एनजीएस पुस्तकालय निर्माण में शामिल प्रमुख एंजाइम

हाई-थ्रूपुट सीक्वेंसिंग, जिसे अक्सर अगली पीढ़ी की सीक्वेंसिंग (NGS) तकनीक के रूप में संदर्भित किया जाता है, प्रारंभिक DNA सीक्वेंसिंग विधियों, जैसे कि सेंगर सीक्वेंसिंग से एक महत्वपूर्ण छलांग का प्रतिनिधित्व करती है। NGS सैकड़ों हज़ारों, यदि लाखों नहीं, न्यूक्लिक एसिड अणु अनुक्रमों की एक साथ प्रोफाइलिंग की अनुमति देता है। इसकी खूबियों में असाधारण थ्रूपुट, लागत-प्रभावशीलता, मापनीयता और अनुप्रयोगों का एक व्यापक स्पेक्ट्रम शामिल है, जो इसे दुनिया भर में प्रमुख अनुक्रमण तकनीक के रूप में स्थापित करता है।

एनजीएस अनुक्रमण कार्यप्रवाह में चार प्राथमिक चरण शामिल हैं: नमूना तैयार करना, लाइब्रेरी निर्माण, अनुक्रमण और डेटा विश्लेषण। लाइब्रेरी निर्माण का मुख्य उद्देश्य खंडित जीनोमिक डीएनए के दोनों सिरों पर मानकीकृत एनजीएस प्लेटफ़ॉर्म एडाप्टर अनुक्रमों को जोड़ना है। इस चरण का उद्देश्य पीसीआर प्रवर्धन के माध्यम से एनजीएस उपकरण पर अनुक्रमण के लिए तैयार लाइब्रेरी न्यूक्लिक एसिड अणुओं की पर्याप्त आपूर्ति उत्पन्न करना है। नमूने की प्रकृति के आधार पर, एनजीएस लाइब्रेरी निर्माण को डीएनए लाइब्रेरी निर्माण और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण में वर्गीकृत किया जा सकता है। इन परस्पर जुड़े प्रयोगों में एंजाइम एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। तो, लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया में कौन से प्रमुख एंजाइम शामिल हैं?

Next-generation sequencing workflow

चित्र 1. अगली पीढ़ी का अनुक्रम कार्यप्रवाह^[2]

1. डीएनए लाइब्रेरी निर्माण और इसके प्रमुख एंजाइम
2. आरएनए लाइब्रेरी निर्माण और इसके प्रमुख एंजाइम
3. डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण में एनजीएस कोर एंजाइम्स के लिए दिशानिर्देश

1. डीएनए लाइब्रेरी निर्माण और इसके प्रमुख एंजाइम

डीएनए लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया में, टीए क्लोन लिगेशन एडेप्टर लाइब्रेरी निर्माण वर्तमान में सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकी साधन है। मुख्य लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया इस प्रकार है:

DNA library construction process (Illumina)

चित्र 2. डीएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया (इलुमिना)

1.1 डीएनए विखंडन

वर्तमान अनुक्रमकों में आमतौर पर 150-500 बेस पेयर (बीपी) की सीमा में अनुक्रमण लंबाई होती है। परिणामस्वरूप, बड़े जीनोमिक डीएनए टुकड़ों को छोटे टुकड़ों में तोड़ने के लिए यांत्रिक या एंजाइमेटिक विखंडन विधियों को नियोजित करना आवश्यक हो जाता है। यांत्रिक विखंडन से अपेक्षाकृत उच्च नमूना हानि हो सकती है और इसमें अधिक जटिल परिचालन प्रक्रिया शामिल होती है। दूसरी ओर, एंजाइमेटिक पाचन जीनोमिक डीएनए को विखंडित करने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली विधि है। यांत्रिक तरीकों की तुलना में, एंजाइमेटिक पाचन अधिक लागत प्रभावी और सीधा है, जिसमें विखंडन एंजाइम को जोड़ने के बाद प्रतिक्रिया के लिए केवल एक निर्धारित अवधि की आवश्यकता होती है।

