La trascrittasi inversa, nota anche come DNA polimerasi RNA-dipendente, è un enzima DNA polimerasi che trascrive l'RNA a singolo filamento in DNA. Le prestazioni della trascrittasi inversa influenzeranno direttamente le prestazioni finali dei reagenti diagnostici molecolari. In risposta ai punti dolenti dei produttori di reagenti diagnostici molecolari, Yeasen ha eseguito la trasformazione direzionale sulla trascrittasi inversa. La trascrittasi inversa ha prestazioni eccellenti ed è ben accolta dai clienti!

1. Qual è la funzione della trascrittasi inversa?
2. Come scegliere la trascrittasi inversa?
3. Perché scegliere la trascrittasi inversa di Yeasen?
4. Prodotti correlati e prestazioni
5. Prodotti correlati

1. Qual è la funzione della trascrittasi inversa?

La trascrittasi inversa è una DNA polimerasi RNA-dipendente. Può trascrivere l'RNA stampo e formare DNA complementare (cDNA). Il cDNA a singolo filamento viene convertito in DNA a doppio filamento utilizzando la DNA polimerasi. Quindi le trascrittasi inverse sono comunemente utilizzate per quantificare il livello di sintesi di mRNA quando combinate con la tecnica della reazione a catena della polimerasi, chiamata RT-PCR. I test quantitativi di RT-PCR sono comunemente utilizzati nella diagnosi delle malattie. Pertanto, la trascrittasi inversa svolge un ruolo importante nella ricerca scientifica e nell'applicazione pratica.

2. Come scegliere la trascrittasi inversa?

Le comuni trascrittasi inverse sono M-MLV e AMV, tra cui M-MLV è migliore di AMV. Ma gli enzimi RT convenzionali hanno due siti attivi, uno che esegue le attività della polimerasi e un altro che esegue l'attività della ribonucleasi H. La RNasi H è un'endonucleasi in grado di degradare la frazione di RNA della famiglia degli ibridi DNA-RNA. Pertanto, la trascrittasi inversa priva di attività RNasi H è utile per la sintesi del cDNA. Oltre a ciò, l'utilizzo di una versione termostabile di RT è utile per ridurre l'amplificazione non specifica dell'acido nucleico e minimizzare l'impatto delle strutture secondarie complesse.

3. Perché scegliere la trascrittasi inversa di Yeasen?

Yeasen ha eseguito una modifica direzionale sulla trascrittasi inversa, che rimuove l'attività della RNasi H, migliorando così la capacità di sintesi del cDNA. Utilizzo della tecnologia di evoluzione proteica per migliorare la termostabilità della trascrittasi inversa.

La trascrittasi inversa di Yeasen non solo ha una forte capacità di sintesi, ma anche una forte capacità di tolleranza. Inoltre, Yeasen ha severi requisiti di qualità. È la scelta migliore per la trascrittasi inversa.

4. Prodotti correlati e prestazioni

4.1 Resistente alle alte temperature di 65°C

Utilizzando 500ng di RNA totale di cellule 293T come stampo, la trascrizione inversa è stata eseguita a 42°C-65°C utilizzando Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Prendere 1 μL di cDNA come stampo per amplificare il gene TFRC (4,4 kb).

Figura 1. Eseguire la trascrizione inversa a 42°C-65℃

4.2 Compatibile con modelli complessi

La temperatura di reazione di 55°C può soddisfare la trascrizione inversa di modelli convenzionali e modelli di struttura secondaria, mentre la temperatura di reazione di modelli GC elevati può essere opportunamente aumentata fino a 65°C.

Figura 2.Adatto per modelli ricchi di GC e modelli di struttura secondaria

4.3 Eccellenti prestazioni di estensione

Utilizzando 500ng di RNA totale di cellule 293T come stampo e Oligo(dT) come primer, il cDNA è stato sintetizzato utilizzando Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. Prendi 1 μL di cDNA come stampo per amplificare 500 bp di 5' del gene DY1C1N1 (19,9 kb). I risultati hanno mostrato che Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase può sintetizzare cDNA fino a 19,8 kb.

Figura 3. Possono essere sintetizzati fino a 19,8 kb di cDNA

4.4 Sintesi veloce

Utilizzando l'RNA delle cellule 293T come modello, la trascrizione inversa è stata eseguita secondo la procedura standard nel manuale e il tempo di trascrizione inversa è stato impostato rispettivamente su 5, 10, 15, 30, 45 e 60 minuti. La trascrittasi inversa Hifair™ III può sintetizzare un cDNA da 6 kb in 5 minuti e la sua specificità e resa sono superiori a quelle del marchio V.

Figura 4. Il cDNA da 6 kb può essere sintetizzato in 5 minuti

4.5 Ampia gamma lineare

Utilizzando 5pg-5μg di RNA totale di cellule 293T come stampo, il cDNA è stato sintetizzato utilizzando la trascrittasi inversa Hifair™ III. È stato utilizzato 1 μL di cDNA come stampo ed è stata eseguita una qPCR sui quattro geni e i risultati hanno mostrato che le efficienze di amplificazione erano tutte comprese tra il 98% e il 100,10%. Ciò dimostra che il cDNA può essere sintetizzato in modo efficiente in un'ampia gamma lineare di stampi.

Figura 5. Il cDNA può essere sintetizzato in modo efficiente in un'ampia gamma di modelli

4.6 Rigoroso controllo di qualità

Per garantire la prestazione stabile dell'enzima inverso di Yeasen, Yeasen implementa rigorosamente i requisiti nel processo di produzione per stabilizzare il processo di produzione e garantire la stabilità del lotto. Allo stesso tempo, l'ispezione di qualità è rafforzata per rilevare residui tra cui esonucleasi, nickasi, RNasi, ecc., per assicurarsi che non vi siano residui, per non compromettere gli esperimenti successivi.

Figura 6. Rilevamento dei residui

5. Prodotti correlati

I prodotti forniti da Yeasen sono i seguenti.

Tabella 1. Prodotti correlati

Per quanto riguarda la lettura

La linea guida per la selezione della trascrittasi inversa

YEASEN UDG: L'"esperto anti-fouling" nelle reazioni PCR