Terobosan luar biasa dalam persiapan perpustakaan RNA spesifik untai

Pernahkah Anda menghadapi keraguan saat menyusun pustaka RNA? Kekhawatiran tentang toksisitas reagen tertentu dan kebutuhan untuk bekerja di lingkungan tanpa cahaya bisa sangat membingungkan, terutama saat menangani banyak sampel. Aktinomisin D sering menjadi sumber kekhawatiran ini, karena dikenal karena toksisitas dan sensitivitas cahayanya. Namun, mengapa aktinomisin D disertakan dalam kit pustaka?

Temuan terkini telah mengungkapkan bahwa aktinomisin D memiliki kemampuan untuk menghambat transkripsi. Hal ini dicapai dengan mengikat DNA pada kompleks inisiasi transkripsi, sehingga mencegah pemanjangan rantai RNA oleh RNA polimerase. Pada dasarnya, aktinomisin D mengganggu aktivitas polimerase, sehingga menghambat sintesis untai kedua secara bersamaan selama proses sintesis cDNA. Hal ini memungkinkan penggunaan dUTP sebagai pengganti dTTP dalam sintesis dua untai, yang mengarah pada peningkatan spesifisitas rantai dalam konstruksi pustaka RNA.

Penggabungan aktinomisin D dalam kit penyusun pustaka RNA tidak dapat disangkal telah meningkatkan penyusunan pustaka untai-spesifik, yang secara signifikan meningkatkan spesifisitas rantai. Inovasi ini telah menyederhanakan proses eksperimen, menyederhanakannya bagi para peneliti. Selain itu, inovasi ini telah meningkatkan spesifisitas rantai secara substansial, aspek penting dari penyelidikan ilmiah terkait RNA.

Akan tetapi, aktinomisin D memiliki kekurangan: bersifat toksik dan memerlukan perlindungan dari cahaya. Dalam lanskap permintaan yang meningkat saat ini untuk kit penyusun campuran dan pustaka pelat, kebutuhan untuk melindungi dari cahaya menimbulkan keterbatasan pada pengembangan kit pelat.

Untungnya, tidak ada lagi yang perlu dikhawatirkan tentang aktinomisin D. Yeasen Platform ZymeEditor telah memperkenalkan mutan enzim MMLV yang inovatif yang menggantikan fungsi aktinomisin D. Mutasi enzim MMLV baru ini Kit tidak berbau, tidak beracun, dan tidak beracun.o perlu dihindari cahaya. Produk ini menawarkan spesifisitas rantai yang unggul, menghilangkan masalah yang berkaitan dengan kesehatan dan sensitivitas cahaya.

Tabel 1： Fitur-fitur yang Membedakan YeasenKit Persiapan RNA Lib

Gambar 3. Ketika menggunakan kit yang mengandung aktinomisin D bersama dengan kit baru yang tidak mengandung aktinomisin D, hasil yang diperoleh sebanding untuk kedua kit pada masukan RNA 10 ng dan 1 μg. Namun, pada masukan RNA 4 μg, kit baru tanpa aktinomisin D menunjukkan hasil yang lebih tinggi.

Gambar 4. Pemanfaatan kit baru, yang menampilkan mutan MMLV tanpa penambahan Actinomycin D, menghasilkan spesifisitas untai yang lebih unggul dibandingkan dengan kit yang menggabungkan Actinomycin D. Perbedaan ini menjadi lebih jelas, terutama pada masukan RNA yang lebih rendah sebesar 10 ng.

Yeasen, yang didedikasikan untuk meningkatkan pengalaman pelanggan, terus membuat terobosan baru di bidang kit perpustakaan RNA.

Rekomendasi produk