Ringkasan

DNA sisa sel inang merupakan pengotor terkait proses yang terlibat dalam produksi biologis, yang tidak hanya mengurangi efektivitas biologis, tetapi juga dapat menimbulkan masalah keamanan seperti sifat menular atau tumorigenisitas. Oleh karena itu, badan pengatur di berbagai negara telah memberlakukan batasan pada jumlah DNA sisa dalam biologis.

Pedoman WHO dan FDA saat ini merekomendasikan DNA residual dalam produk jadi tidak lebih dari 10 ng/dosis, dan FDA juga menyatakan bahwa DNA residual dalam DNA sel inang biologis tidak boleh lebih dari 100 pg/dosis. Prinsip Umum Farmakope Eropa menetapkan bahwa sebagian besar batas DNA residual produk biologis tidak boleh lebih dari 10 ng/dosis, tetapi batas DNA residual vaksin individual lebih ketat, misalnya, DNA residual dalam vaksin yang tidak aktif terhadap hepatitis A tidak boleh lebih dari 100 pg/dosis, dan bahwa DNA residual dalam vaksin terhadap hepatitis B tidak boleh lebih dari 10 pg/dosis. Edisi 2020 dari Farmakope Cina, Bagian III, menetapkan bahwa residu DNA dalam sediaan biologis yang diproduksi pada matriks seluler tidak boleh melebihi 100 pg/dosis, dan residu DNA dalam vaksin yang diproduksi pada matriks bakteri atau jamur tidak boleh melebihi 10 ng/dosis.

Selain itu, untuk metode penentuan residu DNA eksogen, farmakope nasional juga memberikan rekomendasi panduan. Edisi 2017 dari USP40-NF35 General Provision 1130 dari US Pharmacopoeia menjelaskan 3 metode untuk penentuan residu DNA eksogen, yaitu hibridisasi probe DNA, metode ambang batas, dan metode PCR kuantitatif waktu nyata. Farmakope Eropa mengusulkan PCR kuantitatif waktu nyata dan metode imunoenzimatik, yang merupakan 2 metode analitis sensitif untuk mengukur DNA residu dalam sel inang. Farmakope Tiongkok versi 2020 dari tiga aturan umum 3407 juga menetapkan bahwa metode deteksi residu DNA sel inang adalah hibridisasi probe DNA, pewarnaan fluoresensi, dan PCR kuantitatif.

Di antara semuanya, metode qPCR memiliki sensitivitas, spesifisitas urutan dan akurasi yang sangat tinggi, yang dapat menyediakan sarana deteksi yang andal bagi industri biofarmasi dalam penelitian proses dan pengendalian mutu produk jadi, dan kini telah menjadi metode deteksi pilihan bagi setiap produsen produk biologis.

Yeasen Bioteknologi Kit Deteksi DNA Residu

Berdasarkan prinsip qPCR probe fluoresensi, Yeasen telah mengembangkan serangkaian alat deteksi DNA residu sel inang yang cepat dan terspesialisasi, termasuk CHO, HEK293, E.coli, Vero, Human, MDCK, Hansenula polymorpha, Pichia pastoris, dan sebagainya. Alat-alat ini menyediakan deteksi khusus dan cepat residu DNA dalam produk antara, setengah jadi, dan jadi selama pengembangan dan produksi biologik seperti obat antibodi, produk terapi sel dan gen, obat protein rekombinan, dan vaksin.

Fitur

Sensitivitas tinggi: dikembangkan berdasarkan metode qPCR probe fluoresensi dengan LLOD serendah 0.0,5 g/µL;

Akurasi tinggi: pemulihan spiking sampel dalam kisaran 70%~130%;

Spesifisitas tinggi: tidak ada reaktivitas silang dengan DNA yang tidak relevan, mengurangi positif palsu dalam deteksi;

Kepatuhan terhadap peraturan: sepenuhnya divalidasi sesuai dengan Chp, USP, ICHQ2(R1) dan persyaratan lainnya, kinerja sesuai dengan standar peraturan Tiongkok dan asing;

Bekerjasama dengan audit: produksi produk sesuai dengan standar sistem mutu ISO13485, dengan dokumen audit yang sempurna.

Jaminan kualitas: Semua bahan baku kit dikembangkan secara independen, dan qPCR Mix serta produk enzim lainnya diproduksi di pabrik enzim yang sangat bersih.

