La tecnologia di amplificazione isotermica degli acidi nucleici può essere suddivisa in molte categorie in base a diversi principi di amplificazione. Attualmente, la più comune e ampiamente utilizzata è la tecnologia di amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP) sviluppata dallo studioso giapponese Notomi et al. nel 2000. La Bst DNA polimerasi è l'enzima principale della tecnologia di amplificazione isotermica. Qual è la funzione e le prestazioni della Bst DNA polimerasi in LAMP?

1. In che modo la DNA polimerasi Bst svolge un ruolo nel LAMP?
2. Che cosa è la DNA polimerasi Bst Plus liofilizzata?
3. Quali sono le caratteristiche del prodotto? Liofilizzato Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (14405ES)?
4. Quali sono le prestazioni del prodotto liofilizzato? Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (14405ES)?
5. Prodotti correlati
6. Per quanto riguarda la lettura

1. In che modo la DNA polimerasi Bst svolge un ruolo nel LAMP?

La caratteristica tecnica di LAMP è quella di progettare quattro primer per sei regioni del gene target ed eseguire la reazione di amplificazione utilizzando la DNA polimerasi BST in condizioni di temperatura costante di 60~65 ℃, ottenendo un'amplificazione di 109-1010 volte entro 15-60 minuti. La DNA polimerasi Bst ha una forte stabilità termica, attività di spostamento del filamento e attività polimerasica. Può essere un modello di amplificazione rapido, efficiente e specifico in condizioni di temperatura costante senza ciclo di amplificazione di denaturazione termica PCR e completare l'intero esperimento LAMP entro 1 ora.

2. Che cosa è la DNA polimerasi Bst Plus liofilizzata?

La DNA polimerasi Bst Plus liofilizzata viene utilizzata per congelare la DNA polimerasi Bst Plus senza glicerolo, che risolve il problema dell'instabilità dell'enzima Bst senza glicerolo. Allo stesso tempo, questo prodotto ha una forte attività di DNA polimerasi 5 '- 3', attività di spostamento del filamento e tolleranza dUTP, che è più adatta per la reazione di amplificazione isotermica anti-inquinamento, è conveniente per i clienti da utilizzare nella produzione di prodotti liofilizzati.

Figura 1: 14405ES-Bst liofilizzato più DNA polimerasi (60 U/μL, senza glicerolo)

3. Quali sono le caratteristiche del prodotto liofilizzato? Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (14405ES)?

• L'enzima privo di glicerolo, adatto alla liofilizzazione
• Trasporto a temperatura normale per ridurre i costi
• Forte attività di spostamento del filamento, sensibile e stabile
• Rapida dissoluzione e funzionamento comodo

4. Quali sono le prestazioni del prodotto liofilizzato? Buon compleanno Più Il DNA Polimerasi (14405ES)?

4.1 Forma della polvere liofilizzata: rispetto al momento T0, la forma della polvere rimane invariata dopo liofilizzazione a 45 ℃ - 15 GIORNI.

Figura 2. Forma della polvere liofilizzata

4.2 stabilità

Le prestazioni della polvere liofilizzata dopo l'accelerazione termica possono ancora essere coerenti con quelle del reagente liquido e la polvere liofilizzata (14405ES) è
universale e può essere utilizzato per il metodo della tintura fluorescente e per il metodo dell'indicatore di pH.

4.2.1 Metodo di tintura fluorescente——stabilità

Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, le prestazioni della polvere liofilizzata di Bst senza glicerolo dopo T0, 45℃-7 giorni e 45℃-15 giorni di accelerazione termica sono coerenti con quelle della versione liquida dell'enzima Bst senza glicerolo, e l'NTC non raggiunge il picco.

Condizioni sperimentali:

Nota: il gruppo di controllo è una versione liquida senza glicerolo dell'enzima Bst della stessa concentrazione.

Figura 3. Risultati di stabilità

4.2.2 Metodo della tintura fluorescente——Prestazioni dell'enzima Bst dopo la liofilizzazione del sistema RT-LAMP

Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, le prestazioni del prodotto della polvere liofilizzata di Bst senza glicerolo liofilizzata nel sistema RT-LAMP dopo 45 ℃ - 15 giorni erano coerenti con quelle della versione liquida dell'enzima Bst senza glicerolo. Il tasso di rilevamento del prodotto nel gruppo di controllo e nel sistema RT-LAMP dopo la liofilizzazione era rispettivamente del 100% (16/16) e del 94% (15/16).

Condizioni sperimentali:

Nota: il gruppo di controllo è una versione liquida senza glicerolo dell'enzima Bst della stessa concentrazione.

Figura 4. Prestazioni dell'enzima Bst dopo la liofilizzazione del sistema RT-LAMP

4.2.3 Metodo indicatore PH ——Stabilità

Nel sistema di amplificazione dell'indicatore di pH RT-LAMP, rispetto al tempo T0, il tasso di rilevamento della polvere liofilizzata Bst è stato dell'88% (7/8) dopo 45 ℃ - 15 giorni di accelerazione termica.

Condizioni sperimentali:

Nota: il gruppo di controllo è una versione liquida senza glicerolo dell'enzima Bst della stessa concentrazione.

Figura 5. Risultati di stabilità

4.2.4 Metodo indicatore PH——Stabilità di ricongelamento

Nel sistema di amplificazione dell'indicatore di pH RT-LAMP, dopo 45 ℃ - 7 giorni di ricongelamento, le prestazioni sono stabili. Il gruppo di controllo è l'enzima Bst liquido. Rispetto al gruppo di controllo, il tasso di rilevamento di 14405ES dopo l'accelerazione termica è del 94% (30/32).

Condizioni sperimentali:

Nota: il gruppo di controllo è una versione liquida senza glicerolo dell'enzima Bst della stessa concentrazione.

Figura 6. Risultati della stabilità del ricongelamento

4.3 Specificità

Nel sistema di amplificazione del colorante fluorescente RT-LAMP, l'NTC a 48 pozzetti non ha raggiunto il picco e la specificità di 14405ES è stata del 100%.

Condizioni sperimentali:

Nota: il gruppo di controllo è una versione liquida senza glicerolo dell'enzima Bst della stessa concentrazione.

Figura 7. Risultati specifici

5. Prodotti correlati

I prodotti correlati che Yeasen può fornire sono riportati nella Tabella 1.

Tabella 1.Prodotti correlati

6. Per quanto riguarda la lettura

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