वर्तमान में, मुख्य रूप से दो प्रकार के टुकड़े उपयोग में हैं। एक ट्रांसपोसन सिद्धांतों पर आधारित Tn5 ट्रांसपोसेज पर निर्भर करता है, जबकि दूसरा एंडोन्यूक्लिअस के मिश्रण का उपयोग करता है। हालाँकि, इन टुकड़ों की प्रभावशीलता GC सामग्री और DNA की आधार वरीयताओं से प्रभावित हो सकती है। इसके विपरीत, येसेन (कैट #12917) द्वारा विकसित किए गए टुकड़े एक स्थिर पाचन प्रभाव प्रदान करते हैं और Tn5 ट्रांसपोसेज की तुलना में काफी कम साइट वरीयता प्रदर्शित करते हैं। वे लगातार विभिन्न प्रकार के डीएनए नमूनों के लिए उत्कृष्ट अनुक्रमण परिणाम देते हैं, जिनमें FFPE नमूने भी शामिल हैं।

1.2 मरम्मत समाप्त, डीए-टेलिंग

खंडित डीएनए 5'/3' चिपचिपे सिरे और कुंद सिरे वाले डीएनए उत्पन्न करेगा, और सभी चिपचिपे सिरों को कुंद सिरों में परिवर्तित करने की आवश्यकता होगी, जिसमें 3' ओवरहैंग को हटाया जाना और 5'-उभरे डीएनए सिरों को भरना शामिल है। एडाप्टर लिगेशन के लिए टीए लिगेशन का उपयोग करते समय, डीएनए खंड को 5' सिरे पर फॉस्फोराइलेट करने की भी आवश्यकता होती है और "टी" चिपचिपे सिरे वाले एडाप्टर के पूरक के रूप में 3' सिरे पर "ए" जोड़ना होता है।उपरोक्त प्रक्रिया टी4 डीएनए पॉलीमरेज़, टी4 पॉलीन्यूक्लियोटाइड काइनेज और के सहयोग से पूरी होती है ताक़ डीएनए पोलीमरेज़.
टी4 डीएनए पॉलीमरेज़ (कैट#12901) इसमें 5'→3' डीएनए पॉलीमरेज़ गतिविधि होती है, जो 5'→3' दिशा में डीएनए के संश्लेषण को उत्प्रेरित कर सकती है और 5' उभरे हुए सिरे को भर सकती है। साथ ही, एंजाइम में 3'→5' एक्सोन्यूक्लिएज़ गतिविधि भी होती है जो 3' लटकते हुए सिरों को चीर देती है, जिससे चिपचिपे सिरे वाले डीएनए टुकड़े कुंद सिरे वाले डीएनए में बदल जाते हैं।
चूंकि सिंथेटिक पीसीआर प्राइमर और एडेप्टर के 5' सिरे आमतौर पर फॉस्फेट समूहों के बजाय हाइड्रॉक्सिल समूह होते हैं। इसलिए, एडेप्टर लिगेशन के अगले चरण की तैयारी में, एटीपी की उपस्थिति में ऑलिगोन्युक्लियोटाइड श्रृंखला के 5'-हाइड्रॉक्सिल सिरे पर एटीपी γ-फॉस्फेट समूहों के हस्तांतरण को उत्प्रेरित करने के लिए टी4 पॉलीन्यूक्लियोटाइड किनेज (कैट#12902) की आवश्यकता होती है।
एस-टैक डीएनए पॉलीमरेज़ (कैट#13486) में 5'→3' पॉलीमरेज़ गतिविधि होती है, जो 5'→3' दिशा से डीएनए को संश्लेषित कर सकती है। इस बीच, इसमें डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्रांसफ़ेज़ गतिविधि होती है, जो पीसीआर उत्पाद के 3' छोर पर एक न्यूक्लियोटाइड "ए" जोड़ सकती है।

Multiple enzymes involved in the end repair process

चित्र 3. अंतिम मरम्मत प्रक्रिया में कई एंजाइम शामिल होते हैं

चित्र 4. केशिका वैद्युतकणसंचलन द्वारा पता लगाए गए जीन खंडों के 3' छोर के ATCG के चार आधारों में A को जोड़ने में S-taq की दक्षता बहुत अधिक है।

