Negli ultimi anni, l'incidenza globale delle malattie infettive è aumentata, con patogeni sempre più diversi e complessi. Una sfida significativa in questo scenario è che circa la metà dei pazienti si trova ad affrontare la situazione di avere patogeni sconosciuti, rendendo la diagnosi rapida di questi patogeni un compito arduo. Attualmente, il rilevamento clinico dei patogeni si basa principalmente su metodi di coltura tradizionali, tecniche PCR, sequenziamento metagenomico (mNGS) e sequenziamento mirato ai patogeni (tNGS).
La PCR quantitativa fluorescente in tempo reale ha acquisito importanza nel rilevamento dell'acido nucleico del SARS-CoV-2. Analogamente, l'mNGS ha attirato l'attenzione per il suo contributo alla lotta contro il SARS-CoV-2 ed è passata dagli ambienti clinici all'uso quotidiano. Il tNGS, che offre i vantaggi sia della PCR che dell'NGS, come velocità, accuratezza ed economicità nei servizi di sequenziamento, sta guadagnando sempre più terreno nel campo dei test clinici.
Contemporaneamente, l'applicazione dei prodotti biologici si è estesa alla biomedicina, all'agricoltura biologica, alla bioenergia, alla produzione biologica, alla protezione ambientale e ad altri domini. Poiché la quota di mercato dei prodotti biologici continua a crescere, gli enti governativi e le autorità competenti hanno stabilito sistemi di gestione della qualità standardizzati e standard per questi prodotti. Un'area di attenzione particolare riguarda la presenza di residui di acido nucleico dalle cellule ospiti nei prodotti biologici.
Prodotti biologici come farmaci proteici ricombinanti, farmaci anticorpali, vaccini e terapie cellulari e geniche vengono prodotti utilizzando ceppi o linee cellulari consecutivi, con conseguente potenziale ritenzione di acidi nucleici dell'ospite nei prodotti finali. Gli acidi nucleici residui dell'ospite possono avere conseguenze negative, come la proliferazione cellulare incontrollata che porta alla formazione di tumori o all'esacerbazione delle risposte immunitarie mediante l'introduzione di geni virali. Pertanto, un'efficace rimozione dei residui di acido nucleico e un rigoroso rilevamento dei residui sono fondamentali per garantire la sicurezza dei prodotti biologici e soddisfare i requisiti di ricerca. Nel settore, i metodi qPCR/RT-qPCR sono ampiamente impiegati per sviluppare kit di rilevamento per il rilevamento dei residui di acido nucleico dell'ospite nei prodotti biologici.
Inoltre, gli enzimi molecolari commerciali sono in genere espressi utilizzando ceppi ingegnerizzati ricombinanti, come E. coli, con conseguente presenza di DNA genomico dell'ospite in questi enzimi molecolari. Inoltre, fattori ambientali e umani possono introdurre DNA contaminato nei prodotti enzimatici molecolari.
Durante il processo di rilevamento del patogeno, gli acidi nucleici batterici di fondo derivanti dalla contaminazione possono oscurare gli acidi nucleici target con bassa abbondanza o essere rilevati insieme agli acidi nucleici target. Ciò può influire sulla sensibilità del rilevamento target o portare a risultati falsi positivi, complicando la diagnosi e le decisioni terapeutiche prese dai professionisti medici.
Nello sviluppo e nella produzione di prodotti di controllo qualità per i test sui residui di acidi nucleici dell'ospite, la presenza di acidi nucleici residui dell'ospite, inclusi quelli di esseri umani, topi, Escherichia coli, lievito e altri, negli enzimi molecolari può portare a imprecisioni nella quantificazione dei prodotti di controllo qualità dei residui di acidi nucleici dell'ospite. Ciò pone potenziali rischi per la sicurezza nella produzione di prodotti biologici.
UCF.ME di YEASENTM soluzione enzimatica molecolare a bassissimo residuo
Per risolvere il problema dell'interferenza dei batteri di fondo e dei residui di acido nucleico dell'ospite, YEASEN ha creato una piattaforma completa di R&S e produzione per UCF.METM enzimi molecolari a residui ultra-bassi. E ha raggiunto la produzione su larga scala di una varietà di UCF.METM enzimi molecolari a residui ultra-bassi attraverso la selezione dei materiali, il controllo ambientale, l'ottimizzazione dei processi e la garanzia della qualità.
