चुंबकीय मोती उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण पुस्तकालयों के निर्माण में आवश्यक उत्पादों में से एक हैं। वे डीएनए या आरएनए को शुद्ध कर सकते हैं, लक्ष्य-आकार के डीएनए टुकड़ों को स्क्रीन कर सकते हैं, और लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड को समृद्ध कर सकते हैं। अनुक्रमण प्रौद्योगिकी के विकास के साथ, विभिन्न अनुप्रयोग क्षेत्रों में विशेषज्ञता वाले चुंबकीय मोती उभरे हैं, जिनमें डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोती, डीएनए आकार चयन चुंबकीय मोती, आरएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोती और एमआरएनए संवर्धन चुंबकीय मोती शामिल हैं। तो विभिन्न चुंबकीय मोतियों के सिद्धांत क्या हैं? कैसे चुनें?

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1. डीएनए मोती
2. स्टार डीएनए मोती परिचय
3. आरएनए शुद्धिकरण मोती
4. mRNA-समृद्ध चुंबकीय मोती
5. येसेन चुंबकीय मोती उत्पाद अनुशंसा

1. डीएनए मनका

1.1 मूल सिद्धांत

चित्र 1. कार्बोक्सिल चुंबकीय मनका संरचना

चित्र 2. डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोतियों का सिद्धांत

1.2 संचालन प्रक्रिया

चित्र 3. डीएनए शुद्धिकरण चरण

चित्र 4. डीएनए आकार चयन चरण

1.3 चुंबकीय मोतियों का उपयोग करने के लिए सुझाव

बेहतर उपज और सटीक आकार का चयन

(1) उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाएं, और संतुलित करें चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर कम से कम 30 मिनट तक रखें।

——चुंबकीय मोतियों में PEG की घुलनशीलता बफर आसानी से पीएच और तापमान से प्रभावित होता है।उपयोग से पहले, संतुलन बनाना आवश्यक है कमरे के तापमान पर बनाने के लिए चुंबकीय मोतियों को समान रूप से निलंबित कर दिया जाता है और PEG को पूरी तरह से भंग कर दिया जाता है ताकि अवशोषण और पृथक्करण प्रभाव को प्रभावित न किया जा सके

(2) अवशोषण समय पर्याप्त होना चाहिए, तथा पूर्णतः मिश्रित होना चाहिए अवशोषण को पर्याप्त बनाने के लिए;

(3) शुद्धिकरण या पृथक्करण के दौरान 80% इथेनॉल से धोना;

——80% इथेनॉल के तहत, न्यूक्लिक एसिड निर्जलित हो जाता है और बारीकी से इकट्ठा हो जाता है, और घुलता नहीं है। सिस्टम में अवशिष्ट एंजाइम, बफर, अशुद्धियाँ आदि को शुद्ध करने के लिए इथेनॉल से साफ किया जाता है पुस्तकालय।

(4) आकार चयन के दौरान, यह सुनिश्चित करने के लिए नमूना मात्रा की पुष्टि करें कि चुंबकीय मनका जोड़ अनुपात सही है;

——आकार चयन के दौरान, चुंबकीय मोतियों की संगत मात्रा को सटीक रूप से इनपुट करना आवश्यक है, ताकि अनुपात सटीक हो, क्योंकि बफर में पीईजी और नमक आयन एकाग्रता में परिवर्तन परिणामों को प्रभावित कर सकता है।

(5) निक्षालन चरण से पहले, अल्कोहल को पूरी तरह से वाष्पीकृत होने दें, लेकिन मोतियों को रोकने से ओवर-सुखाने

——आम तौर पर, इसे 2 ~ 3 मिनट में सुखाया जा सकता है। जब चुंबकीय मोतियों की संख्या बड़ी हो और सूखना मुश्किल हो, इसे अनेक अपकेंद्रित्र ट्यूबों में संचालित करने की अनुशंसा की जाती है।

(6) यदि चुंबकीय मोती एकत्रित या स्लैबयुक्त हैं, तो निक्षालन समय बढ़ाया जा सकता है पूरी तरह से मिश्रण के बाद;

——इसका कारण हो सकता है डीएनए में अशुद्धियाँ या बहुत लंबा सुखाने का समय। आम तौर पर, जब डीएनए में कई अशुद्धियाँ होती हैं, तो पहले इसे शुद्ध करने की सिफारिश की जाती है पहले आकार चयन.

