रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन आरएनए को पूरक डीएनए (सीडीएनए) में बदलने की प्रक्रिया है, जो रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम द्वारा मध्यस्थ होती है। एनीलिंग प्राइमर की उपस्थिति में, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पहले आरएनए टेम्पलेट से जुड़ता है। रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की आरएनए-निर्भर डीएनए पॉलीमरेज़ गतिविधि प्रतिक्रिया मिश्रण से डीएनटीपी को शामिल करके सीडीएनए को संश्लेषित करती है। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप सीडीएनए:आरएनए हाइब्रिड स्ट्रैंड का निर्माण होता है, जिसे पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण के रूप में जाना जाता है।
मोलोनी म्यूरिन ल्यूकेमिया वायरस (एम-एमएलवी) रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशाला प्रक्रियाओं में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस में से एक है। उच्च रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन दक्षता, बेहतर थर्मल स्थिरता और सीडीएनए संश्लेषण की बढ़ी हुई दर प्राप्त करने के लिए, मूल रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को अक्सर आनुवंशिक रूप से इंजीनियर किया जाता है। वर्तमान में, बाजार में उपलब्ध रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मकों को आमतौर पर 15 से 30 मिनट तक की प्रतिक्रिया समय की आवश्यकता होती है, जो अपेक्षाकृत लंबा है। जब प्रतिक्रिया नमूनों की संख्या बड़ी होती है, तो कुल समय व्यय नाटकीय रूप से बढ़ सकता है। YESSEN के मौजूदा 5-मिनट रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन श्रृंखला उत्पाद केवल 5 मिनट के भीतर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रक्रिया को पूरा कर सकते हैं, जिससे समय की बचत होती है और यह अत्यधिक कुशल होता है।
| पीउत्पाद पीओशनिंग | प्रोडक्ट का नाम | बिल्ली# |
| तीव्र, कुशल और उच्च-उपज रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स | हाईफेयर™ qPCR के लिए एडवांसफास्ट 1st स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस सुपरमिक्स | 11156ईएस |
| तीव्र, कुशल और उच्च-उपज रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स (जीडीएनए हटाने के साथ) | हाईफेयर™ qPCR के लिए एडवांसफास्ट 1st स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस सुपरमिक्स (डीएनए डाइजेस्टर प्लस) | 11155ईएस |
| जीडीएनए निष्कासन और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स का तीव्र एक-चरणीय समापन | हाईफेयर™ qPCR के लिए एडवांसफास्ट वन-स्टेप RT-gDNA डाइजेस्टियन सुपरमिक्स | 11151ईएस |
| लचीला प्राइमर चयन रैपिड रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (जीडीएनए हटाने के साथ) | हाईफेयर™ एडवांसफास्ट 1 स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस किट (कोई डाई नहीं) | 11150ईएस |
| लचीला प्राइमर चयन रैपिड रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (जीडीएनए रिमूवल और ट्रैकिंग डाई के साथ) | हाईफेयर™ एडवांसफास्ट 1 स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण किट | 11149ईएस |
बुटीक अनुशंसा एक
तीव्र, कुशल और उच्च-उपज रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स (gDNA रिमूवल के साथ)(कैट #11155ES)
विभिन्न टेम्पलेट्स से उच्च रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उपज
| नमूना | 293टी कक्ष | अरेबिडोप्सिस थालियाना | चूहा | मछली का जिगर |
| 11155ईएस | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| ब्रांड ए | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| ब्रांड बी | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| ब्रांड सी | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| ब्रांड डी | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
चित्र. मानव 293T कोशिकाओं, अरेबिडोप्सिस थालियाना, माउस लीवर और मछली लीवर से आरएनए टेम्पलेट्स का उपयोग करके रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया था। ब्रांड ए, बी, सी और डी सभी दो-चरणीय पाचन रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मक हैं, जिनमें 15 से 20 मिनट तक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय अलग-अलग होता है। परीक्षण के परिणाम बताते हैं कि हाईफ़ेयर 11155ES 5-मिनट रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट अन्य ब्रांडों की तुलना में उच्च पैदावार के साथ उत्कृष्ट है, और सीटी मान कम हैं।
बुटीक अनुशंसा दो
5-मिनट वन-स्टेप डाइजेस्टियन और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स (कैट #11151ES)
उच्च रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उपज
चित्र. मानव 293T सेल आरएनए को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, तीन जीनों का क्रमशः परीक्षण किया गया। ब्रांड ए, बी और सी सभी एक-चरण वाले जीडीएनए निष्कासन और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मक हैं। परीक्षण के परिणाम बताते हैं कि 1 μg और कुल आरएनए के 10 एनजी के इनपुट के साथ, 11151ES किट के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की उपज अन्य ब्रांडों की तुलना में बेहतर है, जिसमें छोटे सीटी मान हैं।
चित्र. अरेबिडोप्सिस थालियाना आरएनए को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, ब्रांड ए, बी और सी सभी एक-चरण वाले जीडीएनए निष्कासन और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मक हैं। परीक्षण के परिणाम बताते हैं कि 1 μg और कुल आरएनए के 10 एनजी के इनपुट के साथ, 11151ES किट के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की उपज अन्य ब्रांडों की तुलना में बेहतर है, जिसमें छोटे सीटी मान हैं।