1.3 एडाप्टर लिगेशन

एडाप्टर लाइब्रेरी का एक महत्वपूर्ण घटक है। इल्युमिना अनुक्रमण के दायरे में, आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले Y-प्रकार के एडाप्टर में P5/P7, इंडेक्स और Rd1/Rd2 SP अनुक्रम शामिल हैं। इनमें से, P5/P7 अनुक्रम अनुक्रमण चिप पर मौजूद अनुक्रम के साथ युग्मन के उद्देश्य से कार्य करता है, जिससे ब्रिज एम्पलीफिकेशन को निष्पादित करने के लिए फ्लो सेल पर विश्लेषण किए जाने वाले टुकड़ों को एंकर किया जाता है। अनुक्रमण के अधीन मिश्रित लाइब्रेरी के भीतर विभिन्न नमूनों के बीच अंतर करने के लिए इंडेक्स अनुक्रम का उपयोग किया जाता है, जबकि Rd1/Rd2 SP रीड1 और रीड2 अनुक्रमण प्राइमरों को बांधने के लिए क्षेत्रों को दर्शाता है।

एडाप्टर बंधाव के कार्य के लिए, टी4 डीएनए लाइगेज (कैट#12996) मानक विकल्प है। यह डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए में पाए जाने वाले सिंगल-स्ट्रैंडेड निक्स की मरम्मत करने और आसन्न न्यूक्लियोटाइड्स को फिर से जोड़ने की क्षमता प्रदर्शित करता है।

General adapter ligation process(Illumina)

चित्र 5. सामान्य एडाप्टर लिगेशन प्रक्रिया (इलुमिना)

चित्र 6. 80-बी.पी. एडाप्टर के साथ 170-बी.पी. डी.एन.ए. को लिगेट करके टी4 डी.एन.ए. लाइगेस म्यूटेंट का सत्यापन।

1.4 पीसीआर प्रवर्धन

पीसीआर प्रतिक्रिया के माध्यम से एडेप्टर के साथ पर्याप्त डीएनए अनुक्रम प्राप्त करें, और मशीन पर नमूना न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम की अनुक्रमण को पूरा करें। हिएफ कैनासे^टीएम पीसीआर में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले प्रो हाई-फ़िडेलिटी डीएनए पॉलीमरेज़ (कैट#13476) में 5'→3' पॉलीमरेज़ गतिविधि होती है और यह 5'→3' दिशा में डीएनए को संश्लेषित कर सकता है। इसके अलावा, इसमें 3'→5' एक्सोन्यूक्लिएज़ की गतिविधि भी होती है, जो प्रवर्धन प्रक्रिया के दौरान बेस के गलत समावेश को सही कर सकती है, ताकि डीएनए टुकड़ों को तेज़ी से और उच्च निष्ठा के साथ प्रवर्धित किया जा सके।

2. आरएनए लाइब्रेरी निर्माण और इसके प्रमुख एंजाइम

आरएनए के प्रकारों के अनुसार, आरएनए लाइब्रेरी के निर्माण को एमआरएनए लाइब्रेरी, एलएनसीआरएनए लाइब्रेरी आदि में विभाजित किया जा सकता है। पारंपरिक आरएनए लाइब्रेरी में निम्नलिखित प्रक्रियाएं शामिल हैं:

mRNA library construction process(Illumina)

चित्र 7. mRNA लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया(इलुमिना)

2.1 आरएनए संवर्धन

चाहे यूकेरियोट्स या प्रोकैरियोट्स से निपटना हो, राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए) सबसे प्रचुर मात्रा में पाया जाने वाला आरएनए है, जो कुल आरएनए सामग्री का 80% तक होता है। जब किसी नमूने के कुल आरएनए को सीधे अनुक्रमित किया जाता है, तो अनुक्रमण डेटा का एक बड़ा हिस्सा आरआरएनए से संबंधित होगा। इस हस्तक्षेप को कम करने के लिए, आरएनए संवर्धन की विधि को नियोजित किया जाना चाहिए। इसके लिए दो प्राथमिक विधियाँ हैं: ऑलिगो-डीटी पर आधारित mRNA संवर्धन और आरआरएनए कमी विधियाँ।