2. स्टार डीएनए मोती परिचय

2.1 शुद्धिकरण प्रदर्शन का परिचय

• अद्वितीय बफर प्रणाली: डीएनए टुकड़े नीचे तक 50 बी.पी. की वसूली की जा सकती है।
• उच्च रिकवरी दर: ≥90%.
• अशुद्धियों को प्रभावी ढंग से हटाएँ: प्राइमर डिमर, डीएनटीपी, अकार्बनिक नमक और प्रोटीन जैसी अशुद्धियों को प्रभावी ढंग से हटाएँ।
• विस्तृत अनुप्रयोग रेंज: एंजाइम पाचन, बंधाव, क्लोनिंग और एनजीएस लाइब्रेरी निर्माण जैसे परिदृश्यों में डीएनए शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त।

तालिका नंबर एक। विभिन्न अनुपातों वाले चुंबकीय मोतियों की डीएनए शुद्धि और पुनर्प्राप्ति दक्षता

चित्र 5. चुंबकीय मोतियों के शुद्धिकरण प्रभाव एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन परिणाम

एम：1kb डीएनए सीढ़ी;

2.2 आकार चयन प्रदर्शन

• आसान को संचालन: पृथक्करण सिद्धांत और प्रायोगिक संचालन पूरी तरह से XP चुंबकीय मोतियों के अनुरूप हैं
• सटीक आकार चयन: छांटे गए टुकड़ों का आकार सटीक और स्थिर है
• व्यापक प्रयोज्यता: के लिए उपयुक्त इमारत डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी और अनुकूलन विभिन्न नमूना प्रकारों के खंड आकार चयन के लिए
• अल्ट्रा-उच्च लागत प्रदर्शन: स्थिर गुणवत्ता, अधिक किफायती मूल्य, अधिक विचारशील पूर्व-बिक्री और बिक्री के बाद सेवा

चित्र 6. डीएनए आकार चयन परिणाम

3. आरएनए शुद्धिकरण मोती

• उच्च गुणवत्ता: आयातित कच्चे माल, अत्यधिक स्थिर गुणवत्ता
• अनुकूलित बफर प्रणाली: आरएनए की शुद्धता और अखंडता सुनिश्चित करती है और आरएनए क्षरण को प्रभावी ढंग से रोकती है
• उच्च दक्षता: कुशल पुनर्प्राप्ति, आरएनए लाइब्रेरी निर्माण या इन विट्रो के लिए उपयुक्त प्रतिलेखन उत्पाद पुनर्प्राप्ति, आदि.

चित्र 7. शुद्धिकरण के बाद विभिन्न नमूनों का इलेक्ट्रोफोरेटोग्राम

4. mRNA-समृद्ध चुंबकीय मोती

4.1 mRNA पृथक्करण का सिद्धांत

चित्र 8.mRNA चुंबकीय मोतियों के संवर्धन और शुद्धिकरण का सिद्धांत

4.2 mRNA अलगाव मोती प्रदर्शन

• उच्च दक्षता: mRNA शुद्धिकरण 45 मिनट के भीतर पूरा किया जा सकता है
• उच्च शुद्धता: ओलिगो (डीटी) चुंबकीय मोती विशेष रूप से mRNA को बांधते हैं
• भरोसेमंद: प्राप्त mRNA इन विट्रो एनजीएस के लिए उपयुक्त है अनुवाद, आरटी-पीसीआर, और सीडीएनए संश्लेषण

चित्र 9. विभिन्न आरएनए नमूनों से mRNA का mRNA आइसोलेशन किट शुद्धिकरण

नोट: हाउसकीपिंग जीन उपज mRNA रिकवरी के प्रभाव को दर्शाती है। rRNA से संबंधित जीन उपज लक्षण वर्णन rRNA हटाने की दक्षता

4.3 mRNA चुंबकीय मनका FAQ

(1) चुंबकीय मोती क्यों एकत्रित होते हैं और इसका समाधान कैसे करें?

