettes de microtitration revêtues d'ARN polymérase anti-T7 | 48 T | 96 T |
| 36705-B* | Norme : ARN polymérase T7 | 1 ampoule | 2 ampoule |
| 36705-C | Détection Anticorps：Biotine-conjugué Anticorps | 60 μL | 120 μL |
| 36705-D | Streptavidine-HRP | 30 μL | 60 μL |
| 36705-F | Tampon de dilution 1 | 25 mL | 45 mL |
| 36705-F | Concentration de tampon de lavagetaux (20×) | 25 mL | 50 mL |
| 36705-G | Tampon de dilution 2 | 15 mL | 30 mL |
| 36705-H | Substrat TMB | 8 mL | 15 mL |
| 36705-I | Arrêter la solution | 5 mL | 10 mL |
| 36705-J | Scellant à plaques | 3 chacun | 5 chacun |
*La norme 36705-B est une poudre lyophilisée.
Compatible avec l'ARN polymérase T7 : 10625, 10628 et 10629.
Données de validation
Tableau 1. Plage de linéarité : 1 ~ 32 ng/mL ，R2=0,999 ，CV ≤ 5 %.
| Norme | Concn.（ ng/mL） | Moyenne（ ng/mL） | Récupération（%） | CV% |
| Std1 | 32 | 31.965 | 99,9% | 2,2% |
| Std2 | 16 | 16.070 | 100,5% | 5,0% |
| Std3 | 8 | 7.812 | 97,7% | 2,1% |
| Std4 | 4 | 4.192 | 104,8% | 0,8% |
| Norme 5 | 2 | 2.020 | 101,8% | 3,5% |
| Norme 6 | 1 | 1.173 | 117,3% | 0,0% |
| Caroline du Nord | 0 | / | / | / |
Tableau 2. Haute spécificité
| Nom de la protéine | Concn. | Détecté ou non |
| Ppositif CContrôle | 1 ng/mL | Détecté |
| Nnégatif CContrôle | 0 ng/mL | nd |
| UltraNuclease | 10 μg/mL | nd |
| Sel UltraNuclease active | 10 μg/mL | nd |
| ADNase je | 10 μg/mL | nd |
| Inhibiteur de RNase murine | 10 μg/mL | nd |
| Enzyme de coiffage de la vaccine | 10 μg/mL | nd |
| Pyrophosphatase inorganique | 10 μg/mL | nd |
| ARNm Cap 2 ´-O-méthyltransférase | 10 μg/mL | nd |
| 1%BSA | 10 mg/mL | nd |
Tableau 3. LOQ : La limite de quantification de ce produit est déterminée en diluant le point de concentration le plus bas de la courbe d'étalonnage, où le coefficient de variation (CV) à la concentration la plus basse est inférieur à 20 %. Ceci est défini comme la limite de quantification, qui est de 1 ng/mL.
| Std6 valeur théorique (ng/mL) | Valeur moyenne du test standard 6 (ng/mL) | Test répétitions | CV% | Récupération |
| 1 | 0,858 | 24 | 12,6% | 85,8% |
Tableau 4. LOD : La limite de détection de ce produit est définie comme la concentration standard correspondant à la valeur moyenne de détection du contrôle négatif (NC) plus deux fois l'écart type. En mesurant 24 étalons NC, en calculant la moyenne et l'écart type, la limite de détection est déterminée à 0,318 ng/mL.
| Valeur moyenne（OD） | SD（OD） | Valeur moyenne +2SD (OD) | Valeur moyenne +2SD (ng/ml) |
| 0,0527 | 0,0038 | 0,0604 | 0,3176 |
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