Aplikasi

Obat AntibodiDeteksi pengotor sisa sel inang
VaksinDeteksi sisa pengotor sel inang
Obat Protein Rekombinan Deteksi pengotor sisa sel inang

Obat terapi sel gen Deteksi sisa pengotor sel inang

Spesifikasi

Program pengujian dan validasi		Standar atau persyaratan referensi	Ncatatan
1. Standar Kit (Standar Referensi)		Pembandingan dengan standar nasional atau Standar yang telah disiapkan
2. Sayatidak bisa mendengar Rmalaikat	Ruang lingkup kurva standar	Lihat manual atau situasi sebenarnya (mis. 30fg/μL~300pg/μL）
	R²	≥0,98 (HalamanYeasen Kit ≥ 0,99)	Persyaratan HCD dalam Farmakope Tiongkok Edisi 3407 Tahun 2020 Ketentuan Umum
	Lereng	-3,1~-3,8 (HalamanYeasen Paket -3.1~-3.6)	Persyaratan HCD dalam Farmakope Tiongkok Edisi 3407 Tahun 2020 Ketentuan Umum
	Efisiensi amplifikasi	90%~110%（（PsKemiringan yang sesuai -3.1~-3.6, Persyaratan dalam industri）
3. Akeakuratan	Penyimpangan dari standar DNA nasional	< 15%
3. Akeakuratan	Contoh tingkat pemulihan lonjakan	50%~150%（Persyaratan dalam industri 70~130%）	Persyaratan HCD dalam Farmakope Tiongkok Edisi 3407 Tahun 2020 Ketentuan Umum
4. PRevisi	Dapat diulang	Tingkat Pendidikan: 15%
4. PRevisi	Presisi menengah	Tingkat Pendidikan: 15%
5. Sspesialisasi		Tidak ada gangguan dengan DNA eksogen
6. Sayameniru kuantifikasi		tingkat fg/μL
Nomor telepon 7. Skestabilan	Pembekuan dan pencairan berulang	10 waktu
	Stabilitas Akselerasi	2~8℃ 30 hari, 37℃ 14 hari
	Periode validitas	Penyimpanan -20°C selama 2 tahun

Angka

Sensitivitas tinggi: LLOQ serendah 0,3 fg/µL, LLOD serendah 0,05 fg/µL.

1.Kisaran linier Kit Deteksi DNA Residu Sel Host CHO (3G) adalah 3fg/μL~300pg/μL, R²=1, efisiensi amplifikasi sebesar 99,29%, dan CV nilai deteksi masing-masing konsentrasi <15%.

Gambar 1. Grafik kalibrasi DNA CHO (3G) (kiri) dan pemetaan linier kurva amplifikasi (kanan)

2. Mendeteksi DNA CHO (3G) pada titik konsentrasi terendah dari lagu standar pada konsentrasi 3fg/uL dan di bawahnya, 10 kali ulangan per konsentrasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada konsentrasi 0,3 fg/uL dan di atasnya, CV <20%, yaitu, batas kuantifikasi Kit Uji Residu DNA Sel Inang CHO (3G) adalah 0,3 fg/uL.

3. Mendeteksi DNA CHO (3G) pada konsentrasi 0,3 fg/μL dan di bawahnya pada batas kuantifikasi (LOQ) 20 replikasi per konsentrasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa laju deteksi 20 sumur replikasi pada konsentrasi 0,05fg/μL dan di atasnya adalah ≥19 (yaitu, laju deteksi ≥95%), yaitu, batas deteksi Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang CHO (3G) dapat mencapai 0,05fg/μL.

Gambar 3. Hasil uji qPCR DNA CHO 0,05fg/μL (3G)

Spesifisitas tinggi: tidak ada reaksi silang dengan DNA sel inang lainnya.

Menilai interferensi DNA genom spesies tikus dengan afinitas tinggi terhadap DNA CHO (3G) serta DNA genom sel yang umum digunakan dalam produksi biologik terhadap reagen deteksi DNA CHO, kurva amplifikasi kelompok interferensi dan kelompok kontrol saling tumpang tindih dan tidak terlihat interferensi (grafik berikut menunjukkan, secara berurutan, data interferensi DNA genom Tikus, HEK293, dan E.coli terhadap reagen deteksi DNA CHO).

Gambar. 4.Hasil percobaan interferensi dengan kit CHO DNA (3G)

Informasi Produk

Kategorisasi	Nomor Barang	Nama Produk	Spesifikasi
Contoh Pra-Perlakuan	18461ES	Kit Persiapan Sampel DNA Residu Magnetik MolPure®	25T/100T
Contoh Pra-Perlakuan	18467ES	Kit Persiapan Sampel MolPure® Mag48 FN	Ukuran 3×16T/6×16T
Instrumen Ekstraksi Asam Nukleat	80511ES	Ekstraktor Asam Nukleat Otomatis 48-Saluran	48 Fluks
Deteksi DNA Residu	41307ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Host Vero (2G)	50T/100T
	41308ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang E.coli (2G)	50T/100T
	41310ES	Kit Deteksi Residu DNA SV40LTA&E1A	50T/100T
	41317ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang Hansenula polymorpha	50T/100T
	41319ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang MDCK	50T/100T
	41323ES	Kit Deteksi Residu DNA Plasmid	50T/100T
	41324ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang S. cerevisiae	50T/100T
	41325ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang Manusia	50T/100T
	41328ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang Pichia pastoris	50T/100T
	41330ES	Kit Deteksi Residu DNA Sf9 dan Baculovirus	50T/100T
	41331ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang HEK293 (3G)	50T/100T
	41332ES	Kit Deteksi Residu DNA Sel Inang CHO (3G)	50T/100T

Artikel sebelumnya Artikel berikutnya

Sensitivitas tinggi, tingkat FG, kit deteksi DNA residual untuk kontrol kualitas produk biologis