——चुंबकीय मोती एकत्रीकरण mRNA की उपज और शुद्धता को कम कर देगा। नमूने में कई अशुद्धियाँ हो सकती हैं, जैसे पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन और लंबी-श्रृंखला वाला डीएनए। ये अशुद्धियाँ चुंबकीय मोतियों को जन्म देंगी समाधान चुंबकीय मोतियों को पिपेट के माध्यम से उड़ाना है। शुद्धिकरण से पहले जीनोमिक डीएनए को डीएनएज़ उपचार द्वारा हटाया जा सकता है। यदि प्रारंभिक नमूना आकार बहुत बड़ा है और चुंबकीय मोतियों के भार से अधिक है, तो चुंबकीय मोती भी एकत्रित हो जाएंगे। मैनुअल में इनपुट राशि के अनुसार काम करने की सिफारिश की जाती है।

(2) mRNA की उपज कम क्यों है?

——कम mRNA उपज के कई कारण हैं:

• कोशिकाओं या ऊतकों का mRNA अभिव्यक्ति स्तर कम है, इसलिए हम उपयुक्त अभिव्यक्ति अवधि के नमूनों का चयन कर सकते हैं या नमूने की कुल RNA इनपुट मात्रा को उचित रूप से बढ़ा सकते हैं।
• नमूनों में चुंबकीय मोतियों का अनुपात बहुत कम है, जो mRNA और चुंबकीय मोतियों के संयोजन को प्रभावित करता है। बढ़ाने की कोशिश करें चुंबकीय मोतियों की संख्या बढ़ाएँ या नमूना इनपुट राशि और आयतन कम करें।
• संकरण समय बहुत कम है, ऊष्मायन समय 10-15 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है;
• यदि निक्षालन अपर्याप्त है, तो निक्षालन बफर की मात्रा को उचित रूप से बढ़ाना, निक्षालन समय और तापमान को बढ़ाना, या निक्षालन चरण को दो बार दोहराना आवश्यक है।

(3) आरआरएनए को प्रभावी ढंग से कैसे समाप्त करें?

——यदि ऑपरेशन अनुचित है, तो शुद्धिकरण के दौरान आरआरएनए गैर-विशिष्ट रूप से एमआरएनए के साथ चुंबकीय मोतियों से बंधा रहेगा, विशेषकर तब जब कुल आरएनए इनपुट बड़ी मात्रा में हो। शुद्धिकरण प्रक्रिया में आमतौर पर दो बार बांधने का प्रयोग किया जाता है आरआरएनए प्रदूषण से प्रभावी रूप से बचने के लिए। सुनिश्चित करें कि धुलाई प्रयोग के दौरान यह पूरी तरह मिश्रित हो, ताकि गैर-विशिष्ट बंधन को हटाया जा सके और rRNA प्रदूषण को हटाने का प्रयास किया जा सके।

(4) अनेक डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए, क्या mRNA को निकालना आवश्यक है, और क्या चुंबकीय मोती डाउनस्ट्रीम एंजाइम प्रतिक्रियाओं में हस्तक्षेप करेंगे?

——कुछ डाउनस्ट्रीम अभिक्रियाएं mRNAs को निकाले बिना चुंबकीय मोतियों के साथ सीधे की जा सकती हैं, जैसे mRNA विखंडन और RNA लाइब्रेरी निर्माण में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन।हालांकि, यदि पीसीआर अभिक्रियाएं की जानी हैं, तो यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि कोई जीनोमिक डीएनए प्रदूषण न हो, अन्यथा कई जीनोमिक प्रवर्धन टुकड़े उत्पन्न होंगे, जो प्रयोगात्मक परिणामों में बाधा डालेंगे। संबंधित डाउनस्ट्रीम अभिक्रियाओं के निर्देशों के अनुसार विस्तृत संचालन किया जा सकता है, जैसे कि आरएनए-सीक्यू लाइब्रेरी निर्माण

(5) क्या यह किट mRNA को सीधे कोशिकाओं या ऊतकों से अलग कर सकती है?

--अनुसंशित नहीं! लाइसेट में कुछ ऐसे घटक होते हैं जो mRNA के बंधन को प्रभावित करेंगे। एक विशेष किट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

5. येसेन चुंबकीय मोती उत्पाद अनुशंसा

पढ़ने के संबंध में

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डीएनए चयन मोतियों के अतीत और वर्तमान को समझने के लिए 5 मिनट (परिणाम विश्लेषण और FAQ व्याख्या सहित)