उत्कृष्ट संवेदनशीलता
चित्र. मानव 293T सेल आरएनए को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 30% जीसी, 50% जीसी, 60% जीसी और 70% जीसी सामग्री वाले जीन को प्रवर्धित किया गया। 100 पीजी, 1 एनजी, 10 एनजी, 100 एनजी और 1 माइक्रोग्राम के कुल आरएनए इनपुट का उपयोग रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए किया गया, जिसके बाद फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव डिटेक्शन किया गया। परिणाम बताते हैं कि 11151ES 100 पीजी से 1 माइक्रोग्राम तक के आरएनए इनपुट के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को समायोजित कर सकता है।
बुटीक अनुशंसा टीह्री
5-मिनट रैपिड रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट(कैट #11149/11150ES)
उच्च संवेदनशीलता, न्यूनतम पता लगाने की सीमा 10 पीजी तक
चित्र. 293T कोशिकाओं से प्राप्त कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 11149ES के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया, तथा परिणामी cDNA को qPCR मात्रात्मक विश्लेषण के अधीन किया गया। परिणाम दर्शाते हैं कि 11149ES 10 pg से 1 μg तक के RNA इनपुट को सफलतापूर्वक रिवर्स ट्रांसक्राइब कर सकता है, जिससे सटीक मात्रात्मक परिणाम सुनिश्चित होते हैं।
अच्छा प्रवर्धन प्रदर्शन, 14 केबी खंड के सबसे लंबे प्रवर्धन के साथ
आकृति।293T कोशिकाओं से कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 11149ES के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया, और परिणामी cDNA को PCR डिटेक्शन के अधीन किया गया। परिणाम दर्शाते हैं कि 11149ES 1 kb से 14 kb लंबाई तक के cDNA टुकड़ों को संश्लेषित करने में सक्षम है, जिसके बाद PCR में कुछ लागू परिदृश्य हैं। यदि 10 kb से अधिक टुकड़ों का प्रत्यक्ष रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन आवश्यक है, तो अंतिम टुकड़ों के अधिग्रहण को सुनिश्चित करने के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय को 20-30 मिनट तक बढ़ाने की सिफारिश की जाती है।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन दक्षता की तुलना
| आरएनए इनपुट राशि | सीटी मान | |
| 11149ईएस | ब्रांड ए | |
| 1 माइक्रोग्राम | 15.2 | 15.5 |
| 100 एनजी | 18.0 | 18.5 |
| 10 एनजी | 21 | 21.7 |
| 1 एनजी | 24.5 | 25.1 |
| 100 पृ. | 29.1 | 29.7 |
| 10 पृ. | 32.7 | 34.3 |
चित्र. 293T कोशिकाओं से कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 11149ES और ब्रांड A के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया, जिसमें 11149ES को gDNA हटाने के चरण से नहीं गुजरना पड़ा। परिणामी cDNA को qPCR मात्रात्मक विश्लेषण के अधीन किया गया। परिणाम बताते हैं कि ब्रांड A के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय 13 मिनट था, जबकि 11149ES के लिए यह 5 मिनट था। विभिन्न उत्पादों के मात्रात्मक विश्लेषण से पता चलता है कि 11149ES के लिए Ct मान प्रतिस्पर्धी ब्रांड के मानों से छोटे या समान हैं, जो दर्शाता है कि 11149ES की 5 मिनट की रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन दक्षता ब्रांड A से बेहतर या लगभग बराबर है।
| आरएनए इनपुट राशि | सीटी मान | |
| 11149ईएस | ब्रांड बी | |
| 1 माइक्रोग्राम | 16.2 | 17.4 |
| 100 एनजी | 19.0 | 20.5 |
| 10 एनजी | 22 | 23.8 |
| 1 एनजी | 26 | 27.9 |
| 100 पृ. | 31.4 | 33.2 |
| 10 पृ. | 32.9 | 35.6 |
आकृति।293T कोशिकाओं से कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, 11149ES और ब्रांड B के साथ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया, जिसमें 11149ES को gDNA हटाने के चरण से नहीं गुजरना पड़ा। परिणामी cDNA को qPCR मात्रात्मक विश्लेषण के अधीन किया गया। परिणाम बताते हैं कि ब्रांड B के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन का समय 20 मिनट था, जबकि 11149ES के लिए यह 5 मिनट था। विभिन्न सब्सट्रेट मात्राओं के मात्रात्मक विश्लेषण से पता चलता है कि 11149ES के लिए Ct मान ब्रांड B के मानों से छोटे या समान हैं, जो दर्शाता है कि 11149ES की 5 मिनट की रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन दक्षता ब्रांड B से बेहतर या लगभग बराबर है।
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| तरीका | पीउत्पाद पीओशनिंग | प्रोडक्ट का नाम | बिल्ली# |
| डाई-आधारित qPCR | उच्च विशिष्टता सार्वभौमिक मात्रात्मक प्रीमिक्स (डाई-आधारित) | हाईफ़ यूनिकॉन™ उन्नत qPCR SYBR मास्टर मिक्स | 11185ईएस |
| उच्च संवेदनशीलता सार्वभौमिक मात्रात्मक प्रीमिक्स (डाई-आधारित) | 11184ईएस | ||
| रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन | 5 मिनट का एक-चरणीय पाचन और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स (qPCR के लिए) | हाईफेयर™ qPCR के लिए एडवांसफास्ट वन-स्टेप RT-gDNA डाइजेस्टियन सुपरमिक्स | 11151ईएस |
| 5 मिनट का तेज रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, 14 केबी सीडीएनए संश्लेषण में सक्षम, जीडीएनए हटाने के साथ (पीसीआर/क्यूपीसीआर के लिए) - ट्रेसर संस्करण | हाईफेयर™ एडवांसफास्ट 1 स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण किट | 11149ईएस | |
| 5 मिनट का तीव्र रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, 14 केबी सीडीएनए संश्लेषण में सक्षम, जीडीएनए निष्कासन के साथ (पीसीआर/क्यूपीसीआर के लिए) | हाईफेयर™ एडवांसफास्ट 1 स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस किट (कोई डाई नहीं) | 11150ईएस | |
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