यूकेरियोट्स में, mRNA 3' छोर पर एक विशिष्ट पॉली (A) संरचना प्रदर्शित करता है। ओलिगो-डीटी बीड्स का उपयोग नमूने से ट्रांसक्राइब किए गए सभी mRNA को कैप्चर करने के लिए किया जा सकता है, जिससे यह ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण के लिए उपयुक्त हो जाता है, खासकर उच्च गुणवत्ता वाले RNA नमूनों के साथ। दूसरी ओर, rRNA कमी विधियों में नमूना गुणवत्ता पर अधिक उदार आवश्यकताएँ होती हैं और इन्हें कम गुणवत्ता वाले नमूनों (जैसे, FFPE नमूने) और उच्च गुणवत्ता वाले RNA नमूनों, साथ ही प्रोकैरियोटिक नमूनों दोनों पर लागू किया जा सकता है। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले व्यावसायिक दृष्टिकोण में rRNA को हटाने के लिए RNase H पाचन का उपयोग शामिल है, इन विशिष्ट चरणों का पालन करते हुए:

rRNA से बंधने के लिए डिज़ाइन किए गए विशिष्ट ऑलिगोन्युक्लियोटाइड जांच को संश्लेषित करना।
आरएनएएस एच (कैट#12906) का उपयोग करें, जो आरएनए-डीएनए हाइब्रिड स्ट्रैंड में आरएनए को विघटित करने में सक्षम है, ताकि जांच से बंधे आरआरएनए को चुनिंदा रूप से हटाया जा सके।
अंत में, डीएनए जांच को पचाएं डीएनएसे I (कैट#10325), जो सिंगल और डबल स्ट्रैंडेड डीएनए दोनों को नष्ट कर सकता है, प्रभावी रूप से rRNA को खत्म कर सकता है। DNase I के बारे में अधिक जानकारी के लिए, आप इस लिंक का अनुसरण कर सकते हैं।

Schematic diagram of enzyme-based rRNA depletion

चित्र 8: एंजाइम-आधारित rRNA कमी का योजनाबद्ध आरेख^[5]

2.2 आरएनए विखंडन

आमतौर पर, द्विसंयोजी धातु धनायनों और उच्च तापमान की क्रिया के तहत, आरएनए के बड़े टुकड़े छोटे टुकड़ों में टूट जाते हैं।

2.3 प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण

प्राप्त लक्ष्य आरएनए का सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड में रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन। चूँकि आरएनए पर्यावरण में मौजूद आरएनएज़ द्वारा आसानी से विघटित हो जाता है, इसलिए इसका उपयोग RNase अवरोधक (कैट#14672) रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के दौरान इन एंजाइमों की गतिविधि को रोका जा सकता है और आरएनए को आरएनएएस गिरावट से बचाया जा सकता है। साथ ही, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (कैट#11112) टेम्पलेट आरएनए को सीडीएनए में रिवर्स ट्रांसक्राइब करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेज़ में आरएनए-निर्भर डीएनए पॉलीमरेज़ गतिविधि होती है और यह 5'→3' दिशा में सीडीएनए को संश्लेषित करने के लिए टेम्पलेट के रूप में आरएनए का उपयोग कर सकता है। डीएनए का एकल स्ट्रैंड आरएनए टेम्पलेट का पूरक है।

प्रथम वर्ष के दौरान स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण में, एक्टिनोमाइसिन डी के समावेश ने निस्संदेह स्ट्रैंड-विशिष्ट पुस्तकालयों के निर्माण में सुधार किया है, जिससे श्रृंखला विशिष्टता में उल्लेखनीय वृद्धि हुई है। इस नवाचार ने प्रयोगात्मक प्रक्रिया को सुव्यवस्थित किया है, जिससे शोधकर्ताओं के लिए यह सरल हो गया है।

हालांकि, एक्टिनोमाइसिन डी की अपनी कमियां हैं: यह विषाक्तता प्रदर्शित करता है और इसे प्रकाश से सुरक्षा की आवश्यकता होती है। प्रीमिक्स और प्लेट लाइब्रेरी निर्माण किट की बढ़ती मांग के आज के परिदृश्य में, प्रकाश से बचाव की आवश्यकता प्लेट किट की प्रगति पर सीमाएं लगाती है।