UCF.ME di YEASENTM prodotti enzimatici molecolari a bassissimo residuo
YEASEN ha riformato un set completo di enzimi molecolari come qPCR/RT-qPCR, NGS library building. Allo stesso tempo, UCF.ME™ il processo a residui ultra bassi viene utilizzato per elaborare prodotti enzimatici molecolari, possiamo fornire un set completo di materie prime enzimatiche molecolari ad alte prestazioni e a residui ultra bassi per qPCR/RT-qPCR e NGS A migliorare la precisione del rilevamento.
Tavolo 1 L'elenco di YEASEN UCF.METM prodotti enzimatici molecolari a bassissimo residuo
| Classificazione del prodotto | Nome del prodotto | Numero di catalogo | Criteri di Escherichia coli Controllo di qualità del gDNA |
| Italiano:TM prodotti enzimatici a bassissimo residuo per qPCR/RT-qPCR | Italiano: Hieff UCF.METM Taq DNA polimerasi sensibile all'avvio a caldo (5 U/μL) | 14314ES | <0,005 copie/unità |
| Hifair UCF.METM V Trascrittasi inversa (200 U/μL) | 14608ES | <0,005 copie/U | |
| Italiano:TM Inibitore della RNasi murina (40 U/μL) | 14672ES | <0,001 copie/unità | |
| Italiano:TM Inibitore RNasi ad alta affinità (40 U/μL) | 14675ES | <0,001 copie/unità | |
| Italiano:TM Uracile DNA glicosilasi (UDG/UNG), termolabile, 1 U/μL | 14466ES | <0,1 copie/unità | |
| Italiano:TM Uracile DNA glicosilasi (UDG/UNG), 1 U/μL | 14454ES | <0,1 copie/unità |
Presentazione parziale dei dati (UCF.ME)TM Un esempio è la Taq DNA Polimerasi sensibile all'avvio a caldo)
- ResiduoDi coli DNA generico ＜0.005 copie/U
- coliResidui di gDNA di diversi lotti di UCF.METMSono stati rilevati gli enzimi Taq (Cat#14314ES). Il risultato ha mostrato che Escherichia coli residui di gDNA residui di Taq DNA polimerasi erano ben al di sotto di 0,005 copie/U.
Figura 1: Rilevamento di Escherichia coli GResiduo di DNA di UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES)
- Non è stato rilevato alcun DNA plasmidico residuo
Residui di DNA plasmidico di UCF.METM Sono stati rilevati l'enzima Taq (Cat#14314ES) e la Taq DNA polimerasi del marchio A. I risultati hanno mostrato che c'era un residuo di DNA plasmidico nella Taq DNA polimerasi del marchio A. Nessun DNA plasmidico è stato rilevato in UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES).
Figura 2: Risultati del rilevamento dei residui di DNA plasmidico
- Non sono stati rilevati undici tipi di batteri di fondo comuni
Utilizzare UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES) accoppiato con primer e sonde di Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Stenotrophomonas maltophil, Streptococco pneumoniae, Enterococco faeciale, Stafilococco aureo, Escherichia coli, Enterococco fecale per preparare il premix qPCR. È stato rilevato NTC (No Template Control), i risultati hanno mostrato che non sono stati rilevati residui degli 11 batteri di fondo comuni di cui sopra in UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES).
Figura 3: Risultati dei test di 11 batteri di fondo comuni (limitati dallo spazio, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens E Klebsiella pneumoniae sono mostrati come esempi)
- Presentazione del caso di prova del cliente
L'enzima Taq commerciale e YEASEN UCF.METM L'enzima Taq (Cat#14314ES) è stato utilizzato per rilevare l'NTC insieme al cliente Escherichia coli primer specifico, e i risultati hanno mostrato che l'enzima Taq commerciale ha raggiunto il picco 5 volte in 22 esperimenti ripetuti. L'UCF.METM L'enzima Taq (Cat#14314ES) non ha raggiunto il picco in 22 repliche, indicando che l'UCF.METM L'enzima Taq (Cat#14314ES) non è stato rilevato Escherichia coli DNA generico.
Figura 4: Devocazione risultato di E.coli Residuo di gDNA (caso di prova del cliente)
A sinistra: enzima Taq convenzionale disponibile in commercio; a destra: UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES)
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