Yeasen dan Molefuture mengembangkan T4 DNA Ligase Termotoleran dan Fidelitas Tinggi untuk Memerangi Ligasi Palsu

Yeasen dan Molefuture Memperkenalkan T4 DNA Ligase Canggih untuk Mengatasi Tantangan Biologi Molekuler

Yeasen dan Molefuture telah bersama-sama mengembangkan ligase DNA T4 mutakhir menggunakan platform ZymeEditor mereka, yang mengatasi berbagai masalah utama dalam biologi molekuler dan konstruksi pustaka DNA untuk pengurutan generasi berikutnya (NGS). Ligase DNA T4 tradisional menghadapi berbagai tantangan seperti stabilitas yang buruk, pembentukan dimer adaptor yang tinggi, dan ligasi diri fragmen DNA yang tinggi. Enzim baru ini bertujuan untuk mengatasi berbagai keterbatasan ini.

DNA ligase T4, enzim yang bergantung pada ATP, memiliki domain pengikat DNA heliks kompak (DBD), domain nukleotidiltransferase (NTase), dan domain lipatan OB. Dengan menganalisis struktur protein, para peneliti mengidentifikasi residu utama dalam jarak 5 hingga 20Å dari substrat DNA. Dengan menggunakan perangkat komputasi canggih, penyaringan in silico, dan analisis struktur-fungsi, mereka merancang mutan melalui penyelarasan urutan konsensus, yang menggabungkan wawasan struktural-fungsional.

Selain desain rasional, tim menggunakan metode MTPS untuk evolusi terarah, dengan menyaring lebih dari 10.000 mutan untuk mengetahui stabilitas, aktivitas, dan aktivitas residual. Kandidat yang menjanjikan menjalani pemurnian dan pengujian yang ketat. Karakterisasi terperinci dilakukan, mengevaluasi aktivitas, stabilitas, pengikatan diri adaptor, pengikatan diri fragmen DNA, dan hasil DNA.

Para peneliti menggabungkan desain rasional DNA dan mutasi terarah pada mutan G1 untuk mengembangkan varian luar biasa yang cocok untuk berbagai aplikasi. Pendekatan komprehensif ini telah menghasilkan ligase DNA T4 yang sangat efisien dan andal, yang siap meningkatkan penelitian biologi molekuler dan konstruksi pustaka DNA dalam NGS.

Gambar 1. Mengilustrasikan evolusi Versatility T4 DNA Ligase. (A) Desain rasional dari ligase DNA T4. (B) Penyaringan mutan ligase DNA T4 yang toleran terhadap panas pada suhu 45℃, mengarah pada identifikasi mutan dengan aktivitas spesifik yang ditingkatkan secara signifikan. (C) Penyaringan mutan ligase DNA T4 yang bertujuan untuk mengurangi pembentukan dimer adaptor selama persiapan pustaka DNA. (D) Evaluasi hasil perpustakaan retensi pasca perlakuan panas pada suhu 42℃ selama 1 jam menggunakan metode persiapan perpustakaan DNA.
Tabel 1. Yeasen Ligase DNA T4 yang serbaguna bersifat termostabil. Enzim tersebut diperlakukan pada suhu 30℃ selama 5 hari dan dianalisis dengan metode DNA Lib Prep.
Gambar 2. Yeasen Ligase DNA T4 yang serbaguna memiliki kesetiaan yang lebih tinggi dibandingkan dengan ligase DNA T4 tipe liar (WT) yang ditunjukkan dengan lebih sedikit pembentukan dimer adaptor akibat mis-ligasi diri (A) dan (B) yang dianalisis dengan metode DNA Lib Prep.
Gambar 3. Yeasen Ligase DNA T4 serbaguna menunjukkan pembentukan dimer adaptor terendah dibandingkan dengan ligase DNA T4 komersial termasuk ligase termotoleran yang dianalisis dengan metode DNA Lib Prep.
Terobosan ini menunjukkan Yeasen dan komitmen Molefuture terhadap inovasi dan keunggulan dalam rekayasa enzim.

Informasi pemesanan

Nama Kucing# Catatan
Enzim Hieff™ Ligase DNA T4 Serbaguna (600 U/µL) 12996ES Termostat dan Fidelitas Tinggi untuk Deteksi Gen Tumor
DNA Kit Persiapan Pustaka DNA Hieff NGS® 13577ES Tumor/Metode Mekanik
Kit Persiapan Pustaka DNA Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Tumor/Metode enzimatik
Hieff NGS® Satu Pot Kit Persiapan Pustaka DNA II untuk Illumina 13490ES Pathgen/ Enzim/ Waktu reguler (140 menit)
Kit Persiapan Pustaka DNA Flash Hieff NGS® OnePot 12316ES Pathgen/ Enzimetik/ Sangat Cepat (100 menit)
Kit Persiapan Bersama Perpustakaan DNA & RNA Hieff NGS® V2 12305ES Pathgen/ Enzimetik/ DNA & RNA Co-Prep
RNA Kit Persiapan Pustaka mRNA Mode Ganda Hieff NGS® Ultima 12308ES Tanpa manik magnetik oligo dT, 11 tabung
Kit Persiapan Pustaka mRNA Mode Ganda Hieff NGS® Ultima 12309ES manik magnet oligo dT plus, 14 tabung
Kit Persiapan Perpustakaan RNA Mode Ganda Hieff NGS® Ultima 12310ES Versi campuran, 5 tabung
Kit Persiapan Perpustakaan RNA Hieff NGS ® EvoMax (versi campuran) (aktinomisin D Bebas) 12340ES Versi campuran, (Aktinomisin D Bebas)
Kit Deplesi rRNA Hieff NGS® MaxUp (Tanaman) 12254ES Tanaman
Kit Deplesi rRNA Manusia Hieff NGS® MaxUp (rRNA & ITS/ETS) 12257ES Manusia

Silakan tinggalkan pesan untuk menanyakan tentang data perbandingan kinerja antara enzim ini dan ligase DNA T4 konvensional dan termostabil tingkat atas lainnya.

Tentang Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology adalah anak perusahaan dari Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., yang mengkhususkan diri dalam menyediakan solusi modifikasi enzim yang disesuaikan yang didorong oleh teknologi evolusi enzim. Memanfaatkan sumber daya Yeasen Bioteknologi, Molefuture beroperasi pada enam platform teknologi utama: platform evolusi enzim inovatif ZymeEditor, platform ekspresi efisiensi tinggi multi-host, platform pengembangan proses fermentasi, platform pengembangan proses pemurnian, platform produksi enzim ultra-bersih, dan platform analisis enzim serta kendali mutu. Dengan enam platform teknologi ini, Molefuture dapat menawarkan serangkaian solusi khusus yang lengkap termasuk evolusi yang diarahkan pada enzim, pengembangan enzim baru, pengembangan proses enzim, dan produksi skala-atas tingkat GMP untuk memenuhi permintaan aplikasi enzim di berbagai bidang seperti diagnostik in vitro, biomedis, biologi sintetis, estetika medis, zat antara farmasi, dan lain-lain.

Pertanyaan