सौभाग्य से, येसेन ज़ाइमएडिटर प्लेटफ़ॉर्म ने एक ग्राउंडब्रेकिंग एमएमएलवी एंजाइम म्यूटेंट (इनक्वायरी) पेश किया है जो एक्टिनोमाइसिन डी के कार्य को प्रतिस्थापित करता है। किट (कैट: 12340ES) को गंधहीन, गैर विषैले और एन के साथ विकसित किया गया हैओ से बचने की जरूरत है प्रकाश। यह बेहतर श्रृंखला विशिष्टता प्रदान करता है, स्वास्थ्य और प्रकाश संवेदनशीलता से संबंधित चिंताओं को दूर करता है।

चित्र 9: एम.एम.एल.वी. उत्परिवर्ती की पहचान करने के लिए एम.एम.एल.वी. की इंजीनियरिंग, जो स्टैन्डिड आर.एन.ए.-सीक्वेंस में योगदान कर सकती है

2.4 द्वितीय स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के माध्यम से उत्पादित सिंगल-स्ट्रैंड cDNA अत्यधिक अस्थिर होता है, जिसके कारण DNA पॉलीमरेज़ I के प्रभाव में cDNA के दूसरे स्ट्रैंड के तत्काल संश्लेषण की आवश्यकता होती है। इस दूसरे स्ट्रैंड संश्लेषण के दौरान, RNA-DNA हाइब्रिड संरचना से RNA स्ट्रैंड को हटाकर RNase H काम में आता है। यह साथ मिलकर काम करता है डीएनए पॉलीमरेज़ I (कैट#12903) cDNA के पूरक दूसरे स्ट्रैंड के उत्प्रेरक संश्लेषण को सुविधाजनक बनाने के लिए। DNA पॉलीमरेज़ I में 5'→3' DNA पॉलीमरेज़ गतिविधि होती है और, एक टेम्पलेट और प्राइमर द्वारा निर्देशित, एक अनुक्रम को संश्लेषित करता है जो 5'→3' दिशा में एकल-स्ट्रैंड cDNA को पूरक करता है।

प्रक्रिया के बाद के चरणों में एंड रिपेयर, डीए-टेलिंग, एडेप्टर लिगेशन और पीसीआर एम्पलीफिकेशन शामिल हैं, जिनमें से सभी डीएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया में विस्तृत हैं और यहां उन्हें दोहराने की आवश्यकता नहीं है। यह ध्यान देने योग्य है कि एक बार रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पूरा हो जाने के बाद, न्यूक्लिक एसिड के टुकड़े के आगे विखंडन की कोई आवश्यकता नहीं है।

3. डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण में एनजीएस कोर एंजाइम्स के लिए दिशानिर्देश

येसेन एक जैव प्रौद्योगिकी कंपनी है जो तीन प्रमुख जैविक अभिकर्मकों: अणुओं, प्रोटीन और कोशिकाओं के अनुसंधान, विकास, उत्पादन और बिक्री में लगी हुई है। येसेन बायोटेक कंपनी NGS लाइब्रेरी निर्माण से संबंधित विभिन्न प्रकार के एंजाइम बनाती है। आप नीचे दिए गए चार्ट से सबसे उपयुक्त लाइब्रेरी निर्माण उत्पाद चुन सकते हैं।

तालिका नंबर एक।डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण में एनजीएस कोर एंजाइम्स के लिए दिशानिर्देश

प्रकार	उत्पाद की स्थिति	प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली#
आरएनए लाइब्रेरी निर्माण	आरआरएनए कमी/द्वितीय स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण	आरएनएसे एच	12906ईएस
	आरआरएनए रिक्तिकरण	पुनः संयोजक DNase I	10325ईएस
	प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण	म्यूरिन आरएनेज़ अवरोधक	14672ईएस
	प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण	हाईफेयर^टीएम IV रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (पूछताछ)	11112ईएस
	द्वितीय स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण	डीएनए पॉलीमरेज़ I	12903ईएस
आरएनए लाइब्रेरी निर्माण और डीएनए पुस्तकालय निर्माण	मरम्मत समाप्त करें	टी4 डीएनए पोलीमरेज़	12901ईएस
	मरम्मत समाप्त करें	टी4 पॉलीन्यूक्लियोटाइड काइनेज	12902ईएस
	डीए-टेलिंग	एस-टैक डीएनए पोलीमरेज़	13486ईएस
	एडाप्टर बंधन	जल्दी टी4 डीएनए लाइगेस	10301ईएस
	पीसीआर विस्तारण	2×सुपर कैनेस® II लाइब्रेरी एम्पलीफिकेशन के लिए हाई-फिडेलिटी मिक्स	12621ईएस

तालिका2.डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी तैयारी किट

	नाम	बिल्ली#	नोट्स
डीएनए	Hieff NGS डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट	13577ईएस	ट्यूमर/ मैकेनिक विधि
	Hieff NGS OnePot प्रो डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट V2	12194ईएस	ट्यूमर/ एंजाइमेटिक विधि
	हाईफ़ एनजीएस वनपॉट इल्युमिना के लिए II DNA लाइब्रेरी तैयारी किट	13490ईएस	पैथजन/ एंजाइमेटिक/ नियमित समय (140मिनट)
	Hieff NGS वनपॉट फ्लैश डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट	12316ईएस	रोगजनक/ एंजाइमेटिक/ अल्ट्राफास्ट (100मिनट)
	हाईफ़ एनजीएस डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी सह-तैयारी किट V2	12305ईएस	रोगजनक/ एंजाइमेटिक/ डीएनए और आरएनए सह-तैयारी
शाही सेना	हाईफ़ एनजीएस अल्टिमा डुअल-मोड mRNA लाइब्रेरी तैयारी किट	12308ईएस	बिना ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती, 11 ट्यूब
	हाईफ़ एनजीएस अल्टिमा डुअल-मोड mRNA लाइब्रेरी तैयारी किट	12309ईएस	ओलिगो डीटी चुंबकीय मोती प्लस, 14 ट्यूब
	Hieff NGS® अल्टिमा डुअल-मोड RNA लाइब्रेरी तैयारी किट	12310ईएस	पूर्वमिश्रित संस्करण, 5 ट्यूब
	Hieff NGS ® EvoMax RNA लाइब्रेरी तैयारी किट (प्रीमिक्स संस्करण) (एक्टिनोमाइसिन डी मुक्त)	12340ईएस	पूर्वमिश्रित संस्करण, (एक्टिनोमाइसिन डी मुक्त)
	Hieff NGS® MaxUp rRNA कमी किट (प्लांट)	12254ईएस	पौधा
	Hieff NGS® MaxUp मानव rRNA कमी किट (rRNA और ITS/ETS)	12257ईएस	इंसान

संदर्भ:

[1] मार्डिस, एलेन आर. नेक्स्ट-जेनेरेशन सीक्वेंसिंग प्लेटफॉर्म[जे]. एनालिटिकल केमिस्ट्री की वार्षिक समीक्षा, 2013, 6(1):287-303.
[2] गुलिलाट एम, लैम्ब टी, टेफ्ट डब्ल्यूए, एट अल. रीसिशन मेडिसिन के लिए एक उपकरण के रूप में लक्षित अगली पीढ़ी की अनुक्रमण [जे]। बीएमसी मेडिकल जीनोमिक्स, 2019, 12(1):81.
[3] लुंडबर्ग के.एस., डैन डी.एस., एडम्स एम., एट अल. पाइरोकोकस फ्यूरियसस से पृथक थर्मोस्टेबल डी.एन.ए. पोलीमरेज़ का उपयोग करके उच्च-निष्ठा प्रवर्धन [जे]. जीन, 1991, 108(1):1-6.
[4] मियाज़ाकी के. एंडोन्यूक्लिअस वी के साथ रैंडम डीएनए विखंडन: डीएनए शफलिंग के लिए अनुप्रयोग[जे]। न्यूक्लिक एसिड रिसर्च, 2002, 30(24):e139.
[5] बाल्डविन ए, मॉरिस एआर, मुखर्जी एन. आरएनए-सीक के लिए मानव राइबोसोमल आरएनए को समाप्त करने की एक आसान, लागत प्रभावी और स्केलेबल विधि [जे]। वर्तमान प्रोटोकॉल, 2021, 1(6):e176।

पिछला लेख